劉針伶 黃溢泓* 全琛宇,2 李志源 周師師 覃艷然 許宗麗 馬小蓉 邱 潔

1.廣西柳州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西柳州545006；2.廣西獸醫(yī)研究所/廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實驗室，南寧530001

口蹄疫（foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染的偶蹄動物疫病[1]。世界衛(wèi)生組織將其列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。目前，我國仍是口蹄疫危害較為嚴(yán)重的國家之一，主要流行O 型和A 型口蹄疫。為控制和消滅口蹄疫，我國將其列為優(yōu)先防治病種之一，采取強(qiáng)制免疫措施，每年投入大量的人力、物力和財力用于疫苗的采購和實施免疫[2]。為客觀評價政府采購的不同廠家生產(chǎn)的豬口蹄疫O型滅活疫苗的免疫效果，以及為論證是否開展豬A型口蹄疫免疫提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，以便制定科學(xué)合理的免疫程序，在柳州某豬場進(jìn)行了4 種豬口蹄疫疫苗免疫效果的評估試驗。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）試驗疫苗。4 種試驗用疫苗為A、B、C、D；A和B 為豬口蹄疫O 型滅活疫苗，C 和D 為豬口蹄疫O 型-A 型二價滅活疫苗；A、C 疫苗由J 公司生產(chǎn)，B、D 疫苗由Z 公司生產(chǎn)。

2）試驗動物。由柳州某豬場提供同一批次45日齡左右健康仔豬約250 頭。

3）檢測試劑?？谔阋逴 型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒、口蹄疫A 型抗體液相阻斷ELISA 檢測試劑盒，由中國蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.2 方 法

1）試驗分組。免疫前進(jìn)行母源抗體檢測，根據(jù)檢測結(jié)果挑選250 頭抗體水平較低（＜6log2）的45日齡左右健康仔豬，隨機(jī)分為13 個試驗組。試驗1A、2A、3A、1B、2B、3B、1C、2C、3C、1D、2D、3D 組 為免疫組，每組20 頭豬；試驗E 組10 頭豬，為空白對照組。試驗1A、2A、3A 組接種J 公司生產(chǎn)的口蹄疫O 型滅活疫苗，試驗1B、2B、3B 組接種Z 公司生產(chǎn)的口蹄疫O 型滅活疫苗，試驗1C、2C、3C 組接種J公司生產(chǎn)的口蹄疫O 型-A 型二價滅活疫苗，試驗1D、2D、3D 組接種Z 公司生產(chǎn)的口蹄疫O 型-A 型二價滅活疫苗。

2）免疫程序。試驗1A、1B、1C、1D 組為1 次免疫組，試驗2A、2B、2C、2D 組為2 次免疫組，試驗3A、3B、3C、3D 組為3 次免疫組。45日齡進(jìn)行首次免疫，接種劑量為2 mL/頭；首免后第28 天進(jìn)行第2 次免疫，接種劑量為2 mL/頭；二免后28 d 進(jìn)行第3 次免疫，接種劑量為2 mL/頭。對照組接種生理鹽水，2 mL/頭。

3）樣品采集。免疫前（首免前2～3 d）采血1 次，檢測口蹄疫母源抗體，首免后每隔3 周（21 d）采血1 次，直至試驗結(jié)束，共采血7 次。首免后，各免疫組每次采不少于10 頭豬的血樣，E 空白對照組每次采不少于5 頭豬的血樣。采集血樣按常規(guī)方法分離血清，用于抗體檢測。

4）檢測方法。按照檢測試劑盒說明書操作。

5）結(jié)果判定?？贵w效價≥6log2，判為合格；抗體效價＜6log2，判為不合格。

2 結(jié)果與分析

試驗豬免疫后，均未觀察到食欲減退、發(fā)燒、跛行等副反應(yīng)癥狀。

首免后21 d，A、B 疫苗O 型抗體合格率就高于70%，達(dá)到國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)；C、D 疫苗O 型抗體效價較低，抗體合格率低于50%。首免后42 d，4 種疫苗1 次免疫組O 型抗體效價均有所下降，A、B 疫苗2 次、3 次免疫組O 型抗體效價上升至8log2～9log2，C、D 疫苗2 次、3 次免疫組O 型抗體效價總體升高，上升至6log2～8log2，4 種疫苗的O 型抗體合格率均高于90%，其中A、B、C 疫苗抗體合格率高達(dá)100%；首免后84 d，A、B 疫苗1 次免疫組O型抗體合格率均低于70%，2 次、3 次免疫組持續(xù)保持較高的O 型抗體水平及抗體合格率，C、D 疫苗各免疫組O 型抗體效價及抗體合格率總體呈較快的下降趨勢?？傮w上看，A、B 2 種疫苗免疫后，特別是多次免疫后均能產(chǎn)生較好的O 型抗體保護(hù)力度，但B 疫苗的抗體保護(hù)持久性及抗體均勻度略優(yōu)于A疫苗；C、D 2 種疫苗經(jīng)多次免疫后能產(chǎn)生較好的抗體保護(hù)力度，但抗體效價持續(xù)時間短，浮動較大，相較而言，C 疫苗效果略高于D 疫苗（表1）。C、D 疫苗各免疫組A 型抗體水平的升降趨勢與O 型抗體基本相同，需2 次免疫以上才能產(chǎn)生較好的A 型抗體保護(hù)力度（表2）。

3 討 論

在本次試驗中，選用政府招標(biāo)的2 家公司生產(chǎn)的O 型滅活苗及O 型-A 型二價滅活苗共4 種疫苗對45日齡健康豬進(jìn)行免疫接種。發(fā)現(xiàn)1 免21 d后，2 種O 型滅活苗抗體合格率就能達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，表明2 種疫苗均能較快地產(chǎn)生良好的抗體保護(hù)力度；2 免后，抗體效價可達(dá)8log2～9log2，抗體合格率高達(dá)100%；免疫后126 d，即171日齡時，經(jīng)2免、3 免的豬群抗體效價仍保持在6log2～8log2，抗體合格率基本保持70%，表明經(jīng)2 次免疫后，2 種疫苗均能產(chǎn)生較高的保護(hù)力度，且抗體能一直處于較高的陽性率水平。在本次試驗中，2 個廠家生產(chǎn)的O 型疫苗免疫效果相差不大。2 種O 型-A 型二價滅活苗1 免后，O 型、A 型抗體陽性率均較低（不到50%），但2 免、3 免后能產(chǎn)生較好的保護(hù)力度，抗體效價能達(dá)6log2～7log2，抗體合格率達(dá)70%以上；但抗體效價持續(xù)時間相對較短，浮動較大，免疫后105 d（即150日齡時），經(jīng)2 免、3 免的豬群抗體合格率略低于70%，表明這2 種疫苗產(chǎn)生的抗體保護(hù)持久性不足，如采用這2 種O 型-A 型二價滅活苗免疫，建議豬出欄前再進(jìn)行1 次免疫。相關(guān)研究表明[3-4]，注射同種疫苗時，免疫次數(shù)越多，抗體水平和合格率越高；劉國民等[5]通過大數(shù)據(jù)監(jiān)測分析建議在正常情況下，口蹄疫首免、二免間隔時間28～30 d，如豬出欄前抗體水平不佳或需壓欄養(yǎng)體重大肥豬，則建議做三免，這與本次試驗的結(jié)果相吻合。本次試驗選用的4 種疫苗均能產(chǎn)生較好的免疫效果，但綜合分析抗體產(chǎn)生速度、抗體保護(hù)持久性及抗體均勻度，O型滅活苗效果優(yōu)于O 型-A 型二價滅活苗，其中B疫苗的效果略高于A 疫苗。

豬口蹄疫O 型-A 型二價滅活疫苗于2017年底獲得新獸藥證書，目前僅2 家公司獲得該產(chǎn)品的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號批件[6]。在本次試驗中，選用了2種O 型-A 型二價滅活苗進(jìn)行免疫，雖然免疫效果低于O 型滅活苗，但經(jīng)2 免、3 免后對A 型、O 型均有一定的保護(hù)率，且O 型抗體水平相對高于A型抗體水平，這與劉國民等[5]報道的一致。據(jù)報道，近年來引起我國疫情發(fā)生的毒株均來源于東南亞國家，O 型、A 型均可通過西南通道傳入我國，其中廣西是高風(fēng)險地區(qū)[2]。目前國內(nèi)流行的A 型優(yōu)勢毒株，豬牛羊均可感染[7]，因此，我國仍需高度重視A型口蹄疫的感染，做好O 型口蹄疫免疫時也要重視A 型口蹄疫監(jiān)測，必要時可以考慮選用O 型-A 型二價滅活苗進(jìn)行免疫防控。

表1 O 型口蹄疫抗體水平及抗體合格率

表2 A 型口蹄疫抗體水平及抗體合格率