★ 吳大力 蔣鵬飛 彭俊 彭清華,4***（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 長沙 410208；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 南寧 530023；3.中醫(yī)藥防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重點實驗室 長沙410208；4.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 長沙 410007）

隨著激光在眼科檢查及治療的廣泛應(yīng)用，由激光所致的醫(yī)源性視網(wǎng)膜光損傷也越來越多，許多眼科疾病的發(fā)生與視網(wǎng)膜長期光照的積累效應(yīng)有關(guān)［1-3］，如老年性黃斑變性。蠐螬在眼科應(yīng)用較早，《晉書》中有此藥治療目疾的記載：“吳中書郎戰(zhàn)沖，母王氏失明，婢取蠐螬蒸熟與食，王以為美，沖還知之，抱母慟哭，母目即開”。本實驗探討了蠐螬提取物對光損傷所致視網(wǎng)膜變性保護(hù)作用及最佳劑量。

1 材料

1.1 實驗動物 選用30只健康實驗性兔，均為雄性，體重 1.8～2.3 Kg。

1.2 主要實驗藥品、試劑及儀器 MoticB5光學(xué)顯微鏡，蠐螬提取物、Harris蘇木素（湖南中醫(yī)藥大學(xué)病理實驗室，批號：71020784）、ECL發(fā)光試劑盒（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：G2014）。

2 實驗方法

2.1 分組方法 采用隨機(jī)數(shù)字表法將30只實驗性兔平均分為空白組、模型組、蠐螬低劑量組、蠐螬中劑量組、蠐螬高劑量組。

2.2 造模方法 采用自制光化學(xué)損傷裝置對實驗動物進(jìn)行累計36 h光照［3］，實驗動物不散瞳及麻醉，光照后送回暗環(huán)境中飼養(yǎng)。正常對照組不施行光照試驗。

2.3 給藥方法 A、B組每日以蒸餾水5 mL/Kg灌胃；C組按照成人日用量5倍劑量灌胃，為0.45 g/Kg，配成5 mL蠐螬提取物混懸液；D組按照成人日用量10倍劑量灌胃；E組按照成人日用量20倍劑量灌胃。每日灌胃1次，連續(xù)給藥2周。

2.4 標(biāo)本的制備 實驗結(jié)束后，處死實驗動物，摘除眼球，剝離激光斑部位視網(wǎng)膜，切片烘干備用。

2.5 指標(biāo)測定 光鏡下觀察各組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)及厚度改變。

2.6 圖像分析 用MoticB5光學(xué)顯微鏡10×40倍鏡進(jìn)行組織切片照相，用圖形分析系統(tǒng)測量視網(wǎng)膜外核層連續(xù)5個視野的厚度。

2.7 統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS21.0進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗，及單因素方差分析（one way ANOVA）。P＜0.05表示差異具有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 HE染色光鏡下病理形態(tài)學(xué)觀察 A組：實驗性兔視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)層次分明。B組：視網(wǎng)膜層次結(jié)構(gòu)模糊，分界不清，出現(xiàn)不規(guī)則淡染。C組：視網(wǎng)膜外核層胞核排列較疏松。D組：視網(wǎng)膜外核層增厚，視網(wǎng)膜外核層胞核排列較整齊密集。E組：視網(wǎng)膜外核層胞核排列較整齊，厚度有增加。見圖1。

圖1 各組實驗性兔視網(wǎng)膜組織HE染色結(jié)果

3.2 各組間視網(wǎng)膜厚度比較 與空白組比較，其余各組視網(wǎng)膜厚度均不同程度變薄，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；蠐螬低劑量組與模型組視網(wǎng)膜厚度比較，差異無顯著性意義（P＞0.05），說明蠐螬低劑量組視網(wǎng)膜厚度無明顯提高；蠐螬中、高劑量組與模型組相比，差異具有顯著性意義（P＜0.05），說明蠐螬中、高劑量組視網(wǎng)膜厚度有明顯增厚；蠐螬中劑量組與蠐螬低劑量組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

各組間視網(wǎng)膜厚度比較（ ，n=6） μm

4 討論

眼底激光作為高能量的單色光，其對視網(wǎng)膜的灼傷屬于眼外傷范疇，多導(dǎo)致視衣氣陰受損，氣虛血瘀。目珠脈道幽深細(xì)微，經(jīng)絡(luò)分布周密，氣血縱橫貫?zāi)浚艏す庾苽恐?，氣陰受損，脈絡(luò)瘀滯，使神光發(fā)越受阻，視功能減退。目得陰血而能視，氣脫者目不明，神光賴其真氣真血真精之滋養(yǎng)，方能明視萬物。益氣則神光有所滋養(yǎng)，同時，氣旺以促血行；活血化瘀則目珠脈道通暢，氣血可以縱橫貫?zāi)?，神光方能有所發(fā)越。故治療常以益氣活血化瘀為主，輔以養(yǎng)陰利水。蠐螬在《神農(nóng)本草經(jīng)》中最早有記載：“主惡血血瘀痹氣，破折血在脅下堅滿痛，月閉，目中淫膚、青翳白膜”。

由于持續(xù)的光照，活性脂肪酸代謝和高氧消耗，視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞發(fā)生慢性氧化應(yīng)激［4-5］，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)循環(huán)和降解減少，誘導(dǎo)炎癥［6-7］。炎癥是破壞細(xì)胞和組織內(nèi)平衡的細(xì)胞反應(yīng)，炎性受體通過識別或感知不同的病原體和損傷相關(guān)的分子模式來啟動復(fù)雜的細(xì)胞級聯(lián)反應(yīng)，長期炎癥在視網(wǎng)膜光損傷中扮演重要角色［8-10］。炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)了視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡，在持續(xù)的細(xì)胞凋亡中，視網(wǎng)膜厚度會逐漸變薄。

本實驗發(fā)現(xiàn)模型組視網(wǎng)膜外核層厚度變薄，蠐螬中、高劑量治療組與模型組相比，視網(wǎng)膜外核層厚度有所增加。表明視網(wǎng)膜光損傷后厚度會變薄，而蠐螬中、高劑量治療組可以使視網(wǎng)膜厚度增加，提示蠐螬可對視網(wǎng)膜的損傷起到保護(hù)作用。