夏天帥 甘藝賢 王庭博 蘭楊勝

摘要 ? ?茶樹病害嚴(yán)重影響茶葉的品質(zhì)和茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。為了明確茶葉的病原菌，為綠色防控提供理論依據(jù)，本研究對(duì)水城縣主要茶園產(chǎn)區(qū)帶病斑的茶樹葉片的病原菌進(jìn)行分離純化和形態(tài)學(xué)鑒定。結(jié)果表明，危害茶樹的病害有4種，分別為茶輪斑病、茶炭疽病、茶新煤病和茶餅病。

關(guān)鍵詞 ? ?茶樹;病害;分離;鑒定;貴州水城

中圖分類號(hào) ? ?S435.711 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2020）12-0135-03 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

茶樹（Camellia sinensi）屬于山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia L.）的灌木或小喬木[1]。我國(guó)是茶樹的發(fā)源地，種植歷史悠久，茶樹的分布范圍廣，主要分布在我國(guó)的云南、貴州、福建、廣東、四川、江西和湖南等地[2-3]。茶樹是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)林木樹種之一，茶樹的嫩葉或老葉采摘后經(jīng)過(guò)加工可以用來(lái)制作飲料，茶樹的種子成熟后可以榨油，茶樹材質(zhì)細(xì)膩的枝干加工后可以用于制作裝飾品，同時(shí)茶樹具有重要的生態(tài)價(jià)值[4-5]。目前，貴州省茶葉種植面積位居全國(guó)第一，截至2019年，茶葉種植面積已逾40萬(wàn)hm2，當(dāng)前茶葉已經(jīng)成為當(dāng)?shù)厝嗣袢罕娒撠氈赂辉鍪盏闹匾魑锝?jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)[6]。水城縣具有適合茶樹生長(zhǎng)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，茶樹也成為了水城縣優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)之一，種植面積超過(guò)5 000 hm2[7]，但隨著茶葉種植面積的不斷擴(kuò)大，經(jīng)營(yíng)管理技術(shù)水平不高，導(dǎo)致茶樹發(fā)生一系列病害且不斷蔓延，危害十分嚴(yán)重[8-9]。茶樹病害已經(jīng)成為限制茶葉生產(chǎn)的重要因子，也顯著影響了茶農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收入。為了掌握水城縣主要茶樹種植區(qū)的主要病害種類，本研究對(duì)水城縣主要茶園進(jìn)行田間調(diào)查采樣，并對(duì)病原菌進(jìn)行初步的分離純化鑒定，旨在摸清水城縣主產(chǎn)茶園的主要病害，初步鑒定出病原菌種類，以期為茶樹病害綠色防治提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗(yàn)材料

2019年7月在水城縣主要茶園產(chǎn)區(qū)采摘帶病斑的茶樹葉片，將采集到的茶樹葉片裝入牛津紙袋帶回實(shí)驗(yàn)室分離、培養(yǎng)、純化后使用。

1.2 ? ?試驗(yàn)方法

1.2.1 ? ?茶葉病原采集。在茶樹生長(zhǎng)旺盛期，深入到水城縣主要茶產(chǎn)區(qū)對(duì)具有典型病害癥狀的茶樹葉片進(jìn)行觀察和拍照，詳細(xì)記錄取樣點(diǎn)的經(jīng)緯度和海拔信息。茶樹葉片取樣點(diǎn)詳情見表1。

1.2.2 ? ?茶葉病原菌分離與純化。茶樹病害病原菌的分離采用組織分離法[10]，選擇具有典型病害的單個(gè)病斑，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行無(wú)菌操作，用剪刀或解剖刀從病斑邊緣的病健交界處切取3～4 mm的小塊;置于酒精中浸泡3～5 s后，將病斑組織移入l%次氯酸鈉中3～5 s，進(jìn)行表面消毒，然后用無(wú)菌水連續(xù)漂洗3次，去除組織上殘留的次氯酸鈉;然后將病斑組織接種到PDA培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)皿倒置，用封口膜將培養(yǎng)皿封好，放入25 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3～4 d后將長(zhǎng)出的菌絲接種到PDA培養(yǎng)基上純化，3次重復(fù)，純化后的菌株在4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 ? ?茶葉葉片病原菌鑒定。將分離好的菌株接種到PDA培養(yǎng)基上，在25 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)黑暗培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中觀察記錄菌落的顏色、形態(tài)以及生長(zhǎng)情況，在光學(xué)顯微鏡下觀察病原菌的菌絲及孢子的形態(tài)特征。

2 ? ?結(jié)果與分析

2.1 ? ?茶輪斑病

2.1.1 ? ?癥狀。茶輪斑病主要危害茶樹的成葉和老葉，茶輪斑病一般從葉片的尖端或邊緣開始向葉面擴(kuò)展，病斑為褐色與灰白色相間，一般為圓形、半圓形或不規(guī)則形，具有明顯的同心輪紋，病斑上生成黑色小顆粒狀的病原菌分生孢子盤（圖1）。

2.1.2 ? ?病原菌。結(jié)合病害特征和顯微觀察，初步確定為茶輪斑盤多毛孢菌（Pestalotiopsis theae Saw.），屬半知菌亞門黑盤孢目盤多毛孢屬真菌，在25 ℃恒溫培養(yǎng)條件下，菌落為白色，具輪紋，無(wú)滲出物，后期稍呈淡粉紅色;分生孢子呈紡錘形，有4個(gè)隔膜，18～30 μm×7～8 μm，分為5個(gè)細(xì)胞，中間細(xì)胞暗褐色，兩端細(xì)胞無(wú)色，頂端具有鞭毛2～4根，長(zhǎng)25～48 μm（圖1）。

2.1.3 ? ?病情。茶輪斑病是水城縣茶園中普遍發(fā)生的葉部病害，排水不良、土壤板結(jié)、管理粗放的茶園病情嚴(yán)重。

2.2 ? ?茶炭疽病

2.2.1 ? ?癥狀。茶炭疽病危害老葉、成葉、嫩葉和枝干，發(fā)病初期，在葉片正面呈現(xiàn)暗綠色水漬狀病斑，之后慢慢轉(zhuǎn)變成黃褐色，一般從葉片的尖端或邊緣開始向葉面擴(kuò)展，病斑無(wú)輪紋，最后變成灰白色形狀大小不一的斑塊，病健部的分界明顯，常以葉脈的中脈為界（圖2）。

2.2.2 ? ?病原菌。結(jié)合病害特征和顯微觀察，初步確定為茶炭疽盤長(zhǎng)孢菌（Gloeosporium theae-sinensis Miyake.），屬半知菌亞門黑盤孢目盤長(zhǎng)孢屬真菌，在25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)，菌落為白色，菌絲纖細(xì)，細(xì)絨狀，菌落的背面呈黃褐色，無(wú)特殊氣味。分生孢子呈紡錘形，單胞較小，3～6 μm×2.0～2.5 μm，兩端各有1個(gè)小油球（圖2）。

2.2.3 ? ?病情。茶炭疽病是水城縣茶園中普遍發(fā)生的葉部病害，樣品采集地的各茶園均有分布。通常在多雨的年份發(fā)生較多，病情較嚴(yán)重。

2.3 ? ?茶煤病

2.3.1 ? ?癥狀。茶煤病主要危害茶樹葉片，發(fā)病后在葉片甚至枝干上覆蓋一層黑色霉層。發(fā)病初期，葉片表面呈現(xiàn)黑色圓形或不規(guī)則的霉層，之后逐漸擴(kuò)大，最后布滿整個(gè)葉片，嚴(yán)重阻礙茶樹的正常光合作用（圖3）。

2.3.2 ? ?病原菌。結(jié)合病害特征和顯微觀察，初步確定為茶新煤炱（Neocapnodium theae Hara.），屬子囊菌亞門座囊菌目新煤炱屬真菌，菌絲體在顯微鏡下觀察為暗褐色，從菌絲的隔膜處縊斷，產(chǎn)生星狀的分生孢子，子囊座為黑色近卵形，子囊孢子呈橢圓形或梭形，暗褐色，2～4個(gè)隔膜，10～15 μm×4～5 μm（圖3）。

2.3.3 ? ?病情。該病發(fā)生較輕微，蚧類、粉虱類、蚜蟲等害蟲為害茶樹葉片時(shí)，常常會(huì)誘發(fā)茶煤病。

2.4 ? ?茶餅病

2.4.1 ? ?癥狀。茶餅病主要發(fā)生在新抽的嫩葉上，前期會(huì)產(chǎn)生淡黃色的半透明小斑點(diǎn)，之后慢慢擴(kuò)大為圓形斑點(diǎn)，病斑的正面向下凹陷，背面病斑處凸起呈現(xiàn)為餅狀，病斑與健康部位分界明顯，上面有粉狀物產(chǎn)生，前期呈白色，之后慢慢變?yōu)榘岛稚?，上生許多腐生菌（圖4）。

2.4.2 ? ?病原菌。結(jié)合病害特征和顯微觀察，初步確定為茶餅病菌（Exobasidium. vexans Massee.），菌落為紅褐色，致密，菌絲纖細(xì)，無(wú)特殊氣味，背面黑色。擔(dān)子呈棍棒形或圓筒形，30～50 μm×3～5μm，頂生2～4個(gè)小梗，擔(dān)孢子透明，呈腎臟形、長(zhǎng)橢圓形或紡錘形，無(wú)色，11～14 μm×3～5 μm（圖4）。

2.4.3 ? ?病情。茶餅病是水城縣茶園中普遍發(fā)生的葉部病害，秋茶期比春茶期發(fā)生嚴(yán)重，樣品采集地的各茶園均有分布。

3 ? ?結(jié)論與討論

茶葉已經(jīng)發(fā)展成為貴州省支柱性的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)，茶葉病害已經(jīng)成為嚴(yán)重制約茶葉產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸，針對(duì)茶樹病害開展綠色防控尤為重要。本研究通過(guò)對(duì)帶病斑的茶樹葉片分離純化后的菌落進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，結(jié)合病害特征和顯微觀察，共初步鑒定出真菌4種，分別是茶輪斑盤多毛孢菌（Pestal-otiopsis theae Saw.）、茶炭疽盤長(zhǎng)孢菌（Gloeosporium theae-sinensis Miyake.）、茶新煤炱（Neocapnodium theae Hara.）和茶餅病菌（Exobasidium vexans Massee），研究結(jié)果為水城縣茶樹病害的有效科學(xué)防治奠定了基礎(chǔ)，極大地促進(jìn)了當(dāng)?shù)夭枞~產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。但是，由于研究條件的局限性，不能進(jìn)行全面的研究，比如隨著新品種的不斷出現(xiàn)和一些抗藥性病害的突變，也會(huì)有更多病害出現(xiàn)。由于采集標(biāo)本時(shí)間的限制，不能采集到每一個(gè)生長(zhǎng)階段的病害，會(huì)有遺漏采集的病害。此外，對(duì)于病原菌的鑒定只是初步的形態(tài)鑒定，還需進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行分子方面的鑒定。

4 ? ?參考文獻(xiàn)

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