宋美卿，賈力莉，牛艷艷，楊 鈐，賴(lài)永健，馮瑪莉

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西 太原030012)

失眠癥通常指睡眠時(shí)間和/或質(zhì)量不能滿(mǎn)足患者身體需求而使其日間生活和工作受到影響的一種病證，以經(jīng)常出現(xiàn)睡眠障礙為主要特征。西醫(yī)治療失眠主要以西藥為主，存在遠(yuǎn)期療效不佳、不良反應(yīng)大、易反復(fù)發(fā)作等缺點(diǎn)。中醫(yī)治療失眠具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，通過(guò)內(nèi)服中藥或復(fù)方有效改善失眠癥狀，不良反應(yīng)少，遠(yuǎn)期療效好。中藥藥理學(xué)研究表明，五味子木脂素類(lèi)化合物具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用[1]。本研究探究連翹、牛蒡子、五味子、細(xì)辛、厚樸、梔子、黨參、杜仲8種木脂素類(lèi)中藥的鎮(zhèn)靜催眠作用，以期為中藥治療失眠的新藥研發(fā)提供基礎(chǔ)理論參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物與試劑 連翹、牛蒡子、五味子、細(xì)辛、厚樸、梔子、黨參片、杜仲均取自山西省中醫(yī)藥研究院草藥房，且經(jīng)山西省藥品檢驗(yàn)所標(biāo)本室鑒定。地西泮片(上海上藥信誼藥廠有限公司，批號(hào)14161201T)；戊巴比妥鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào) WS20050411)；吐溫-80(上海國(guó)藥試劑集團(tuán)，批號(hào)20160623)；95%乙醇分析純AR(國(guó)家集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20170323)。

1.2 儀器 ZZ-6小鼠自主活動(dòng)儀(成都泰盟科技有限公司)；BP-310S電子天平(德國(guó)賽多利斯)；HX-200型高速中藥粉碎機(jī)(浙江省永康市溪岸五金藥具廠)；HH數(shù)顯三用恒溫水箱(江蘇金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.3 動(dòng)物 SPF級(jí)KM種小鼠140只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所繁育場(chǎng)提供，許可證號(hào)為SCXK(京)2004-0001，編號(hào)0089322。

2 方法

2.1 中藥提取物制備 上述8種中藥飲片各30 g，分別用粉碎機(jī)粉碎成粗粉，每組中藥粗粉加95%乙醇溶液120 mL，加熱、回流、過(guò)濾2次，每次1.5 h，合并濾液，蒸發(fā)濃縮至稠膏且無(wú)醇味，稱(chēng)膏重，計(jì)算出膏率。各中藥出膏率：連翹34.9%，牛蒡子17.4%，五味子32.5%，細(xì)辛8.3%，厚樸16.2%，梔子24.1%，黨參片38.4%，杜仲11.6%。

2.2 動(dòng)物分組及給藥 將140只小鼠隨機(jī)分為10組(空白對(duì)照組、地西泮片組、連翹組、牛蒡子組、五味子組、細(xì)辛組、厚樸組、梔子組、黨參片組、杜仲組)，每組14只，空白對(duì)照組給予2%吐溫-80。各組給藥量按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版生藥人均最大用量的20倍取膏，用2%吐溫-80充分溶解后備用。各組小鼠給藥劑量：空白對(duì)照組0.003 g/kg，地西泮片組0.003 g/kg，連翹組1.746 g/kg，牛蒡子組0.696 g/kg，五味子組0.650 g/kg，細(xì)辛組0.088 g/kg，厚樸組0.538 g/kg，梔子組0.802 g/kg，黨參片組3.838 g/kg，杜仲組0.386 g/kg。每日1次，連續(xù)3 d，灌胃容積20 mL/kg。

3 療效觀察

3.1 檢測(cè)指標(biāo) ①小鼠自主活動(dòng)。第2次給藥1 h后，采用小鼠自主活動(dòng)儀記錄小鼠放入儀器暗箱后5 min內(nèi)的站立次數(shù)和活動(dòng)次數(shù)[2-3]。②戊巴比妥鈉催眠后的入睡潛伏期和持續(xù)睡眠時(shí)間。第3次給藥1 h后，每組小鼠給予戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射，以小鼠背向下姿勢(shì)保持30 s以上，判斷為翻正反射消失，記錄入睡潛伏期(從注射戊巴比妥鈉后至小鼠翻正反射消失時(shí)間)，并記錄持續(xù)睡眠時(shí)間(翻正反射消失至覺(jué)醒的時(shí)間)[2-3]。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)；方差不齊采用數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換形式，轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)采用t′檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

(1)小鼠站立、活動(dòng)次數(shù)比較 第2次給藥1 h后小鼠站立次數(shù)比較，地西泮片組、細(xì)辛組明顯低于空白對(duì)照組(P＜0.05)，牛蒡子組、厚樸組、黨參片組、杜仲組明顯高于地西泮片組(P＜0.05)；第2次給藥1 h后小鼠活動(dòng)次數(shù)比較，黨參片組、杜仲組明顯多于空白對(duì)照組(P＜0.05)；連翹、梔子組活動(dòng)次數(shù)明顯低于地西泮片組(P＜0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 10組KM小鼠第2次給藥1 h后站立、活動(dòng)次數(shù)比較(次，±s)

表1 10組KM小鼠第2次給藥1 h后站立、活動(dòng)次數(shù)比較(次，±s)

注：與空白對(duì)照組比較，▲P＜0.05；與地西泮片組比較，△P＜0.05。

組別 只數(shù) 站立次數(shù)(次) 活動(dòng)次數(shù)(次)連翹組 14 31.70±16.90 5.50±3.85△牛蒡子組 14 44.20±19.60△ 9.00±6.90細(xì)辛組 14 25.70±21.90▲ 10.30±5.71厚樸組 14 44.00±19.10△ 10.20±4.57黨參片組 14 53.20±14.00△ 13.00±4.75▲杜仲組 14 45.50±20.60△ 12.50±4.54▲梔子組 14 37.30±23.80 5.00±3.85△五味子組 14 32.20±28.40 7.00±3.94地西泮片組 14 26.00±14.70▲ 11.30±4.03空白對(duì)照組 14 44.20±18.30 7.50±4.62

(2)小鼠入睡潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間比較 第3次給藥1 h后小鼠入睡潛伏期比較，地西泮片組短于空白對(duì)照組(P＜0.05)，連翹組、細(xì)辛組、黨參片組、杜仲組、梔子組、五味子組均長(zhǎng)于地西泮片組(P＜0.05)；第3次給藥1 h后小鼠持續(xù)睡眠時(shí)間比較，地西泮片組、五味子組、梔子組、厚樸組、細(xì)辛組均長(zhǎng)于空白對(duì)照組(P＜0.05)，連翹組短于空白對(duì)照組(P＜0.05)，連翹組、牛蒡子組、細(xì)辛組、厚樸組、黨參片組、杜仲組、梔子組均短于地西泮片組(P＜0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 10組KM小鼠第3次給藥1 h后小鼠入睡潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間比較(min，±s)

表2 10組KM小鼠第3次給藥1 h后小鼠入睡潛伏期、持續(xù)睡眠時(shí)間比較(min，±s)

注：與空白對(duì)照組比較，▲P＜0.05；與地西泮片組比較，△P＜0.05。

組別 只數(shù) 入睡潛伏期(min) 持續(xù)睡眠時(shí)間(min)連翹組 14 4.89±0.63△ 14±10△▲牛蒡子組 14 3.72±1.17 89±56△細(xì)辛組 14 6.67±8.81△ 193±135△▲厚樸組 14 3.79±1.35 179±129△▲黨參片組 14 6.19±3.06△ 76±90△杜仲組 14 4.09±0.71△ 148±105△梔子組 14 5.33±1.78△ 169±103△▲五味子組 14 4.93±3.77△ 286±129▲地西泮片組 14 2.88±1.38▲ 382±84▲空白對(duì)照組 14 4.91±1.21 78±49

4 討論

失眠是一種常見(jiàn)病，長(zhǎng)期失眠不僅損害人的思維活動(dòng)，甚至?xí)绊懭说拿庖呦到y(tǒng)。西醫(yī)常用鎮(zhèn)靜催眠藥物治療失眠。研究表明，約44%的失眠患者有長(zhǎng)期服用苯二氮類(lèi)和巴比妥類(lèi)藥物史，此類(lèi)藥物具有不良反應(yīng)大、成癮性等問(wèn)題[4]。五味子具有鎮(zhèn)靜催眠和抗驚厥作用，其作用除與木脂素有關(guān)，還與五仁醇、五味子醇甲、醇乙等成分有關(guān)[5]。木脂素為脂溶性，可用親脂性有機(jī)溶劑提取。因親脂性、極性小的藥物易由血液進(jìn)入血腦屏障發(fā)揮藥理作用[6]，本研究根據(jù)藥物“相似相溶”原理選用極性小的95%乙醇溶液對(duì)含木脂素類(lèi)中藥進(jìn)行回流提取，對(duì)提取物進(jìn)行鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn)研究。

本研究結(jié)果表明，8種含木脂素類(lèi)中藥鎮(zhèn)靜催眠作用不同，五味子鎮(zhèn)靜催眠作用最強(qiáng)，其次為細(xì)辛、厚樸、梔子，但細(xì)辛、厚樸、梔子等中藥具有催眠作用的活性成分尚待進(jìn)一步研究。相關(guān)研究表明，細(xì)辛主要成分為細(xì)辛揮發(fā)油，具有鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥作用，而木脂素類(lèi)化合物含量較少[7]；梔子中含有大量環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物和少量香豆素、木脂素、揮發(fā)油等，超臨界CO2萃取的梔子油具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥及促學(xué)習(xí)記憶的作用[8]。厚樸主要成分為新木脂素，包括厚樸酚與和厚樸酚，具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗凝血、抗?jié)?、?duì)心腦系統(tǒng)有保護(hù)等作用[9]，其催眠作用多是與其他藥物配合產(chǎn)生的，單味藥的催眠作用還有待進(jìn)一步研究。