楊 嫡 ， 郭 亮 ， 夏 冰 ， 陳其名 ， 朱要宏 ， 王九峰

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 ， 北京 海淀 100193)

斷奶仔豬腹瀉是目前困擾養(yǎng)豬業(yè)的一大難題，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。造成斷奶仔豬腹瀉的原因有多種，包括傳染性腹瀉、營(yíng)養(yǎng)性腹瀉、生理性腹瀉和應(yīng)激性腹瀉。因此，如何改善斷奶仔豬腹瀉，維持?jǐn)嗄套胸i腸道微生態(tài)平衡，阻止病原菌入侵，增加腸道有益菌，減輕斷奶應(yīng)激等因素造成的危害，已經(jīng)成為預(yù)防斷奶仔豬腹瀉的研究熱點(diǎn)[1]。

隨著抗生素在養(yǎng)豬行業(yè)的濫用，造成大量耐藥菌株的出現(xiàn)，嚴(yán)重影響動(dòng)物源性食品安全，對(duì)動(dòng)物和人體健康造成巨大威脅。2018年1月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部“第2638號(hào)”公告指出[2]，停止在食品動(dòng)物中使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥。因此，亟待開(kāi)發(fā)新型抗生素替代品，目前常見(jiàn)的抗生素替代品有益生菌、益生元、酶制劑、酸化劑和植物提取物等，在生產(chǎn)實(shí)踐中常聯(lián)合使用。單種益生菌在臨床中有較多應(yīng)用，如約氏乳桿菌，它可阻止致病菌粘附，調(diào)節(jié)腸道局部免疫應(yīng)答，酸化腸道環(huán)境[3]。臨床中也常將枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌共同使用，它們作為兼性厭氧菌可抑制病原菌，有利于厭氧益生菌生長(zhǎng)。目前尚無(wú)約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌聯(lián)合應(yīng)用的研究報(bào)道。本試驗(yàn)將從健康仔豬中分離到的豬源約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌制成復(fù)合益生菌制劑添加至基礎(chǔ)日糧中，觀察其對(duì)早期斷奶仔豬腹瀉率、生長(zhǎng)性能及血清免疫球蛋白的影響，為日后復(fù)合益生菌制劑的臨床應(yīng)用提供可供參考的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)益生菌 約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌為本實(shí)驗(yàn)室分離自臨床健康的斷奶仔豬結(jié)腸內(nèi)容物或糞便，制備為凍干菌粉后，按照以下劑量添加至基礎(chǔ)日糧中，約氏乳桿菌109CFU/kg、枯草芽孢桿菌106CFU/kg、地衣芽孢桿菌106CFU/kg。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 本試驗(yàn)于山東省聊城市大北農(nóng)種豬場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)動(dòng)物為120頭21日齡斷奶的雜交仔豬(長(zhǎng)白×大白)。按照初始體重均衡的原則對(duì)其進(jìn)行分組，隨機(jī)分成2組，對(duì)照組和試驗(yàn)組，各設(shè)3個(gè)重復(fù)組，20頭仔豬為1個(gè)重復(fù)組。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組飼喂添加有復(fù)合益生菌制劑的基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)中所用基礎(chǔ)日糧為北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)。對(duì)照組和試驗(yàn)組同舍飼養(yǎng)，每個(gè)重復(fù)組的20頭仔豬飼養(yǎng)于一欄中，自由采食與飲水，試驗(yàn)期共35 d。

1.3 腹瀉狀況及生產(chǎn)性能檢測(cè) 記錄每個(gè)重復(fù)組日采食量，每周稱重，計(jì)算平均日采食量、平均日增重、肉料比。每天觀察并記錄每個(gè)重復(fù)組斷奶仔豬的腹瀉情況，計(jì)算腹瀉率，方法為：

腹瀉頻率% = 腹瀉頭次÷(試豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))×100%

1.4 血液樣品采集 每周于各個(gè)重復(fù)組中隨機(jī)選擇4頭仔豬，前腔靜脈采血，采血量為5 mL，4 ℃靜置過(guò)夜，分離血清，-20 ℃保存。

1.5 血清免疫球蛋白檢測(cè) 將冷凍保存的血清樣品室溫下解凍，ELISA檢測(cè)免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)含量，檢測(cè)方法參照說(shuō)明書進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自北京雪杰特科技有限公司。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，P<0.05為具有顯著性差異，P<0.01為具有極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬腹瀉的影響 由圖1可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組第2周腹瀉率顯著降低(P=0.023)，而其他周次沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

圖1 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬腹瀉率的影響

2.2 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 由表1可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組體重增加0.65 kg(3.67%)，平均日增重增加19.6 g(6.84%)，肉料比升高0.05(8.33%)。復(fù)合益生菌制劑對(duì)仔豬體重、平均日增重和肉料比均沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表1 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

在增重方面，由圖2可知，試驗(yàn)組第4周每頭平均體重顯著增加(P=0.018 6)，平均每頭日增重也顯著增加(P=0.025 7)。

圖2 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬體重、日增重的影響

2.3 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬免疫水平的影響 由圖3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組第3周血清IgM極顯著升高(P= 0.001 5)，而其他周次沒(méi)有顯著性差異。由圖4可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組第3周血清IgG含量顯著升高(P= 0.026)，而其他周次沒(méi)有顯著性差異。由圖5可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組試驗(yàn)期內(nèi)血清IgA含量無(wú)顯著性差異。

圖3 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬血清IgM含量的影響

圖4 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬血清IgG含量的影響

圖5 復(fù)合益生菌對(duì)斷奶仔豬血清IgA含量的影響

3 討論

仔豬斷奶后，由于受到飼料和環(huán)境等各方面的應(yīng)激，容易導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉。Zhang等研究發(fā)現(xiàn)，仔豬斷奶后，腸道菌群多樣性降低，乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌數(shù)量減少，腸桿菌和腸球菌等有害菌數(shù)量升高[4]，腸道對(duì)一些外源性或者內(nèi)源性致病菌的抗性降低，最終導(dǎo)致斷奶仔豬腹瀉的發(fā)生。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，第2周時(shí)，與對(duì)照組相比，益生菌組腹瀉率降低61.54%。整個(gè)試驗(yàn)周期內(nèi)，第2周腹瀉發(fā)生率最高。本試驗(yàn)結(jié)果與黃金華等[5]研究結(jié)果一致，服用混合益生菌制劑可以顯著降低斷奶仔豬引起的腹瀉。服用混合益生菌制劑能顯著降低斷奶仔豬引起的腹瀉率，可能是復(fù)合益生菌制劑有助于維持?jǐn)嗄套胸i腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)，抑制病原菌的繁殖，進(jìn)而降低腹瀉率。

早期斷奶仔豬消化系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，胃腸道結(jié)構(gòu)、pH值和消化酶濃度均有較大變化。胃酸分泌不足，導(dǎo)致胃中多種酶活力減弱，可能發(fā)生吸收不良[6]。此外，斷奶后的食物由流質(zhì)的乳汁更換為固體飼料，極易造成仔豬對(duì)飼料中各種養(yǎng)分的消化利用率降低，生長(zhǎng)性能發(fā)展緩慢。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)合益生菌制劑對(duì)仔豬體重、平均日增重和肉料比均沒(méi)有顯著影響，但有升高仔豬體重、平均日增重和肉料比的趨勢(shì)。其中，第4周復(fù)合益生菌組體重及平均日增重明顯高于對(duì)照組，這可能與益生菌組的平均腹瀉率從第2周起逐漸降低有一定關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果與Lu等[7]的研究結(jié)果一致，斷奶后第21天，與對(duì)照組相比，2種不同益生菌復(fù)合制劑組均表現(xiàn)出體重、平均日增重顯著升高。本試驗(yàn)所使用的乳酸桿菌能夠通過(guò)促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，刺激腸道絨毛生長(zhǎng)，增加隱窩深度及腸絨毛的長(zhǎng)度，增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的表面積[8]。另一方面，乳酸菌代謝產(chǎn)生的有機(jī)酸，如乳酸、乙酸、丙酸、檸檬酸等，不僅能降低胃腸道pH值，抑制、殺死腸道病原菌，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，同時(shí)還能提高胃腸道消化酶活性[9]。此外，芽孢桿菌能分泌多種消化酶，如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶等[10]，有利于斷奶仔豬生長(zhǎng)。

仔豬斷奶后，母源抗體逐漸消失，使其本就發(fā)育不完全的免疫機(jī)能更易受到病原及各種應(yīng)激的影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，第3周時(shí)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的血清IgM含量極顯著升高92.41%，提示近期有感染；血清IgG含量顯著升高79.32%，提示機(jī)體調(diào)動(dòng)體液免疫應(yīng)答，正在對(duì)抗感染。試驗(yàn)期內(nèi)，試驗(yàn)組的血清IgA含量與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。

本試驗(yàn)研究結(jié)果與之前關(guān)于益生菌對(duì)斷奶仔豬免疫球蛋白含量影響的研究結(jié)果一致[11-12]。益生菌對(duì)斷奶仔豬腸道免疫調(diào)濟(jì)功能隨益生菌種類不同而有所區(qū)別，僅添加枯草芽孢桿菌的日糧，可以提高血清IgG、IgA的含量；僅添加約氏乳桿菌的日糧，則可以降低IgM含量。復(fù)合益生菌制劑的使用，各種益生菌間、益生菌與腸道原有菌群間可能存在相互作用，故試驗(yàn)組免疫球蛋白水平的變化有所不同。

因此，研究益生菌對(duì)動(dòng)物各方面的影響，需要綜合考慮動(dòng)物種類、品種、營(yíng)養(yǎng)、健康狀況、年齡、飼養(yǎng)管理?xiàng)l件及環(huán)境、日糧的成分、抗生素影響、益生菌的種類、活力、劑量及飼喂方式等。為改善早期斷奶仔豬腹瀉選擇合適的復(fù)合益生菌制劑，還需要更深入研究。

4 結(jié)論

日糧中添加約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌復(fù)合制劑可有效降低斷奶仔豬腹瀉率，提高生長(zhǎng)性能和機(jī)體免疫力。