何慧，葉垚君，楊瑤君，付春

樂(lè)山師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，竹類病蟲防控與資源開(kāi)發(fā)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，樂(lè)山 614000

長(zhǎng)足大竹象（Cyrtotrachelus buqueti），屬鞘翅目象甲科，主要分布于四川、重慶、貴州、廣東以及廣西等省區(qū)。長(zhǎng)足大竹象寄主廣泛，危害水竹（Phyllostachys heteroclada）、青皮竹（Bambusa textilis）、崖州竹（Bambusa textilisvar. gracilis）、慈 竹 （Neosinocalamus affinis） 、 綠 竹（Dendrocalamopsis oldhami） 、 撐 綠 雜 交 竹（Bambusa pervaria-bilis×Dendrocalamopsis daii）等約28 種竹種的竹筍。

在世界范圍內(nèi)，每年大約會(huì)有1010～2×1011t 植物有機(jī)物質(zhì)被生產(chǎn)，其中將近一半都為纖維素[1]，同時(shí)纖維素作為飲食中的一種重要的膳食纖維，是自然界最豐富的可再生資源之一。纖維素作為最難降解成葡萄糖的碳水化合物，在其利用過(guò)程中常常沒(méi)有得到充分的利用，從而造成了大量資源浪費(fèi)，因此纖維素如何高效地利用和轉(zhuǎn)化對(duì)于解決當(dāng)前世界能源匱乏、糧食稀缺以及環(huán)境污染等問(wèn)題具有不可或缺的意義[2]。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，纖維素酶由于具有降解速度高、降解底物環(huán)保的優(yōu)點(diǎn)而被廣泛利用，特別是昆蟲內(nèi)源纖維素酶在工業(yè)生產(chǎn)與能源領(lǐng)域等方面得到廣泛關(guān)注與應(yīng)用[3-4]。

大多數(shù)昆蟲體內(nèi)都有纖維素酶，可以消化他們所攝取的食物中的纖維素，從而提供昆蟲正常生長(zhǎng)所需的物質(zhì)和能量。昆蟲纖維素酶首先在白蟻和蟑螂的腸道中發(fā)現(xiàn)[5-6]，然后在細(xì)菌（如大腸桿菌）、放線菌（如馬都拉放線菌）、真菌（如木霉屬的綠色木霉與青霉屬的灰綠青霉）和其他昆蟲（如屬鱗翅目昆蟲的蝗蟲）以及其他動(dòng)物（如白蟻和蝸牛）都檢測(cè)到纖維素酶[7-8]。劉潔麗，王靖[9]中研究發(fā)現(xiàn)：除了昆蟲腸道內(nèi)所含有的共生微生物能夠產(chǎn)生纖維素酶以外，某些特殊的昆蟲體內(nèi)還存在內(nèi)源性的纖維素酶。

昆蟲內(nèi)源性纖維素酶研究以鞘翅目昆蟲最為廣泛，李燕利[6]等研究了12 種甲蟲體內(nèi)的纖維素酶活性，研究發(fā)現(xiàn)除了栗山天牛體內(nèi)檢測(cè)不到內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖苷酶活性，其余實(shí)驗(yàn)組甲蟲體內(nèi)均能檢測(cè)到完整的纖維素酶。徐麗霞[10]等研究了黑胸散白蟻、黃翅大白蟻、象白蟻和鋸白蟻4 種白蟻及其腸道不同組織部位的內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶（EG）、β-葡萄糖苷酶（BG）和外切-β-1，4 葡聚糖酶（CBH）3 種纖維素酶活性，并研究了白蟻腸道不同組織部位的內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶（EG）的分布及多樣性。研究表明，在這研究的4 種白蟻中，EG 酶的比活力均高于BG 酶和CBH 酶。劉新博[11]、段旭[12]等研究了竹蟲體內(nèi)纖維素酶系活性，研究發(fā)現(xiàn)竹蟲體內(nèi)存在完整的纖維素酶系，并對(duì)3 種酶活性大小進(jìn)行了研究為，β-葡萄糖苷酶的底物羧甲基纖維素鈉的降解活性＞外切-β-1，4-葡聚糖苷酶的底物微晶纖維素的降解活性＞內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖苷酶的底物水楊素的降解活性，CB 的最適pH 為7.0，實(shí)驗(yàn)組還設(shè)置了對(duì)底物的不同反應(yīng)時(shí)間和纖維素酶系的分離，結(jié)果顯示，CB 的最適pH 值為7.0，溫度為70 ℃，反應(yīng)時(shí)間為60 min；CMC 的最適pH 值為9.4，溫度為30 ℃，反應(yīng)時(shí)間為40 min；SA 的最適pH 值為8.2，溫度為50 ℃，反應(yīng)時(shí)間為20 min。該研究為接下來(lái)研究長(zhǎng)足大竹象腸道酶活性質(zhì)提供了研究方法和可靠地實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。劉超、萬(wàn)東海[13]等研究了長(zhǎng)足大竹象幼蟲體內(nèi)消化酶活性，并比較出了其體內(nèi)消化酶活性大小為：半纖維素酶 ＞果膠酶 ＞纖維素酶，但對(duì)于體內(nèi)纖維素酶系的活性沒(méi)有做進(jìn)一步研究。盡管各類鞘翅目昆蟲體內(nèi)纖維素酶活性研究較多，但尚未有長(zhǎng)足大竹象幼蟲體內(nèi)纖維素酶活性的比較，本研究選取了長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道的纖維素酶來(lái)作為研究對(duì)象，對(duì)不同的溫度及pH 值條件下對(duì)纖維素酶活性影響進(jìn)行比較研究，篩選出纖維素酶酶活的最佳條件，為開(kāi)發(fā)高效纖維素酶系提供了數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 蟲體來(lái)源

長(zhǎng)足大竹象幼蟲均采于四川省樂(lè)山市沐川縣大楠鎮(zhèn)（N28°58′5.06″，E104°0′6.93″）。

1.2 試劑來(lái)源

水楊素（Salicin）試劑、羧甲基纖維素（CMC）試劑購(gòu)買于Sigma 公司，微晶纖維素（MCC）試劑購(gòu)買于Fluka 公司，其余試劑沒(méi)有特別說(shuō)明均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 初酶液的制備

選取體型大小，生長(zhǎng)狀況大體相同的長(zhǎng)足大竹象幼蟲5 只，在冰浴條件下解剖，完整取出其腸道，再根據(jù)鞘翅目昆蟲腸道分段要點(diǎn)，用解剖針將腸道分成前、中、后腸，分別放在含有0.02 mol·L-1pH 值7.5 的檸檬酸緩沖液的研缽中充分勻漿，然后在溫度為5 ℃、轉(zhuǎn)速為10 000 r·min-1的離心機(jī)上離心20 min，離心管上層的上清液即為長(zhǎng)足大竹象幼蟲各段腸道的原酶液。分別各取3 mL 的5 只幼蟲蟲體的3 段腸道的原酶液與只含相同濃度的檸檬酸緩沖液放入5 mL 的離心管中進(jìn)行對(duì)應(yīng)編號(hào)。分裝好之后放入到-75 ℃的冰箱中保存。

1.4 稀釋酶液的蛋白含量

采用Bradford 法[12]測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。配制1 mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。

取11 支試管，分別用移液管加入濃度為1 mg·mL-1的 標(biāo) 準(zhǔn) 蛋 白 溶 液0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.30、0.50、0.70、0.90 和1.00 mL，用蒸餾水定容到1 mL，再分別用移液管移取加入2.4 mL 考馬斯亮藍(lán)試劑，試管用勻微型旋渦混凝器混勻。最后在酶標(biāo)儀595.0 nm 處測(cè)定這11 支試管的OD 值，構(gòu)建出蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

用移液槍分別移取腸道前、中、后3 段的供試酶液0.05 mL，以及蒸餾水0.05 mL，再分別用移液管移取加入2.4 mL 考馬斯亮藍(lán)試劑，用勻微型旋渦混凝器混勻之后在酶標(biāo)儀595.0 nm 下測(cè)定3 段腸道的OD 值，每個(gè)樣品設(shè)置3 個(gè)重復(fù)組，根據(jù)上述繪制出的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出稀釋后酶液當(dāng)中的蛋白質(zhì)含量。

1.5 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

首先配置1 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

選取8 支相同刻度試管，編號(hào)為1～8，其中編號(hào)為1 的試管為空白對(duì)照組。依次向這8 支試管當(dāng)中加入濃度為1 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12 和0.14 mL，分別用蒸餾水定容至1 mL，再分別加入1.5 mLDNS 顯色劑，搖勻后將其置于沸水浴中加熱5 min。加熱完成后用水冷卻搖勻，在酶標(biāo)儀540.0 nm 處測(cè)定8 支管的OD 值。以這8 支試管當(dāng)中的葡萄糖的濃度來(lái)作為橫坐標(biāo)，酶標(biāo)儀所測(cè)量出的OD 值為縱坐標(biāo)，從而繪制出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6 纖維素酶活性的測(cè)定

從溫度、pH 值兩個(gè)外界因素出發(fā)，探究5 個(gè)不同溫度（分別為30、40、50、60、70℃）和7 個(gè)不同pH 值（分別為3、4、5、6、7、8、9）的35 個(gè)不同的外界因素組合條件下長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道前、中、后段的內(nèi)切β-1，4-葡聚糖酶（Cx 酶）、外切β-1，4-葡聚糖酶（C1 酶）和β-葡萄糖苷酶的活性，并從以下3 個(gè)方面進(jìn)行比較：1）同腸段內(nèi)3 種纖維素酶活性的比較；2）不同腸段內(nèi)同種酶之間活性比較；3）幼蟲不同生長(zhǎng)段的不同酶活性比較。

在測(cè)定Cx 酶的活性時(shí)以濃度為2%的羧甲基纖維素作為底物，在測(cè)定β-葡萄糖苷酶活性時(shí)以濃度為1%的水楊素作為底物，在測(cè)定外切β-1-4-葡聚糖酶活性時(shí)以濃度為1%的微晶纖維素作為底物[13]。底物在進(jìn)行酶促反應(yīng)之前還需要分別用0.2 mol·L-1pH 值為3、4、5、6、7、8 的磷酸二氫鈉-檸檬酸緩沖液和0.2 mol·L-1pH 值=9 的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液來(lái)創(chuàng)造實(shí)驗(yàn)中不同的酸堿度環(huán)境。

分別將0.1 ml 長(zhǎng)足大竹象幼蟲3 段腸道（即前、中和后）的稀釋酶液與上述3 種底物0.3 mL 混合。分別在30、40、50、60、70 ℃水中浸泡2 h后，再向裝有腸段稀釋酶液的試管當(dāng)中加入DNS 顯色劑2 mL。在沸水中顯色5 min 后，將試管置于流動(dòng)水中冷卻，最后在酶標(biāo)儀的540 nm 處測(cè)定OD 值，每支試管的酶液測(cè)定設(shè)置3 個(gè)重復(fù)組，計(jì)算時(shí)取平均值，同時(shí)理應(yīng)設(shè)置空白對(duì)照。以試驗(yàn)條件下酶液蛋白含量（mg）在單位時(shí)間（min）內(nèi)酶促反應(yīng)產(chǎn)生的還原糖（葡萄糖）量（μmol）計(jì)算酶活性，即μmol·min-1·mg-1。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用DPSS22.0 軟件對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 長(zhǎng)足大竹象幼蟲前腸內(nèi)3 種纖維素酶活性與pH 值和溫度的關(guān)系

試驗(yàn)表明，溫度和pH 值對(duì)3 種酶的活性均有顯著影響（見(jiàn)圖1-圖3），β-葡萄糖苷酶的最佳溫度范圍為30～60 ℃，最佳pH 值為4～6，最高酶活性為0.0255 μmol·min-1·mg-1（ pH 值=6，40 ℃） ，當(dāng)pH 值較低（pH 值＜4）、溫度高于40 ℃時(shí)，β-葡萄糖苷酶活性呈上升趨勢(shì)；而當(dāng)pH 值較低（pH 值＞7）、酶活性隨溫度的升高呈現(xiàn)下降趨勢(shì)直至無(wú)活性。在前腸中，當(dāng)β-葡萄糖苷酶在60 ℃時(shí)，活性是隨著pH 值的增加而減小直至無(wú)活性狀態(tài)，即堿性狀態(tài)時(shí)，酶活性更易受到影響；Cx 酶的最適溫度范圍在30～60 ℃，最適pH 值在5～8 之間，最高酶活性為-0.0342 μmol·min-1·mg-1，在較酸或者較堿條件下，該酶活性較低，如在pH 值為3 溫度為30 ℃時(shí)，該酶無(wú)活性；C1 酶的最適溫度為30～60 ℃，最適pH 值為5～8，最高酶活性為0.0342 μmol·min-1·mg-1，在超出最適溫度和最適pH 值后，酶活性均較低或失落（見(jiàn)圖1）。

圖1 長(zhǎng)足大竹象幼蟲前腸纖維素酶活性Fig.1 Cellulase activity in the foregut of Cyrtotrachelus bugueti larvae

2.2 長(zhǎng)足大竹象幼蟲中腸內(nèi)3 種纖維素酶活性與pH 值和溫度的關(guān)系

在長(zhǎng)足大竹象幼蟲中腸中，β-葡萄糖苷酶、Cx酶和C1 酶都受溫度和pH 值的較大影響，3 種酶都只能在最適溫度和最適pH 值條件下表現(xiàn)出相對(duì)較高的活性，其他不適條件活性較低或無(wú)活性（見(jiàn)圖3）。在試驗(yàn)條件下，β-葡萄糖苷酶的最適溫度為30～70 ℃，最適pH 值為4～9，β-葡萄糖苷酶最高酶活0.0262 μmol·min-1·mg-1，在溫度較高或較低，酸堿度較酸或較堿條件下活性均低甚至無(wú)活性；Cx 酶最適溫度為30～60 ℃，最適pH 值為5～8，Cx 酶最高酶活為0.0258 μmol·min-1·mg-1，在超出最適溫度和最適pH值外活性較低；C1 酶的最適溫度為30～70 ℃，最適pH值為4～8，C1 酶最高酶活為0.0343 μmol·min-1·mg-1，在溫度較高或較低，酸堿度較酸或較堿條件下活性均較低。酶間比較發(fā)現(xiàn)，在相同條件下，C1 酶活性最高，且它的溫度范圍和pH 值范圍較大。

圖2 長(zhǎng)足大竹象幼蟲中腸纖維素酶活性Fig.2 Cellulase activity in the midgut of Cyrtotrachelus bugueti Larvae

圖3 長(zhǎng)足大竹象幼蟲后腸纖維素酶活性Fig.3 Cellulase activity in the hindgut of Cyrtotrachelus bugueti Larvae

2.3 長(zhǎng)足大竹象幼蟲后腸內(nèi)3 種纖維素酶活性與pH 值和溫度的關(guān)系

在長(zhǎng)足大竹象后腸中，3 種纖維素酶酶活性均受溫度和pH 值的影響較大，3 種酶都只能在最適溫度和最適pH 值條件下表現(xiàn)出相對(duì)較高的活性，其他不適條件活性較低或無(wú)活性。在試驗(yàn)條件下，β-葡萄糖苷酶的最適溫度為30～70 ℃，最適pH 值為4～8，β-葡 萄 糖 苷 酶 的 最 高 活 性 為0.0274 μmol·min-1·mg-1，在溫度較高或較低，酸堿度較酸或較堿條件下活性均低甚至無(wú)活性；Cx 酶的最適溫度為30-70 ℃，最 適pH 值 為3～8，Cx 的 最 高 酶 活 性 表 現(xiàn) 為0.0279 μmol·min-1·mg-1，在超出最適溫度和最適pH 值外活性較低；C1 酶的最適溫度為30～70 ℃，最適pH 值為3～9，C1 酶最高酶活性為0.0365 μmol·min-1·mg-1，在溫度較高或較低，酸堿度較酸或較堿條件下活性均較低（見(jiàn)圖3）。

2.4 長(zhǎng)足大竹象成蟲腸道各段內(nèi)（前、中、后）β-葡萄糖苷酶活性的比較

β-葡萄糖苷酶在前腸中的最高酶活性為0.0255 μmol·min-1·mg-1（pH 值=6，40 ℃），pH 值值3、7、8、9 時(shí)，該酶均無(wú)活性；β-葡萄糖苷酶在中腸中的最高酶活性為0.0249 μmol·min-1·mg-1（pH值=6，40 ℃），pH 值在3、8、9 時(shí)，該酶存在無(wú)活性狀態(tài)；β-葡萄糖苷酶在后腸中的最高酶活性為0.0273 μmol·min-1·mg-1（pH 值=8，60 ℃）。β-葡萄糖苷酶活性在腸道各段內(nèi)的大小依次是后腸＞前腸＞中腸（圖4）。

2.5 長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道各段內(nèi)（前、中、后）Cx 酶活性的比較

Cx 酶在長(zhǎng)足大竹象成蟲的前腸中的最高酶活性為 0.0249 mol·min-1·mg-1（ pH 值=5，60 ℃） ，pH 值3、8、9 時(shí)，Cx 酶活性較低，pH 值7 開(kāi)始，酶活性逐漸降低且降低趨勢(shì)顯著，推測(cè)這是Cx 酶適生pH 值臨界點(diǎn)；Cx 酶在長(zhǎng)足大竹象成蟲的中腸當(dāng)中 的 最 適 酶 活 性 為0.0258 μmol·min-1·mg-1（pH值=3，60 ℃）。在中腸中，當(dāng)pH 值在3、9 時(shí)，在30～70 ℃的溫度范圍內(nèi)都存在Cx 酶的無(wú)活性狀態(tài)；Cx 酶在長(zhǎng)足大竹象成蟲的后腸當(dāng)中的最適酶活性為0.027 μmol·min-1·mg-1（pH 值=5，70 ℃）。在后腸中，當(dāng)pH 值為3、8、9 時(shí)，在30～70 ℃的溫度范圍內(nèi)β-葡萄糖苷酶無(wú)活性。Cx 酶在長(zhǎng)足大竹象成蟲腸道各段內(nèi)的酶活性大小依次是中腸＞前腸＞后腸（見(jiàn)圖5）。

圖4 長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道3 段中β-葡萄糖苷酶活性比較Fig.4 Comparison of β-enzyme activity in three intestinal segments of Cyrtotrachelus bugueti larvae

圖5 長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道3 段中CX 酶活性比較Fig.5 Comparison of CX enzyme activity in three intestinal segments of Cyrtotrachelus bugueti larvae

2.6 長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道各段內(nèi)（前、中、后）C1 酶活性的比較

前腸C1 酶最高酶活性為0.0342 mol·min-1·mg-1（ pH 值=7，60 ℃） ，pH 值3、 4、 9，溫 度30-70 ℃均無(wú)活性；中腸C1 酶最高酶活性為0.034 μmol·min-1·mg-1（pH 值=7，60 ℃）。pH 值3、4、8、9，溫度30-70 ℃均無(wú)活性；后腸C1 酶最 高 酶 活 性 為0.0365 μmol·min-1·mg-1（pH 值=7，60 ℃），pH 值3、4、7、8、9，溫度30-70 ℃均無(wú)活性。C1 酶在長(zhǎng)足大竹象成蟲腸道各段內(nèi)的酶活性大小依次是后腸＞中腸＞前腸（見(jiàn)圖6）。

圖6 長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道3 段中C1 酶活性比較Fig.6 Comparison of C1 enzyme activity in three intestinal segments of Cyrtotrachelus bugueti larvae

3 討論

劉新博[11]，段旭[12]，劉超[13]等人都研究了竹蟲體內(nèi)纖維素酶系活性，均發(fā)現(xiàn)竹蟲體內(nèi)存在完整的纖維素酶系，并比較出3 種纖維素酶的活性大小，這都為接下來(lái)研究長(zhǎng)足大竹象腸道酶活性質(zhì)提供了研究方法和可靠地實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。測(cè)定纖維素酶活性的方法有很多種，但最主要且運(yùn)用最廣泛的是DNS 顯色法，同時(shí)李燕利，劉新博等人也都運(yùn)用該技術(shù)作為探究纖維素酶的主要手段，這直接作為本研究大足象幼蟲腸道纖維素酶活性的技術(shù)選擇。本研究利用該技術(shù)研究了長(zhǎng)足大竹象幼蟲不同腸道段的纖維素酶活性，結(jié)果表明，長(zhǎng)足大竹象腸道（分前腸、中腸和后腸）中均有完整的纖維素酶系，它們的酶活性大小為后段＞中段＞前段，但各腸道段中的纖維素酶活性基本相同，差異不顯著。通過(guò)設(shè)置pH 值3，4，5，6，7，8，9 等7 個(gè)梯度和溫度為30 ℃，40 ℃，50 ℃，60 ℃，70 ℃等5 個(gè)溫度梯度對(duì)3 種纖維素酶在長(zhǎng)足大竹象幼蟲不同段腸道的酶活性的探究得出，長(zhǎng)足大竹象幼蟲不同段中3 種纖維素酶活性在最適條件下酶的活性大小變化不大，差異不顯著；3 種纖維素酶活性主要受溫度和pH 值的影響，在最適溫度為40～70 ℃具有相對(duì)較高的活性，在最適pH 值為4～7 也具有較高活性，在高溫和低溫以及過(guò)酸和過(guò)堿條件下，檢測(cè)到纖維素酶較低，β-葡萄糖苷酶在pH 值＞7 下，酶活基本不能檢測(cè)到。

對(duì)長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道不同組織部位的纖維素酶活測(cè)定結(jié)果表明，不同組織部位和不同纖維素酶比活力均有可能有較大差異，這種同種組織不同酶比活力的差異可能與腸道內(nèi)酶分解纖維素所起的作用不同有關(guān)[15]，不同組織之間同種酶比活力的差異可能與竹象蟲組織的生理狀態(tài)不同有關(guān)，為進(jìn)一步研究竹象蟲生活習(xí)性奠定基礎(chǔ)。竹象蟲對(duì)于纖維素的需求主要是在幼蟲階段，幼蟲蛀食竹筍、嫩筍，導(dǎo)致竹筍枯死，嫩筍無(wú)法生長(zhǎng)，利用這一差異，可針對(duì)幼蟲纖維素酶分布特點(diǎn)以及酶比活力的不同，研究開(kāi)發(fā)竹象蟲幼蟲防治藥物，減少幼蟲對(duì)竹筍的傷害，為竹林防害提供相關(guān)依據(jù)[16-17]。竹象蟲腸道具有獨(dú)特理化環(huán)境，是消化纖維素的天然工廠，其腸道是共生微生物的生長(zhǎng)繁殖提的理想場(chǎng)所[18]，本文通過(guò)對(duì)長(zhǎng)足大竹象幼蟲腸道不同組織部位纖維素酶活性的初步研究，揭示了長(zhǎng)足大竹象幼蟲體內(nèi)3 種纖維素酶的活性及分布等特征，為進(jìn)一步闡明不同長(zhǎng)足大竹象降解纖維素的機(jī)制和研究竹象蟲對(duì)富含纖維素植物等生物質(zhì)能的合理利用和開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)，為開(kāi)發(fā)利用長(zhǎng)足大竹象內(nèi)源的纖維素酶作為新型的生物質(zhì)能源產(chǎn)業(yè)奠定了一定的科學(xué)基礎(chǔ)[19-20]。

長(zhǎng)足大竹象對(duì)纖維素的降解是一個(gè)復(fù)雜的需要多種酶參與的過(guò)程，同時(shí)也不排除長(zhǎng)足大竹象腸道內(nèi)是否有內(nèi)源纖維素酶的作用。對(duì)于竹象蟲腸道內(nèi)纖維素酶活性的最適反應(yīng)時(shí)間、pH 值、溫度還未精確，同時(shí)本文采用的測(cè)定方法是制備初酶液的，未將纖維素酶提取出來(lái)，對(duì)于如何高效提取腸道內(nèi)纖維素酶的方法還有待研究。