英 永, 夏玉潔, 湯連升, 賈嬋媛, 張海靜, 胡建廷

(1. 山東省藥學(xué)科學(xué)院, 山東省化學(xué)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 濟(jì)南 250101;2. 青島海華生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司, 青島266000)

SD 大鼠是致癌試驗(yàn)、藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)及科學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。了解SD 大鼠組織臟器自發(fā)性病變背景數(shù)據(jù)，尤其是自發(fā)性的腫瘤性病變，對(duì)于確保研究質(zhì)量至關(guān)重要[1]。但目前國(guó)內(nèi)大鼠自發(fā)性腫瘤背景數(shù)據(jù)十分缺乏，嚴(yán)重影響致癌試驗(yàn)的評(píng)估能力。因此，建立和完善自發(fā)性腫瘤性病變數(shù)據(jù)庫迫在眉睫。對(duì)于藥物安全性評(píng)價(jià)而言，大鼠小腸自發(fā)性腫瘤病變極少[2-3]，國(guó)內(nèi)還未見相關(guān)報(bào)道[4-7]，且根據(jù)中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(CFDA) 相關(guān)指導(dǎo)原則，毒性病理學(xué)研究只是選取部分腸段組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，并未對(duì)整段腸道進(jìn)行常規(guī)組織病理學(xué)檢查，可能導(dǎo)致許多腫瘤被忽視或漏診。本文闡述本實(shí)驗(yàn)室開展的26 周SD 大鼠灌胃重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)中空白對(duì)照組雄性大鼠出現(xiàn)1 例回腸黏液性腺癌，為SD大鼠藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)和致癌試驗(yàn)評(píng)價(jià)研究中自發(fā)性腫瘤病變數(shù)據(jù)整理提供依據(jù)。

1 患病動(dòng)物概況及剖檢

雄性SD 大鼠，34~35 周齡，來源于26 周重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)空白對(duì)照組。麻醉、放血處死后，摘取心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺、淋巴結(jié)、腦、垂體、腎上腺、甲狀腺、胰腺、大腸、小腸、胸骨、股骨、睪丸、附睪、前列腺、精囊、骨骼肌、眼、哈氏腺及皮膚乳腺等組織，檢查所摘取組織的部位、顏色、形狀和大小有無異常。

2 病理學(xué)檢查

2.1 肉眼形態(tài)學(xué)觀察

小腸的回腸漿膜層可見3 處黃白色、水螅樣的結(jié)節(jié)，凸出回腸壁，其中兩處相隔距離較近(圖1A)，另一處較遠(yuǎn)，且與大腸的直腸系膜組織相粘連。3 個(gè)結(jié)節(jié)大小分別為1.4 cm×1.3 cm、0.7 cm ×0.5 cm、0.4 cm ×0.3 cm。切開結(jié)節(jié)，可見切面呈魚肉樣(圖1B)，且結(jié)節(jié)中心質(zhì)地較軟，呈凝膠狀，腸腔內(nèi)容物比較黏稠。其中2 個(gè)結(jié)節(jié)明顯凸進(jìn)腸腔，導(dǎo)致腸腔變狹窄。其他受檢組織/臟器的顏色、形狀和大小均未見異常。

2.2 組織病理學(xué)檢查

對(duì)所取組織用體積分?jǐn)?shù)10%的中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、5μm 切片、HE 染色用于組織學(xué)檢查。同時(shí)為了進(jìn)一步深入研究，對(duì)回腸結(jié)節(jié)進(jìn)行Masson 三色膠原染色及阿利新藍(lán)-過碘酸-雪夫(AB-PAS)染色(pH2.5)。

圖1 大鼠回腸肉眼形態(tài)學(xué)觀察Figure 1 Gross morphological observation of rat ileum

HE 染色顯示，回腸黏膜層內(nèi)可見許多大小不一、形狀不規(guī)則腺體，結(jié)構(gòu)異型性明顯，局部浸潤(rùn)黏膜下層、肌層及漿膜層(圖2A、2B)。增生的腺體主要以立方至柱狀上皮細(xì)胞組成，上皮細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與杯狀細(xì)胞相似，所圍成的腺腔大小不一，局部腺上皮細(xì)胞扁平或上皮細(xì)胞缺失，僅見纖維結(jié)締組織，有絲分裂象少見。腺腔內(nèi)充滿大量黏液樣物質(zhì)，并混雜大量的細(xì)胞碎片，局部腺腔內(nèi)出現(xiàn)鈣化。間質(zhì)伴有少量淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。AB-PAS 染色顯示增生的腺上皮細(xì)胞質(zhì)及腺腔內(nèi)容物呈陽性，與黏膜層杯狀細(xì)胞染色相似(圖2C)，提示這些上皮細(xì)胞可以產(chǎn)生黏液樣蛋白。Masson 染色間質(zhì)結(jié)締組織呈現(xiàn)藍(lán)色(圖2D)。肺臟及精囊等組織結(jié)構(gòu)正常，未見組織病理學(xué)變化(圖2E、圖F)。綜合病變性質(zhì)、特點(diǎn)及結(jié)構(gòu)異型性等，回腸漿膜層增生的組織診斷為黏液性腺癌。

3 討論

一般情況下，嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自發(fā)性的腸道腫瘤是上皮性來源的腺瘤、腺癌[8]，非上皮性來源的脂肪瘤、脂肪肉瘤、纖維瘤和纖維肉瘤等也見諸報(bào)道[9]。許多化學(xué)物質(zhì)可引起嚙齒類動(dòng)物大腸和小腸腫瘤，其中包括來自天然產(chǎn)物的化學(xué)物質(zhì)如蘇鐵素(偶氮甲烷和二甲肼)、硝基類化合物、蘆薈提取物、滅菌丹、克菌丹、雜環(huán)胺類和硫酸葡聚糖鈉等[10-16]。

Konishi 報(bào)道[10]腸腺癌可以分為4 種類型：①腫瘤從黏膜層突進(jìn)腸腔；②腫瘤侵入到黏膜層，導(dǎo)致腸壁水平增厚；③腫瘤侵入到黏膜層、黏膜下層及肌層，黏膜表面產(chǎn)生潰瘍，但未穿透漿膜層；④腫瘤穿透肌層，在漿膜層形成結(jié)節(jié)。根據(jù)腫瘤侵入位置及形態(tài)學(xué)特征，本文報(bào)道的腺癌應(yīng)該歸于第4 類。盡管未見Chandra 等[17]所報(bào)道的黏液性腺癌可以轉(zhuǎn)移到腸系膜淋巴結(jié)、肺臟及精囊腺等臟器，但Nagayo[18]認(rèn)為如果侵入到漿膜層，即使細(xì)胞異型性小，腫瘤也可能是惡性的。在本例病變中局部腺腔內(nèi)出現(xiàn)鈣化，可能是糖蛋白作為離子交換介質(zhì)的結(jié)果[19]，這在人類腸黏液性腺癌常常見到。同時(shí)黏液性腺癌要區(qū)分于黏液囊腫和印戒細(xì)胞癌等。黏液囊腫是一種非腫瘤性病變，在人體中多見，其發(fā)生原因是堵塞引起黏蛋白大量積聚，從而導(dǎo)致囊腫的形成[20]；當(dāng)腸腔內(nèi)容物顯著增加時(shí)，腸壁及上皮層變薄。印戒細(xì)胞癌又稱黏液細(xì)胞癌，是杯狀細(xì)胞內(nèi)含有大量黏液的癌細(xì)胞。由于細(xì)胞中充滿大量的黏液，把細(xì)胞核擠向一側(cè)，產(chǎn)生類似“戒指樣”外觀。印戒細(xì)胞癌可侵入到黏膜下層、肌層及漿膜層，但癌細(xì)胞無腺腔形成，且細(xì)胞之間缺乏結(jié)合性。

圖2 大鼠部分臟器病理組織學(xué)觀察Figure 2 Histopathological observation of some organs in rats

本文主要報(bào)道藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究中出現(xiàn)的1 例雄性SD 大鼠自發(fā)性回腸黏液樣腺癌，闡釋肉眼形態(tài)學(xué)和組織病理學(xué)特征，為腸道黏液性腺癌診斷提供病理形態(tài)學(xué)參考，進(jìn)一步豐富了本實(shí)驗(yàn)室SD 大鼠藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究中自發(fā)性病變背景數(shù)據(jù)，同時(shí)也豐富了國(guó)內(nèi)SD 大鼠自發(fā)性腫瘤病變數(shù)據(jù)，為致癌試驗(yàn)的合理評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)。