于 笛 周 偉 郭增旺 刁靜靜，2 遲治平 張麗萍，2*

（1 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 黑龍江大慶 163319 2 國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心 黑龍江大慶163319）

炎癥是機(jī)體針對(duì)各種致炎因子如感染和組織損傷而產(chǎn)生的一系列以防御為主的生理性或病理性應(yīng)答反應(yīng)，是機(jī)體天然免疫的重要組成部分。過(guò)度的炎癥會(huì)對(duì)機(jī)體造成損害或疾病， 嚴(yán)重時(shí)還會(huì)危及生命[1-2]。 巨噬細(xì)胞是機(jī)體固有免疫的重要組成細(xì)胞，不僅參與機(jī)體的大多數(shù)免疫反應(yīng)，而且在炎癥反應(yīng)過(guò)程中具有重要作用[3]。 炎癥狀態(tài)下，巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子及抗原提呈等作用影響并調(diào)控炎癥反應(yīng)，其自身的吞噬能力也增強(qiáng)，能夠殺滅和消化機(jī)體內(nèi)抗原性異物[4-5]。 脂多糖（lipopolyssacharide，LPS）是全身炎癥反應(yīng)綜合征的一種重要致病因子， 可與巨噬細(xì)胞表面抗原識(shí)別受體相結(jié)合而刺激細(xì)胞， 繼而激活多條炎癥通路，產(chǎn)生一系列促炎因子，引起機(jī)體嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)[6-7]。

有研究顯示，大豆、豌豆、羽扇豆等的蛋白水解產(chǎn)物具有調(diào)節(jié)炎癥的潛力。 Vernaza 等[8]發(fā)現(xiàn)利用大豆制備的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物能夠顯著減弱LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞RAW264.7 中炎性標(biāo)志物如NO、iNOS、PGE2 的產(chǎn)生。 Millan-Linares 等[9]發(fā)現(xiàn)羽扇豆的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物可以減弱THP-1 巨噬細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子IL-1β，IL-6，TNF-α 和NO 的產(chǎn)生。 Ndiaye 等[10]發(fā)現(xiàn)來(lái)源于黃豌豆種子的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物通過(guò)抑制活化的巨噬細(xì)胞中NO、TNF-α 和IL-6 的產(chǎn)生來(lái)發(fā)揮其抗炎作用。綠豆蛋白的水解產(chǎn)物綠豆肽 （mung bean peptides，MBPs）含有多種活性物質(zhì)。 綠豆肽不僅能提高缺氧耐受力和人體的免疫力，還具有抗氧化性、ACE抑制活性、抗腫瘤、降血壓、降膽固醇、改善腎功能等作用[11-15]。 然而，國(guó)內(nèi)關(guān)于綠豆肽抗炎作用的研究鮮有報(bào)道。 本課題組有關(guān)綠豆肽的免疫調(diào)節(jié)作用已得到證實(shí)[16]。 本文通過(guò)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 產(chǎn)生炎癥反應(yīng)， 觀察綠豆肽對(duì)所產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)是否有抑制作用， 為研究綠豆肽的抗炎作用及其機(jī)制提供基礎(chǔ)理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

綠豆寡肽（水解度30%），實(shí)驗(yàn)室自制；巨噬細(xì)胞RAW264.7，中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。

綠豆蛋白粉，山東招遠(yuǎn)市溫記食品有限公司；堿性蛋白酶，丹麥諾維信公司；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；DMEM 培養(yǎng)基，Hyclone；青霉素-鏈霉素溶液，碧云天生物技術(shù)有限公司；PBS，索萊寶生物科技有限公司；胰酶，碧云天生物技術(shù)有限公司；LPS，Sigma 公司；LDH 試劑盒、MPO 試劑盒、GSH 試劑盒，南京建成生物工程研究所；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒，Wanleibo 公司；細(xì)胞因子試劑盒，聯(lián)科生物有限公司；WST-1試劑盒， 碧云天生物技術(shù)有限公司； 中性紅試劑盒，碧云天生物技術(shù)有限公司；其它試劑為分析純級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 主要儀器、設(shè)備

倒置顯微鏡（AE31），麥克奧迪；酶標(biāo)儀（ELX-800），美國(guó)BIOTEK；CO2恒溫培養(yǎng)箱（HF-90），上海力申；SW-CJ-IF 型超凈工作臺(tái)，北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司； 低溫高速冷凍離心機(jī) （H-2050R），德國(guó)SORVALL。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 綠豆寡肽的制備方法 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期的研究成果，參照王凱凱等[17]的方法制備綠豆蛋白水解液。 將制備的綠豆蛋白水解液用孔徑為22 mm 的透析袋脫鹽24 h。將脫鹽處理的水解液用超濾分離裝置進(jìn)行超濾。超濾條件為壓力0.25 MPa，常溫，分子質(zhì)量1 000 u 有機(jī)超濾膜。 收集分子質(zhì)量低于1 000 u 組分，真空冷凍干燥，備用。將收集的樣品用氨基酸自動(dòng)分析儀參照GB/T5009.124-2003 測(cè)定氨基酸組成，Waters2695 高效液相色譜儀測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量分布。

1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)及試驗(yàn)分組 巨噬細(xì)胞RAW264.7 培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基（含100 IU/mL 青霉素和100 IU/mL 鏈霉素），在37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)， 用0.25%胰酶（含0.01% EDTA）消化，DMEM 培養(yǎng)基洗滌、離心，PBS 重新洗滌、離心后接種到培養(yǎng)皿中， 按試驗(yàn)分組進(jìn)行培養(yǎng)。 對(duì)照組：加入等量的PBS 溶液；LPS 組：加入終質(zhì)量濃度為2 μg/mL 的LPS；LPS+MBPs 處理組： 加入終質(zhì)量濃度為2 μg/mL LPS 預(yù)孵育4 h，再分別加入終質(zhì)量濃度為25，50，100 μg/mL 的MBPs。細(xì)胞培養(yǎng)12 h 后， 分別收集培養(yǎng)基和細(xì)胞做進(jìn)一步分析。

1.3.3 細(xì)胞增殖檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 按照1×104/孔密度接種于96 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后， 采用WST-1 法檢測(cè)細(xì)胞增殖。 將各組細(xì)胞加入20 μL WST-1 溶液，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2 h 后，將96 孔板置于搖床上搖動(dòng)1 min，以充分混勻待檢測(cè)體系。 以酶標(biāo)儀波長(zhǎng)630 nm 作為參考波長(zhǎng)， 在波長(zhǎng)450 nm處測(cè)定吸光值。

1.3.4 細(xì)胞吞噬能力檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 按照1×104/孔密度接種于96 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后，采用中性紅檢測(cè)細(xì)胞吞噬活性，PBS 溶液洗滌細(xì)胞1 次， 加入200 μL細(xì)胞培養(yǎng)液、20 μL 中性紅染色液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2 h，去除含有中性紅染色液的細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS 溶液洗滌1 次，加入200 μL 中性紅檢測(cè)裂解液，室溫?fù)u床上裂解10 min，在波長(zhǎng)690 nm 處測(cè)量吸光值。

1.3.5 髓過(guò)氧化物酶（MPO）活性檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 按照3×105/孔密度接種于6 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后，采用比色法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)髓過(guò)氧化物酶活性。 試驗(yàn)步驟按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.6 乳酸脫氫酶（LDH）活性檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 按照3×105/孔密度接種于6 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后，采用比色法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶活性。 試驗(yàn)步驟按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.7 還原型谷胱甘肽（GSH）含量檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 按照3×105/孔密度接種于6 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后，采用比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽含量， 試驗(yàn)步驟按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.8 炎癥因子含量檢測(cè) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期巨噬細(xì)胞RAW264.7 以3×105/孔密度接種于6 孔板，按照試驗(yàn)分組培養(yǎng)12 h 后，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中細(xì)胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α 的含量，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中方法和步驟測(cè)定。

1.3.9 數(shù)據(jù)處理方法 采用SPSS 19.0 進(jìn)行方差分析和Duncan 式進(jìn)行多重比較， 試驗(yàn)重復(fù)5 次，取平均值，結(jié)果以±s 表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 細(xì)胞增殖的影響

適度的巨噬細(xì)胞增殖可提高機(jī)體抵御外界和修復(fù)機(jī)體損傷的能力， 而過(guò)度刺激會(huì)引起細(xì)胞的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和機(jī)體損傷[18]。 由表1 可知， 與對(duì)照組相比，LPS 顯著抑制巨噬細(xì)胞增殖；與LPS 組相比，MBPs 低、中、高劑量組均顯著緩解LPS 對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的抑制作用（P＜0.05）， 并隨MBPs 濃度的升高，緩解作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)量效關(guān)系。 結(jié)果表明，MBPs 具有緩解LPS 抑制巨噬細(xì)胞增殖的能力。

2.2 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 細(xì)胞吞噬能力的影響

吞噬能力指巨噬細(xì)胞通過(guò)吞噬侵入的病原體及體內(nèi)衰老、 畸變的細(xì)胞而提高機(jī)體的抗感染能力，是衡量巨噬細(xì)胞活性的一個(gè)重要指標(biāo)[19]。 巨噬細(xì)胞通過(guò)吞噬清除異物、 病原體以及外來(lái)細(xì)胞發(fā)揮免疫效應(yīng)。 由圖1 可知，與對(duì)照組相比，當(dāng)巨噬細(xì)胞受到LPS 刺激時(shí)， 其吞噬能力顯著增強(qiáng)；與LPS 組相比，MBPs 低劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而低、中、高劑量的綠豆寡肽均能下調(diào)LPS 所引起的巨噬細(xì)胞吞噬能力增高， 并呈現(xiàn)量效關(guān)系。MBPs 對(duì)LPS 激活的巨噬細(xì)胞的吞噬能力具有顯著抑制作用。

2.3 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 髓過(guò)氧化物酶（MPO）活性的影響

髓過(guò)氧化物酶（MPO）是一種存在于髓系細(xì)胞嗜苯胺藍(lán)顆粒中重要的含鐵溶酶體酶， 由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和某些組織的巨噬細(xì)胞分泌，是免疫細(xì)胞的功能標(biāo)志和激活標(biāo)志[20]。 由圖2 可知，與對(duì)照組相比，LPS 顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞MPO 活性（P＜0.05）； 與LPS 組相比，MBPs 顯著降低巨噬細(xì)胞MPO 活性（P＜0.05），并且隨MBPs 濃度的升高，效果明顯，呈現(xiàn)量效關(guān)系。 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)MPO 活性的升高具有顯著抑制作用。

2.4 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 乳酸脫氫酶（LDH）活性的影響

乳酸脫氫酶 （LDH）是葡萄糖酵解所必需的酶， 具有將葡萄糖催化脫氫為丙酮酸和丙酮酸還原為乳酸的能力， 參與細(xì)胞內(nèi)能源物質(zhì)的無(wú)氧酵解和有氧氧化。 LDH 活性與巨噬細(xì)胞激活程度相關(guān)，是巨噬細(xì)胞激活的標(biāo)志之一[21]。 由圖3 可知，與對(duì)照組相比，LPS 促使巨噬細(xì)胞LDH 活性顯著升高（P＜0.05）；與LPS 組相比，MBPs 顯著降低巨噬細(xì)胞LDH 活性（P＜0.05），并且隨MBPs 濃度的升高，降低效果逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)量效關(guān)系。MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)LDH 活性的升高具有顯著抑制作用。

表1 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖的影響Table 1 Effect of MBPs on LPS-induced proliferation of macrophage RAW264.7

圖1 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7吞噬能力的影響Fig.1 Effect of MBPs on LPS-induced phagocytosis of macrophage RAW264.7

2.5 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 還原型谷胱甘肽（GSH）含量的影響

圖2 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 MPO 活性的影響Fig.2 Effect of MBPs on MPO activity produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

谷胱甘肽（GSH）是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸組成，屬于一種全身細(xì)胞保護(hù)性因子，具有抗凋亡、抗炎、促進(jìn)組織修復(fù)、減輕細(xì)胞損傷、清除自由基、解毒、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及細(xì)胞免疫等多種重要生理功能[22]。由圖4 可知，與對(duì)照組相比，LPS 能顯著降低巨噬細(xì)胞內(nèi)GSH 含量；與LPS 組相比，MBPs 可以顯著緩解LPS 所導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞胞內(nèi)GSH 水平下降（P＜0.05），呈現(xiàn)量效關(guān)系，且MBPs 中、高劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞內(nèi)GSH 含量的下調(diào)具有明顯的改善作用。

2.6 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 分泌細(xì)胞因子水平的影響

圖3 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 LDH 活性的影響Fig.3 Effect of MBPs on LDH activity produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

2.6.1 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 腫瘤壞死因子（TNF-α）含量的影響 TNF-α 是炎癥初期最早出現(xiàn)的炎癥因子，主要由巨噬細(xì)胞分泌，能促進(jìn)炎癥的發(fā)生與發(fā)展。由圖5 可知，與對(duì)照組相比，LPS 顯著增加TNF-α 的分泌水平（P＜0.05）；與LPS 組相比，MBPs 組顯著抑制TNF-α 的分泌水平（P＜0.05），并隨MBPs 濃度的升高，抑制作用逐漸增強(qiáng)， 呈現(xiàn)量效關(guān)系。 MBPs 可以顯著抑制LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌TNF-α。

2.6.2 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 分泌IL-1α 水平的影響 IL-1α 又稱淋巴細(xì)胞活化因子，可作用于機(jī)體的各個(gè)系統(tǒng)， 具有廣泛的生物學(xué)作用，在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，參與免疫調(diào)節(jié)和影響組織代謝方面發(fā)揮著積極的作用。由圖6 可知，與對(duì)照組相比，LPS 顯著增加IL-1α 的分泌水平（P＜0.05）；與LPS 組相比，MBPs 組顯著抑制IL-1α 的分泌水平（P＜0.05），并隨MBPs 濃度的升高，抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)量效關(guān)系。 MBPs 可以顯著下調(diào)LPS所誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌的IL-1α 水平。

圖4 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 GSH 含量的影響Fig.4 Effect of MBPs on GSH content produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

圖5 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌TNF-α 水平影響Fig.5 Effect of MBPs on TNF-α level produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

2.6.3 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7 細(xì)胞IL-6 含量的影響 IL-6 又被稱為B 細(xì)胞刺激因子，具有增強(qiáng)免疫、促進(jìn)造血、誘導(dǎo)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞增殖分化等作用。 由圖7 可知， 與對(duì)照組相比，LPS能顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞分泌IL-6（P＜0.05）；與LPS組相比，MBPs 可以顯著抑制LPS 刺激引起的巨噬細(xì)胞IL-6 水平升高，且MBPs 濃度越高，抑制越顯著，呈現(xiàn)量效關(guān)系。 MBPs 可以緩解LPS 對(duì)巨噬細(xì)胞分泌IL-6 的抑制作用，減輕炎癥程度，具有一定的抗炎效果。

圖6 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌IL-1α 水平的影響Fig.6 Effect of MBPs on IL-1α level produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

圖7 MBPs 對(duì)LPS 誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌IL-6 水平的影響Fig.7 Effect of MBPs on IL-6 level produced by LPS-induced macrophage RAW264.7

3 討論

巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中具有關(guān)鍵作用， 通過(guò)促進(jìn)機(jī)體免疫系統(tǒng)釋放炎癥介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)[23]。 LPS 作為一種細(xì)胞毒素，對(duì)巨噬細(xì)胞具有一定的激活作用， 刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO 和釋放細(xì)胞免疫因子等生物活性物質(zhì)， 適量的免疫因子具有提高機(jī)體抵抗外界刺激和修復(fù)機(jī)體損傷的作用， 而過(guò)量持續(xù)的刺激產(chǎn)生的免疫活性物質(zhì)則會(huì)引起細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞的損傷和凋亡[24]。結(jié)果表明，2 μg/mL LPS 可顯著抑制巨噬細(xì)胞增殖，同時(shí)能增強(qiáng)其吞噬能力，這與劉想等[25]、徐智敏[26]、李芬芬[27]的研究結(jié)果一致；而綠豆寡肽顯著增強(qiáng)巨噬細(xì)胞增殖， 并降低其吞噬能力， 緩解了LPS 對(duì)巨噬細(xì)胞的過(guò)度刺激，這表明MBPs 通過(guò)改善巨噬細(xì)胞趨化捕捉及其吞噬能力發(fā)揮抗炎作用。

MPO 和LDH 是巨噬細(xì)胞發(fā)揮生物學(xué)作用的兩種重要酶。 MPO 在外界刺激下隨著炎性細(xì)胞聚集而釋放，主要功能是在吞噬細(xì)胞內(nèi)殺滅微生物，利用過(guò)氧化氫和氯離子產(chǎn)生次氯酸鹽， 并形成具有氧化能力的自由基，構(gòu)成MPO-H2O2-鹵素系統(tǒng)，進(jìn)而在機(jī)體天然免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用[28-29]。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時(shí)， 細(xì)胞膜的通透性改變，LDH 從巨噬細(xì)胞胞內(nèi)釋放至胞外并激活其它免疫細(xì)胞，起到相應(yīng)的生物學(xué)作用[20]。 過(guò)量的LPS 可顯著提高巨噬細(xì)胞內(nèi)的LDH 和MPO 活性，MBPs 可以顯著降低LPS 對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)LDH 和MPO 的活性升高作用， 緩解LPS 對(duì)巨噬細(xì)胞的胞內(nèi)消化酶的過(guò)度刺激， 這表明MBPs 可以通過(guò)改善巨噬細(xì)胞酶解消化能力發(fā)揮抗炎作用。

還原型谷胱甘肽（GSH）是谷胱甘肽的主要活性成分。 研究表明，GSH 具有促進(jìn)組織修復(fù)、減輕細(xì)胞損傷、抗炎、清除自由基、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育及細(xì)胞免疫等多種重要生理功能[30]。 過(guò)量的LPS可顯著降低巨噬細(xì)胞內(nèi)GSH 水平，MBPs 可以顯著緩解LPS 導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞胞內(nèi)GSH 水平的下降，這表明綠豆肽通過(guò)上調(diào)巨噬細(xì)胞內(nèi)GSH 的水平發(fā)揮抗炎作用。

細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞在受到刺激后所產(chǎn)生的小分子生物活性物質(zhì)， 通過(guò)刺激或抑制多種細(xì)胞的活性、增殖和分化，調(diào)節(jié)其它細(xì)胞因子或抗體的分泌， 誘導(dǎo)靶細(xì)胞程序性死亡等途徑實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及參與炎癥反應(yīng)[31-32]。巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS 誘導(dǎo)刺激， 分泌TNF-α、IL-1α、IL-6等炎性細(xì)胞因子。 TNF-α 是炎癥反應(yīng)過(guò)程中最重要的炎癥介質(zhì)。 IL-1α 是IL-1 在機(jī)體中存在形式之一， 在參與機(jī)體各種急慢性炎癥的過(guò)程中，IL-1α 刺激細(xì)胞的表面呈炎性表型，大量的基因（細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、生長(zhǎng)因子等）開(kāi)始表達(dá)，大部分基因表達(dá)的蛋白質(zhì)直接參與炎癥與免疫反應(yīng)[33]。IL-6 由淋巴細(xì)胞和某些非淋巴細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等）產(chǎn)生，是一種參與機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子。 IL-6 具有多種生物學(xué)活性，除了具有免疫增強(qiáng)和促進(jìn)造血外，還可參與炎癥反應(yīng)， 主要體現(xiàn)在誘導(dǎo)B 細(xì)胞和T 細(xì)胞的增殖分化，誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生急性期蛋白，刺激巨噬細(xì)胞增殖分化。 IL-6 水平可以作為反映機(jī)體炎癥與組織損傷嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[34-35]。過(guò)度的LPS 刺激可使巨噬細(xì)胞內(nèi)的促炎性細(xì)胞因子顯著升高，這和舒曠怡[36]、張海[37]、喻鵬久[38]的研究結(jié)果一致。MBPs 可顯著緩解LPS 所誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的促炎性細(xì)胞因子IL-1α 和IL-6 過(guò)度分泌，表明其通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞促炎性細(xì)胞因子的水平發(fā)揮抗炎作用。

綜上所述，綠豆寡肽具有抗炎的效果，通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞增殖、吞噬、胞內(nèi)酶解消化及抑制促炎性細(xì)胞因子分泌發(fā)揮其抗炎作用。 這與利用色譜分析法結(jié)合超濾手段從大豆、牛乳、禽蛋中制備小分子抗炎肽（3～10 ku），研究其抗炎活性結(jié)果一致[39-41]。 目前研究發(fā)現(xiàn)，食源性生物活性肽的抗炎作用、免疫調(diào)節(jié)能力與其氨基酸的組成、序列、長(zhǎng)度、電荷、疏水性及肽分子的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)[42-43]。大量研究已證實(shí)谷氨酰胺、谷氨酸、酪氨酸、色氨酸以及疏水性氨基酸能促進(jìn)食源性生物活性肽的免疫調(diào)節(jié)活性。 本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)綠豆寡肽的氨基酸組成中富含疏水性氨基酸，如甘氨酸（Gly）、纈氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、脯氨酸（Pro）、苯丙氨酸（Phe），且總量高達(dá)28.37%，推測(cè)綠豆寡肽具有抗炎活性與其特殊的氨基酸組成及低分子質(zhì)量有關(guān)，然而，關(guān)于綠豆寡肽如何發(fā)揮其抗炎的作用機(jī)制及其構(gòu)效關(guān)系尚不清楚，有待于進(jìn)一步的研究。