蔣 磊， 陳 杰

(1.宿州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)系， 安徽宿州 234000； 2.安徽海大飼料有限公司， 安徽池州 247100)

熱應(yīng)激(heat-stressed， HS)是指動(dòng)物受到超過自身等熱區(qū)上限的溫度刺激， 機(jī)體產(chǎn)生的非特異性應(yīng)答反應(yīng)的總和. 家禽皮膚無汗腺， 散熱困難， 在高溫環(huán)境下易引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)， 導(dǎo)致生長性能下降， 腸道消化酶活性降低， 并誘發(fā)產(chǎn)生大量活性氧自由基， 造成臟器損傷， 增加死亡率. 當(dāng)前， 歐美等發(fā)達(dá)國家采用現(xiàn)代化控溫設(shè)施應(yīng)對(duì)肉雞熱應(yīng)激問題， 但高額的養(yǎng)殖成本限制其推廣， 尤其是規(guī)?；潭炔桓叩酿B(yǎng)殖場(chǎng). 微生態(tài)制劑又稱活菌劑， 可調(diào)節(jié)機(jī)體胃腸道菌群平衡. 胡長慶等[1]研究發(fā)現(xiàn)， 枯草芽孢桿菌能夠提高肉雞血清中谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶活力， 增強(qiáng)總抗氧化能力， 降低丙二醛含量. 湯江武等[2]研究顯示， 芽孢桿菌能顯著提高肉雞十二指腸淀粉酶和胰蛋白酶的活性， 提高空腸脂肪酶及盲腸總蛋白酶的活性. 但微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞的影響卻鮮有報(bào)道， 本文擬以817肉雞為研究對(duì)象， 探究微生態(tài)制劑對(duì)肉雞生長性能、 十二指腸內(nèi)消化酶活性及血清抗氧化性的影響， 以期為生產(chǎn)中緩解肉雞熱應(yīng)激提供科學(xué)依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)微生態(tài)制劑由鄭州益富源生物有限公司提供， 其中有效活菌數(shù)： 枯草芽孢桿菌≥1.0×107CFU/g， 乳酸桿菌≥1.0×107CFU/g， 酵母菌≥1.0×106CFU/g. 試驗(yàn)動(dòng)物選用817肉雞(羅斯308父母代公雞×海蘭褐商品代母雞)， 由安徽海大飼料有限公司合作養(yǎng)殖場(chǎng)提供.

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取35日齡、 體重相近(950±20)g的817肉雞288只， 采用2×2析因設(shè)計(jì)， 隨機(jī)分為4組， 分別為常溫組(normal temperature, NT)、 熱應(yīng)激組(HS)、 常溫+微生態(tài)制劑組(NT+PRO)、 熱應(yīng)激+微生態(tài)制劑組(HS+PRO). 每組設(shè)3個(gè)重復(fù)， 每個(gè)重復(fù)24只， 其中， NT和HS組飼喂基礎(chǔ)日糧， NT+PRO和HS+PRO組飼喂基礎(chǔ)日糧+200mg/kg微生態(tài)制劑. 試驗(yàn)期從35日齡至49日齡， 共14d， 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1. 肉雞采用分籠飼養(yǎng)， 按照常規(guī)程序飼養(yǎng)管理和免疫接種， 自由采食、 飲水， 每天清糞一次. 試驗(yàn)期間常溫溫度控制在(23±1)℃， 熱應(yīng)激溫度每天8： 00～18： 00控制在(32±1)℃， 18： 00至次日8： 00控制在(23±1)℃.

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長性能

第35和49日齡早上8： 00分組進(jìn)行空腹稱重， 試驗(yàn)期間每天記錄耗料量， 并計(jì)算平均日采食量、 平均日增重、 料重比等指標(biāo).

1.3.2 血清抗氧化指標(biāo)

第49日齡從每個(gè)重復(fù)中抽取2只接近平均體重的肉雞翅下采血2mL， 離心后分離血清， 分裝后于-20℃保存?zhèn)溆? 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、 超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的活性， 總抗氧化能力(T-AOC)， 丙二醛(MDA)含量等指標(biāo)， 由南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定.

1.3.3 十二指腸消化酶活力

翅下采血后， 斷頸致死取十二指腸中段， 在實(shí)驗(yàn)室無菌條件下刮取內(nèi)容物， 3000r/min離心后取上清液， 用胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶活性試劑盒(同上)測(cè)定.

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Excel2013進(jìn)行初步整理， 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行雙因素方差分析和多重比較， 結(jié)果以平均值與標(biāo)準(zhǔn)誤SEM表示.

2 結(jié)果與分析

2.1 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響

由表2可知， 與常溫狀態(tài)相比， 熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞試驗(yàn)期末體重、 平均日采食量和日增重均降低， 料重比升高， 其中HS組相比NT組上面4個(gè)指標(biāo)分別顯著降低了7.53%、 6.84%、 17.72%和-8.46%(P<0.05). 常溫狀態(tài)下， NT+PRO組肉雞生長性能與NT組無顯著性差異(P>0.05)； 熱應(yīng)激狀態(tài)下， 與HS組相比， HS+PRO組肉雞末體重、 日增重分別顯著提高了3.40%和9.05%(P<0.05)， 而平均日采食量和料重比差異不顯著(P>0.05). 溫度和日糧對(duì)肉雞生長性能的影響無顯著的交互效應(yīng)(P>0.05).

表2 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響

2.2 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響

由表3可知， 與常溫狀態(tài)相比， 熱應(yīng)激顯著降低了肉雞T-AOC能力和GSH-Px、 SOD、 CAT的活性， 升高了MDA含量(P<0.05). 常溫狀態(tài)下， 與NT組相比， NT+PRO組GSH-Px的活性顯著提高(P<0.05)， 而其他差異不顯著(P>0.05)； 熱應(yīng)激狀態(tài)下， 與HS組相比， HS+PRO組GSH-Px、 SOD的活性分別提高了19.32%、 8.40%， MDA含量降低了6.64%， 差異均顯著(P<0.05). 溫度和日糧對(duì)肉雞血清MDA含量的影響存在顯著的交互效應(yīng)(P<0.05).

表3 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響

2.3 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞十二指腸消化酶活性的影響

由表4可知， 與常溫狀態(tài)相比， 熱應(yīng)激顯著降低胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶的活性(P<0.05). 常溫狀態(tài)下， NT+PRO組胰蛋白酶和淀粉酶的活性均高于NT組， 且差異顯著(P<0.05)， 脂肪酶的活性無顯著差異(P>0.05)； 熱應(yīng)激狀態(tài)下， HS+PRO組胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶的活性比HS組分別提高了17.99%、 7.60%、 1.71%， 差異顯著水平與常溫兩組一致. 溫度和日糧對(duì)肉雞十二指腸消化酶活性的影響無顯著的交互效應(yīng)(P>0.05).

表4 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞十二指腸消化酶活性的影響

3 討論

3.1 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞生長性能的影響

有研究表明， 肉雞的等熱區(qū)范圍一般為18～26℃， 當(dāng)環(huán)境溫度超過28℃時(shí)， 雞群開始出現(xiàn)不同程度的熱應(yīng)激癥狀， 當(dāng)溫度超過38℃時(shí)， 雞群大量休克或死亡[3]. 熱應(yīng)激會(huì)抑制肉雞采食中樞， 導(dǎo)致食欲明顯衰退， 當(dāng)環(huán)境溫度高于30℃， 溫度每上升1℃， 采食量下降4.6%[4]； 會(huì)加速肝糖原合成及糖異生， 導(dǎo)致蛋白質(zhì)和脂肪的分解， 日增重減少； 會(huì)縮短食糜在消化道的停留時(shí)間， 飼料轉(zhuǎn)化率降低[5]. 本試驗(yàn)結(jié)果顯示， 熱應(yīng)激組肉雞末體重、 平均日采食量和日增重均顯著降低， 料重比顯著升高， 說明熱應(yīng)激降低了肉雞的生長速度和飼料轉(zhuǎn)化率， 這與鐘光等[6]的研究結(jié)果一致. 微生態(tài)制劑能夠調(diào)控肉雞腸道微生物區(qū)系， 增強(qiáng)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收， 提高飼料轉(zhuǎn)化率， 從而促進(jìn)生長. 虞耀土等[7]在熱應(yīng)激肉雞飼料中添加枯草芽孢桿菌， 結(jié)果顯示， 肉雞14～42d末體重和日增重顯著提高， 料重比及死亡率降低， 而采食量無明顯變化. 張輝等[8]研究表明， 益力素可顯著改善羅曼肉雞的日增重和飼料報(bào)酬， 且對(duì)高溫狀態(tài)下肉雞的促進(jìn)效果更明顯. 這些結(jié)論與本試驗(yàn)基本一致， 微生態(tài)制劑可顯著提高35～49日齡熱應(yīng)激肉雞日增重和末體重， 而采食量和料重比無顯著影響. 洪奇華等[9]試驗(yàn)結(jié)果與本研究不同， 顯示單獨(dú)添加益生素對(duì)熱應(yīng)激羅斯308肉雞平均日采食量、 日增重和料重比均無顯著影響， 這可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)采用枯草芽孢桿菌、 乳酸桿菌和酵母菌復(fù)合微生態(tài)制劑， 菌株間的協(xié)同作用使其益生效果優(yōu)于單一菌種制劑. 與常溫組相比， 飼喂微生態(tài)制劑的熱應(yīng)激肉雞末體重、 日增重和料重比仍有顯著差異， 說明微生態(tài)制劑只能緩解熱應(yīng)激狀態(tài)， 不能徹底消除熱應(yīng)激對(duì)肉雞生長性能的影響.

3.2 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清抗氧化功能的影響

正常條件下畜禽體內(nèi)自由基數(shù)量和抗氧化水平處于動(dòng)態(tài)平衡， 但熱應(yīng)激狀態(tài)下， 機(jī)體生理代謝機(jī)能紊亂， 導(dǎo)致氧化自由基及活性氧大量產(chǎn)生， 破壞了血清抗氧化酶系統(tǒng)[10]. MDA是由氧自由基引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物. 有研究表明， 熱應(yīng)激可導(dǎo)致肉雞血清和肝臟內(nèi)MDA含量顯著上升[11]， 這與本試驗(yàn)結(jié)果一致， 與常溫組相比， 49日齡熱應(yīng)激肉雞血清MDA含量升高了13.80%， 且差異顯著. GSH-Px、 SOD、 CAT是三種重要的抗氧化酶， 其活性反映機(jī)體抗氧化的能力. 在本試驗(yàn)條件下， 熱應(yīng)激組肉雞血清三種抗氧化酶的活性均顯著降低， 這可能是因?yàn)檠踝杂苫那宄饕窟@些抗氧化酶， 造成其在血清內(nèi)的含量降低. 郭田宇等[12]研究也顯示， 與20和25℃相比， 30℃組黃羽肉雞血清GSH-Px及肝臟SOD活力顯著降低， 這與李葉涵等[13]報(bào)道一致， 從而說明熱應(yīng)激可降低肉雞抗氧化酶的活性. 但也有報(bào)道與本試驗(yàn)不一致， 顯示熱應(yīng)激能夠激活抗氧化酶活性， 這可能與熱應(yīng)激的強(qiáng)度或持續(xù)的時(shí)長不同有關(guān). 鐘光等[14]研究表明， 持續(xù)熱應(yīng)激可降低肝臟中的抗氧化酶的活性， 但隨著時(shí)間延長， 各種酶活性的差異會(huì)逐漸不顯著. 本試驗(yàn)結(jié)果顯示， 日糧中添加微生態(tài)制劑可顯著提高熱應(yīng)激肉雞血清內(nèi)GSH-Px和SOD的活性， 顯著降低MDA含量， 但T-AOC能力和CAT活性差異不顯著. 目前關(guān)于微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞抗氧化功能的研究報(bào)道較少， 其抗氧化作用機(jī)理尚不清楚， 可能是活性菌或代謝產(chǎn)物含有抗氧化物質(zhì)， 能夠抑制自由基的產(chǎn)生； 也可能是活性菌可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)， 或抑制相關(guān)的氧化應(yīng)激， 確切機(jī)制還需進(jìn)一步研究.

3.3 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞十二指腸消化酶活性的影響

胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶是家禽十二指腸重要的消化酶， 其活性的高低影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化、 吸收和利用. 研究表明， 熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞溫度調(diào)節(jié)失控， 散熱不足導(dǎo)致體溫升高， 一定程度上會(huì)降低消化酶活性； 同時(shí)造成腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化， 從而影響消化酶的正常分泌能力[15]. 本試驗(yàn)條件下， 熱應(yīng)激組肉雞十二指腸胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶的活性顯著降低， 比常溫組分別降低了27.56%、 23.56%和15.60%， 這與前人研究結(jié)果相一致， 說明熱應(yīng)激會(huì)降低肉雞消化酶的活性. 大量研究證實(shí)， 枯草芽孢桿菌、 酵母菌在代謝過程中可分泌蛋白酶、 淀粉酶、 脂肪酶等多種酶活性物質(zhì)， 補(bǔ)充熱應(yīng)激肉雞腸道內(nèi)源酶的含量， 提高消化酶活力[16]. 微生態(tài)制劑一定程度上能夠維持熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)， 緩解腸道絨毛的損傷. 本試驗(yàn)結(jié)果顯示， 微生態(tài)制劑使熱應(yīng)激肉雞十二指腸胰蛋白酶、 淀粉酶活性分別顯著提高了17.99%、 7.60%， 脂肪酶活性提高1.71%， 但無顯著性差異. 卞國順等[17]研究報(bào)道， 日糧中添加枯草芽孢桿菌顯著提高了嶺南黃羽肉雞空腸胰蛋白酶和淀粉酶活性， 與本研究結(jié)果一致； 但脂肪酶活性卻顯著降低， 這可能是由于腸道分段不同， 即十二指腸和空腸內(nèi)消化酶的活性可能存在差異. 鐘光等[18]研究結(jié)果與本試驗(yàn)不一致， 顯示微生態(tài)制劑對(duì)29日齡應(yīng)激肉仔雄雞胰蛋白酶、 脂肪酶活性均無顯著性影響， 這種差異可能與試驗(yàn)動(dòng)物日齡或應(yīng)激方式不同有關(guān).

4 結(jié)論

1. 熱應(yīng)激能顯著降低35～49日齡817肉雞生長速度和飼料轉(zhuǎn)化率， 抑制十二指腸內(nèi)胰蛋白酶、 淀粉酶和脂肪酶的活性， 降低血清中T-AOC能力和GSH-Px、 SOD、 CAT的活性， 升高M(jìn)DA含量.

2. 微生態(tài)制劑可顯著增加熱應(yīng)激肉雞末體重和日增重， 增強(qiáng)十二指腸內(nèi)胰蛋白酶和淀粉酶活性， 提高血清中GSH-Px、 SOD的活性， 降低MDA含量.

3. 微生態(tài)制劑只能緩解熱應(yīng)激對(duì)肉雞產(chǎn)生的不利影響， 而不能徹底消除.