魏雅芹 郭 琳,2

（1 徐州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，徐州221004；2 徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，徐州 221006）

神經(jīng)病理性疼痛 (neuropathic pain, NP) 是由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)損傷或疾病而導(dǎo)致的疼痛，其全球患病率為1.5%～8%，患病人數(shù)達(dá)到1 億～5.6 億[1]。據(jù)報(bào)道，約5%～11%的腦卒中病人，8%～10%的帶狀皰疹病人以及14%～26%的糖尿病病人都伴有神經(jīng)病理性疼痛[2]。由于該病發(fā)病率高、疼痛劇烈且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，給病人帶來極嚴(yán)重的身體傷害、心理負(fù)擔(dān)以及巨大的經(jīng)濟(jì)壓力，已成為當(dāng)今臨床醫(yī)學(xué)與新藥開發(fā)的熱點(diǎn)[3]。藥物是目前神經(jīng)病理性疼痛的主要方法，一線用藥有抗驚厥藥（加巴噴丁、普瑞巴林等）和抗抑郁藥（阿米替林、度洛西汀等），阿片類藥物如羥考酮為二線治療藥物。這些藥物臨床治愈率較低，且存在較大的不良反應(yīng)[4]。有研究表明，采用普瑞巴林、加巴噴丁單藥或聯(lián)合用藥治療196 例神經(jīng)病理性疼痛病人，其總體治愈率僅為16.8%，且易出現(xiàn)乏力、嗜睡、頭暈及水腫等不良反應(yīng)[5]。而阿片類藥物則易出現(xiàn)耐藥性甚至痛覺過敏以及成癮、呼吸抑制等不良反應(yīng)。因此，開發(fā)對(duì)病理性疼痛有效、耐受性良好且作用機(jī)制新穎的非阿片類鎮(zhèn)痛藥是當(dāng)今鎮(zhèn)痛新藥研發(fā)的主要目標(biāo)[6]。有文獻(xiàn)報(bào)道，激活5-HT1A自身受體和異源性受體可調(diào)控多種神經(jīng)元的興奮性及神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，對(duì)多種疼痛，如急性、慢性、傷害性及神經(jīng)病理性疼痛均表現(xiàn)出較好的鎮(zhèn)痛效果[7,8]。因此，5-HT1A受體已經(jīng)成為抗神經(jīng)病理性疼痛新藥開發(fā)的一個(gè)重要靶標(biāo)，有多個(gè)藥物處于臨床前及臨床研究階段[9]。

本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新型5-HT1A受體激動(dòng)劑YX0611-1，在多個(gè)病理性疼痛模型中均表現(xiàn)出良好的鎮(zhèn)痛作用[10～12]。但是，該化合物存在生物利用度較低 (11.4%) 和半衰期短 (1.12 h) 等缺點(diǎn)，不宜深入開發(fā)。為了尋找鎮(zhèn)痛作用更強(qiáng)、藥代特性更好的化合物，本實(shí)驗(yàn)室以YX0611-1 為先導(dǎo)化合物，對(duì)其進(jìn)行了一系列結(jié)構(gòu)優(yōu)化和活性篩選，合成了一系列芳烷基苯基哌嗪類化合物，其中化合物9（NH0319，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1）結(jié)構(gòu)新穎，具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)。在小鼠扭體實(shí)驗(yàn)及熱板實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出最強(qiáng)的鎮(zhèn)痛活性，藥代特性良好，具有開發(fā)鎮(zhèn)痛新藥的潛力[13]。本研究擬采用小鼠甩尾實(shí)驗(yàn)，大鼠福爾馬林實(shí)驗(yàn)以及大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷 (spared nerve injury, SNI)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察該化合物的鎮(zhèn)痛效果，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步的研究，為開發(fā)新型作用機(jī)制的神經(jīng)病理性疼痛新藥奠定基礎(chǔ)。

圖1 NH0319 的結(jié)構(gòu)Fig. 1 Structure of NH0319

方 法

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR 小鼠，雄性，18～22 g，由南京青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供；SD 大鼠，雄性，180～220 g，由南京青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)l 周適應(yīng)環(huán)境，飼養(yǎng)期間保持室溫20℃～25℃，相對(duì)濕度40%～70%。

2.藥品與儀器

NH0319（批號(hào)20100521），由江蘇恩華藥業(yè)藥物研究院提供，臨用時(shí)用蒸餾水配成相應(yīng)濃度；福爾馬林（批號(hào)HN20041109），華東試劑工業(yè)公司；鹽酸嗎啡注射液（批號(hào)080606-1），東北制藥集團(tuán)沈陽(yáng)第一制藥；普瑞巴林（批號(hào)E05-20150601），江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品；[3H]8-OH-DPAT，[3H]DAMGO 等同位素配體均購(gòu)自于美國(guó)Perkin-Elmer 公司；5-HT，DAMGO 等非標(biāo)記化合物均購(gòu)自于美國(guó)Sigma 公司；YLS-12A 型鼠尾光照測(cè)痛儀，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司；ElectronicvonFrey 機(jī)械測(cè)痛儀，美國(guó)IITC Life Science 公司；2450-001型液體閃爍計(jì)數(shù)儀，美國(guó)Perkin Elmer 公司。

3.小鼠甩尾實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)時(shí)室溫控制在22℃左右，輻射功率設(shè)為34 W。將ICR 小鼠放入小鼠固定器中，暴露尾部用于光幅照。幅照部位固定在每只小鼠尾部的中、下1/3 處，稍待小鼠安靜后即可進(jìn)行致痛實(shí)驗(yàn)。記錄從照射開始到出現(xiàn)甩尾反應(yīng)的潛伏期，作為其痛閾值。所有小鼠在給藥前先測(cè)2 次基礎(chǔ)痛閾值，基礎(chǔ)痛閾3～6 s 為合格，淘汰不合格的小鼠。將合格小鼠按體重均衡分為5 組，分別為溶媒組、嗎啡組(5 mg/kg)、NH0319 低劑量組(20 mg/kg)、中劑量組(40 mg/kg)及高劑量組(80 mg/kg)，每組12 只。溶媒組及NH0319 給藥組采用灌胃給藥，1 h 后進(jìn)行痛閾值的測(cè)定。嗎啡組皮下注射給藥，30 min 后測(cè)定痛閾值。各組小鼠給藥后均進(jìn)行2 次痛閾值的測(cè)定，每次間隔5 min，取平均值作為給藥后的痛閾值。為保護(hù)小鼠尾巴不受傷害，超過10 s不甩尾者記為10 s。

4.大鼠福爾馬林疼痛實(shí)驗(yàn)

SD 大鼠，按體重均衡分為5 組，分別為溶媒組、嗎啡組(5 mg/kg)、NH0319 低劑量組(20 mg/kg)、中劑量組(40 mg/kg)及高劑量組(80 mg/kg)，除溶媒對(duì)照組13 只大鼠外，其余各組每組10 只大鼠。NH0319 各給藥組灌胃相應(yīng)劑量的藥物，嗎啡組皮下注射嗎啡，溶媒組灌胃等體積的雙蒸水(10 ml/kg)。NH0319 各給藥組及溶媒組大鼠灌胃給藥后60 min，嗎啡組皮下給藥后30 min 進(jìn)行福爾馬林注射，每只大鼠右后肢3、4 趾間皮下注射5% 的福爾馬林，每只注射50 μl，以形成皮丘為造模型成功標(biāo)準(zhǔn)。注射福爾馬林后，立即把大鼠放入觀察盒中進(jìn)行觀察。每只大鼠觀察1 h，用秒表記錄大鼠1 h 內(nèi)I 相(0～5 min)及II 相（15～60 min）縮腿舔足時(shí)間。

5.大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷(spared nerve injury, SNI)實(shí)驗(yàn)

（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、分組及給藥：大鼠術(shù)前先測(cè)定機(jī)械痛閾值 (mechanical withdrawal threshold, MWT)，連續(xù)測(cè)量2 天，取其平均值作為基礎(chǔ)MWT，隨后進(jìn)行SNI 手術(shù)。術(shù)后第13 天再次測(cè)定MWT，以判斷是否造模型成功，術(shù)后MWT 相比基礎(chǔ)MWT 下降40%以上為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)，淘汰造模不成功的大鼠。造模成功的大鼠按MWT 值均衡分組，分別為溶媒組、普瑞巴林組(40 mg/kg,i.g.)、NH0319 低劑量組(20 mg/kg,i.g.)、中劑量組(40 mg/kg,i.g.)及高劑量組(80 mg/kg,i.g.)。溶媒組10 只大鼠，其余各組每組8 只大鼠。手術(shù)后第14、15、16 及17 天灌胃給藥，每天1 次。分別測(cè)定術(shù)后第14 天及第17 天給藥后1 h 的MWT，用于評(píng)價(jià)NH0319 單次給藥及多次給藥的鎮(zhèn)痛藥效。

（2）SNI 模型的制備：采用10% 水合氯醛(350 mg/kg)麻醉大鼠，切開后肢側(cè)面皮膚，鈍性分離股二頭肌，暴露坐骨神經(jīng)及其3 個(gè)分支：脛神經(jīng)、腓總神經(jīng)和腓腸神經(jīng)。分別雙重結(jié)扎脛神經(jīng)、腓總神經(jīng)，在雙重結(jié)扎的中央切斷，并分別去除末端2～4 mm 的神經(jīng)干。術(shù)中避免接觸或牽拉腓腸神經(jīng)，保持其完整。術(shù)后分層縫合傷口，抗生素抗炎。

（3）機(jī)械痛閾值測(cè)量：大鼠置于透明的有機(jī)玻璃箱 (22 cm×12 cm×22 cm) 中，底為0.5 cm×0.5 cm 孔徑的金屬網(wǎng)格機(jī)械性痛覺測(cè)試架。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境30 min。用ElectronicvonFrey 痛覺測(cè)量?jī)x垂直刺激術(shù)側(cè)后肢足底中部，緩慢施加力度，直到大鼠抬足或舔足，此力度為MWT，測(cè)定4 次，為避免或減少前一次刺激對(duì)隨后刺激效應(yīng)造成的影響，同一部位測(cè)量時(shí)間至少間隔3 min，取4 次平均值作為MWT 值。

6.放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)

為了研究化合物NH0319 的鎮(zhèn)痛作用靶點(diǎn)，選取中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與鎮(zhèn)痛藥效或不良反應(yīng)相關(guān)的21 個(gè)受體進(jìn)行了放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，這些受體包括阿片類 (mu、kappa、delta) 受體，5-羥色胺 (5-HT1A、5-HT1B、2-HT2A、2-HT2C) 受體，多巴胺 (D1、D2、D3) 受體，腎上腺素 (α1、α2) 受體，組胺 (H1、H3)受體，Sigma (Sigma-1、Sigma-2) 受體，單胺類轉(zhuǎn)運(yùn)體(SET、NET、DAT)，N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體以及γ-氨基丁酸A 型 (GABAA) 受體等。放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)方法參照國(guó)立精神衛(wèi)生研究院精神活性藥物篩選程序 (national institute of mental health's psychoactive drug screening program, NIMH-PDSP)進(jìn)行[14]，[3H]8-OH-DPAT, [3H]DAMGO等同位素配體均購(gòu)自于美國(guó) PerkinElmer 公司；5-HT, DAMGO 等非標(biāo)記化合物均購(gòu)自于美國(guó)Sigma 公司。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)條件見表1。實(shí)驗(yàn)分為兩步，首先進(jìn)行單濃度親和力實(shí)驗(yàn)，NH0319 的濃度設(shè)置為10 μM，當(dāng)NH0319 在此高濃度下對(duì)受體的抑制率小于50%時(shí)，說明化合物不作用于該受體。當(dāng)抑制率大于50%時(shí)，說明與受體可能具有一定的親和力，需進(jìn)行進(jìn)一步的劑量/效應(yīng)實(shí)驗(yàn)，得到IC50值，以進(jìn)一步確定化合物與受體的親和力大小。實(shí)驗(yàn)時(shí)NH0319 設(shè)置6 個(gè)濃度，分別為0.1、1、10、100、1000 及10 000 nM，得到各個(gè)濃度的抑制率，計(jì)算出IC50值。

7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

1. NH0319 明顯延長(zhǎng)甩尾實(shí)驗(yàn)中小鼠甩尾潛伏期

經(jīng)初篩淘汰掉痛閾值較小及較大的小鼠后，各實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥前甩尾潛伏期介于3.40～4.19 s 之間，各組之間基礎(chǔ)痛閾值沒有明顯差異 [F(4,55)= 1.72,P＞ 0.05]，但給藥后各組痛閾值具有顯著性差異 [F(4,55)= 6.55,P＜ 0.01]。嗎啡組小鼠甩尾潛伏期明顯高于溶媒組(P＜ 0.01)，表現(xiàn)出明顯的鎮(zhèn)痛作用?；衔颪H0319 中劑量和高劑量組小鼠的甩尾潛伏期也明顯高于溶媒組(P＜ 0.05,P＜ 0.01)，提示化合物NH0319 具有潛在的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

2. NH0319 明顯縮短福爾馬林誘導(dǎo)的大鼠縮腿舔足時(shí)間

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3 所示，在I 相疼痛測(cè)試中，各試驗(yàn)組大鼠縮腿舔足時(shí)間具有顯著性差異 [F(4,48)= 5.28,P＜ 0.01]。進(jìn)一步分析顯示，嗎啡組、NH0319 中劑量組(40 mg/kg)、高(80 mg/kg)劑量組I 相縮腿舔

足時(shí)間明顯低于溶媒處理組(P＜ 0.01,P＜ 0.05)，說明NH0319 對(duì)足底注射福爾馬林導(dǎo)致的急性疼痛有較好的鎮(zhèn)痛作用。在II 相疼痛測(cè)試中，各組大鼠的縮腿舔足時(shí)間也具有顯著性差異(F(4,48)= 10.43,P＜ 0.01)。其中，嗎啡組、NH0319 中(40 mg/kg)、高(80 mg/kg)劑量組縮腿舔足時(shí)間與溶媒組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜ 0.01)，說明NH0319 對(duì)足底注射福爾馬林導(dǎo)致的持續(xù)性疼痛也有較好的鎮(zhèn)痛效果。

表1 NH0319 放射性配體受體親和力實(shí)驗(yàn)條件Table 1 Experimental conditions for radioligand receptor binding assay of NH0319

表2 NH0319 對(duì)甩尾試驗(yàn)中小鼠甩尾潛伏期的影響(n = 12, ±SD)Table 2 Effect of NH0319 on the tail flick latency in the tail flick test in mice (n = 12, ±SD)

表2 NH0319 對(duì)甩尾試驗(yàn)中小鼠甩尾潛伏期的影響(n = 12, ±SD)Table 2 Effect of NH0319 on the tail flick latency in the tail flick test in mice (n = 12, ±SD)

*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01，與溶媒組相比；*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01, compared with group vehicle.

給藥后痛閾值 (s)Pain threshold after administration (s)溶媒組Vehicle group - 4.19±1.14 4.22±1.37嗎啡組Morphine group 5 3.85±0.76 7.31±2.11**NH0319 低劑量組NH0319 low dose group 20 3.40±0.58 5.23±1.48 NH0319 中劑量組NH0319 middle dose group 40 3.66±0.75 5.78±1.11*NH0319 高劑量組NH0319 high dose group 80 3.62±0.57 6.52±1.78**組別Group劑量 (mg/kg)Dose (mg/kg)基礎(chǔ)痛閾值 (s) Baseline pain threshold (s)

表3 NH0319 對(duì)福爾馬林實(shí)驗(yàn)中大鼠縮腿舔足時(shí)間的影響(n = 10～13, ±SD)Table 3 Effect of NH0319 on the time of paw withdrawal and paw licking in formalin test in rats (n = 10-13, ±SD)

*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01，與溶媒組相比；*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01, compared with group vehicle.

縮腿舔足時(shí)間 (s)The time of paw withdrawal and paw licking (s)I 相Phase I II 相Phase II溶媒組Vehicle group - 13 223.8±44.6 2312.5±348.5嗎啡組Morphine group 5 10 129.0±22.2** 924.5±799.4**NH0319 低劑量組NH0319 low dose group 20 10 241.1±37.1 1886.6±800.1 NH0319 中劑量組NH0319 middle dose group 40 10 152.6±110.3* 952.1±838.9**NH0319 高劑量組NH0319 high dose group 80 10 164.1±88.8* 895.7±631.5**組別Group劑量 (mg/kg)Dose (mg/kg)動(dòng)物數(shù)Number

3. NH0319 明顯提高SNI 模型大鼠MWT 值

動(dòng)物接受SNI 手術(shù)后逐漸出現(xiàn)明顯跛行、術(shù)側(cè)后爪外翻等疼痛表現(xiàn)，并進(jìn)行性加重。術(shù)后第13 天測(cè)量MWT，淘汰造模不成功的大鼠。造模成功的大鼠按MWT 均衡分組，各組大鼠給藥前基礎(chǔ)MWT 介于28.07～29.68 g 之間，組間無明顯差別 [F(4,37)= 0.17,P＞ 0.05]。大鼠術(shù)后14～17天連續(xù)給藥，測(cè)定14 天及17 天給藥后1 h 大鼠的MWT，用于評(píng)價(jià)藥物單次給藥及多次給藥的藥效。結(jié)果表明，單次給藥及多次給藥后各組大鼠間的MWT 均出現(xiàn)顯著性差異 [F(4,37)= 2.76,P＜ 0.05]及 [F(4,37)=12.37,P＜ 0.01]，說明藥物對(duì)模型動(dòng)物的疼痛行為進(jìn)行了有效的干預(yù)。其中，與溶媒組相比，普瑞巴林40 mg/kg組單次給藥時(shí)對(duì)大鼠的MWT 無明顯影響(P＞ 0.05)，但多次給藥后能明顯提高大鼠的MWT (P＜ 0.01)，說明普瑞巴林需要多次給藥才能發(fā)揮明顯的鎮(zhèn)痛藥效。而NH0319 中(40 mg/kg)、高(80 mg/kg)劑量組單次及連續(xù)4 天給藥后均能明顯提高大鼠的MWT (P＜ 0.05,P＜ 0.01)，對(duì)神經(jīng)病理性疼痛動(dòng)物模型表現(xiàn)出良好的鎮(zhèn)痛作用且能較快發(fā)揮藥效，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

4. NH0319 選擇性作用于5-HT1A 受體

采用放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)NH0319 鎮(zhèn)痛作用靶點(diǎn)進(jìn)行初步探討。本次實(shí)驗(yàn)一共進(jìn)行了中樞神經(jīng)系統(tǒng)中與鎮(zhèn)痛藥效或不良反應(yīng)相關(guān)的21 個(gè)受體的親和力實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在10 μM 的實(shí)驗(yàn)濃度下，NH0319 對(duì)5-HT1A受體的抑制率達(dá)到99%，說明該化合物對(duì)這個(gè)受體具有較強(qiáng)的親和力；對(duì)5-HT2A受體、5-HT2C受體及DAT 受體的抑制率大于50%，分別為63%、50%及65%，說明NH0319 對(duì)這三個(gè)受體可能有一定的親和力。此外，NH0319 對(duì)其余的受體抑制率均較低(＜ 50%)，說明NH0319 對(duì)這些受體沒有明顯的親和力。針對(duì)5-HT1A受體、5-HT2A受體、5-HT2C受體及DAT 受體的進(jìn)一步親和力濃度-效應(yīng)關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NH0319對(duì)5-HT1A受體親和力IC50值為15.05±3.28 nM，對(duì)其余三個(gè)受體的IC50值均大于1000 nM，說明NH0319 只對(duì)5-HT1A受體有較強(qiáng)的親和力，是一個(gè)選擇性作用于5-HT1A受體的非阿片類鎮(zhèn)痛化合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

討 論

小鼠甩尾實(shí)驗(yàn)及大鼠福爾馬林實(shí)驗(yàn)是兩個(gè)經(jīng)典的疼痛動(dòng)物模型，由于操作簡(jiǎn)單，能快速出實(shí)驗(yàn)結(jié)果，常用于新化合物鎮(zhèn)痛活性的早期篩選。本實(shí)驗(yàn)首先采用這兩個(gè)模型來評(píng)價(jià)化合物NH0319 的鎮(zhèn)痛活性。結(jié)果表明，NH0319 中(40 mg/kg)、高(80 mg/kg)劑量給藥時(shí)能明顯延長(zhǎng)甩尾實(shí)驗(yàn)中小鼠甩尾潛伏期，減少福爾馬林實(shí)驗(yàn)中大鼠I、II 相縮腿舔足的時(shí)間，說明該化合物具有良好的鎮(zhèn)痛作用。接下來建立了大鼠SNI 模型以進(jìn)一步考察該化合物是否具有抗神經(jīng)病理性疼痛的藥效，并與普瑞巴林進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果表明，神經(jīng)病理性疼痛一線治療藥物普瑞巴林只有多次給藥時(shí)能明顯的提高大鼠MWT，單次給藥時(shí)沒有表現(xiàn)出明顯鎮(zhèn)痛效果。而NH0319 單次及多次給藥均能明顯提高大鼠MWT，表現(xiàn)出較好的抗神經(jīng)病理性疼痛的藥效。NH0319 鎮(zhèn)痛效果與普瑞巴林相當(dāng)，但起效更快。

表4 NH0319 對(duì)SNI 模型大鼠機(jī)械痛閾值的影響(n = 8～10, ±SD)Table 4 Effect of NH0319 on MWT in SNI model rats (n = 8-10, ±SD)

表4 NH0319 對(duì)SNI 模型大鼠機(jī)械痛閾值的影響(n = 8～10, ±SD)Table 4 Effect of NH0319 on MWT in SNI model rats (n = 8-10, ±SD)

*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01，與溶媒組相比；*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01, compared with group vehicle.

組別Group劑量(mg/kg)Dose (mg/kg)機(jī)械痛閾值(g) MWT (g)給藥前Before dose多次給藥后After multiple doses溶媒組Vehicle group - 29.68±4.29 30.85±4.78 28.73±3.77普瑞巴林組Pregabalin group 40 28.45±5.33 34.09±5.38 40.61±7.92**NH0319 低劑量組NH0319 low dose group 20 28.07±4.51 32.83±6.91 31.93±2.68 NH0319 中劑量組NH0319 middle dose group 40 28.65±4.76 37.60±2.56 38.65±4.68**NH0319 高劑量組NH0319 high dose group 80 28.33±3.99 38.42±7.62* 42.10±4.05**單次給藥后After single dose

表5 NH0319 對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)疼痛相關(guān)受體親和力實(shí)驗(yàn)研究Table 5 Binding affinities of NH0319 for pain related receptors in the central nervous system

5-HT1A受體可分為自身受體及異源性受體。5-HT1A自身受體分布于5-HT 神經(jīng)元的胞體和樹突上，位于中縫核和5-HT 釋放的終末部位[15]。5-HT1A異源受體分布于非5-HT 能神經(jīng)元（如谷氨酸能神經(jīng)元，GABA 能神經(jīng)元，膽堿能神經(jīng)元等）的突觸后膜，可調(diào)節(jié)這些神經(jīng)元的興奮性及相關(guān)遞質(zhì)的釋放[16]。有文獻(xiàn)報(bào)道，中樞5-HT 能神經(jīng)系統(tǒng)及5-HT1A受體參與了疼痛信號(hào)的調(diào)節(jié)，是潛在的鎮(zhèn)痛藥物靶標(biāo)[9]。F-13640 是一個(gè)強(qiáng)效的5-HT1A受體激動(dòng)劑，在急性、慢性、傷害性及病理性疼痛動(dòng)物模型均表現(xiàn)出較好的鎮(zhèn)痛效果[17～20]。Franchini 等報(bào)道了一類1, 3-二惡烷基2-異芳基-苯氧基乙基胺衍生物，對(duì)5-HT1A受體有很強(qiáng)的激動(dòng)作用，在神經(jīng)保護(hù)及神經(jīng)病理性疼痛治療上可能會(huì)有較好的效果[21]。另有專利報(bào)道了一類芳基- [4-鹵代-4（氨基甲基）哌啶-1-基]-甲酮類衍生物，對(duì)5-HT1A受體有較強(qiáng)親和力(pKi = 8-10)。其代表性化合物1A1 對(duì)福爾馬林疼痛(ED50= 0.05 mg/kg)及奧沙利鉑誘導(dǎo)的病理性疼痛（有效劑量0.04 mg/kg）均有明顯的鎮(zhèn)痛作用[22]。放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，NH0319 除與5-HT1A受體有較強(qiáng)的親和力以外(IC50= 15.05±3.28 nM)，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中包括阿片類受體（阿片mu 受體、阿片kappa 受體、阿片delta 受體）在內(nèi)的其它20個(gè)受體都沒有明顯的親和力(IC50＞ 1000 nM)，說明該化合物是一個(gè)選擇性作用于5-HT1A受體的非阿片類鎮(zhèn)痛藥，很可能通過作用于5-HT1A受體，調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性及遞質(zhì)釋放而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。

綜上所述，化合物NH0319 對(duì)小鼠甩尾實(shí)驗(yàn)、大鼠福爾馬林致痛實(shí)驗(yàn)以及大鼠SNI 實(shí)驗(yàn)都有較好的鎮(zhèn)痛效果，其鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與其作用于5-HT1A受體，調(diào)節(jié)神經(jīng)元興奮性及遞質(zhì)釋放有關(guān)，有望開發(fā)成新型的非阿片類抗神經(jīng)病理性疼痛新藥。