張保友，史 建,王海龍,張貢獻,孔勁松,汪國文

(宿州市第一人民醫(yī)院:1.胸外科;2.呼吸內(nèi)科;3.腫瘤內(nèi)科,安徽宿州 234000; 4.蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院胸外科,安徽蚌埠 233004)

在全球預計癌癥死亡人數(shù)中，肺癌占男性患者死亡人數(shù)的29%，女性患者死亡人數(shù)的26%，在中國與癌癥相關的病死率方面位居首位[1]。肺癌的主要類型是小細胞肺癌(SCLC)和非小細胞肺癌(NSCLC)[2]。盡管傳統(tǒng)療法和新療法取得了長足的進步，但NSCLC患者的總體生存率仍然很差，因為大多數(shù)患者是在腫瘤轉(zhuǎn)移后才被診斷。因此，NSCLC的早期診斷十分必要。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是非編碼RNA家族的重要新成員，其長度超過200 bp[3]。據(jù)報道，越來越多的LncRNA在癌癥進展和轉(zhuǎn)移中起關鍵作用[4]。此外，最近的研究證實，LncRNA的失調(diào)與各種腫瘤(如胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和NSCLC)的診斷和預后相關[5]。但是，大多數(shù)LncRNA的詳細生物學作用仍然未知。NSCLC患者血清中失調(diào)的LncRNA(Loc 344887[6]、GAS5[7]、Linc00152[8])作用已確定，但是LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在早期NSCLC中的診斷價值仍然未知?；诖耍狙芯恐荚谔接懧?lián)合檢測LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152對NSCLC的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年12月至2019年12月宿州市第一人民醫(yī)院和蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院(后簡稱“兩所醫(yī)院”)收治的早期NSCLC患者90例納入腫瘤組；其中男58例，女32例；年齡46～79歲，平均(56.21±23.40)歲；腫瘤直徑0.8～6.6 cm，平均(2.39±1.64)cm；分型：腺癌46例，鱗癌44例；TNM分期：Ⅰ期78例，Ⅱ期12例。另選擇同期兩所醫(yī)院收治的肺部良性疾病患者90例納入良性組；其中男45例，女45例；年齡39～77歲，平均(56.54±24.92)歲；其中肺結(jié)核77例，肺炎13例。90例早期NSCLC患者和90例肺部良性疾病患者均經(jīng)兩所醫(yī)院病理科證實。排除標準：(1)嚴重心、肝、腎功能損害者；(2)長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；(3)患有精神疾病者；(4)患有其他癌癥者。同時選取同期兩所醫(yī)院體檢的體檢健康者90例納入對照組；其中男45例，女45例；年齡42～79歲，平均(56.32±22.44)歲。腫瘤組和良性組受試人員性別、年齡和吸煙史比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1，具有可比性。本研究經(jīng)兩所醫(yī)院倫理委員會研究通過，所有受試者均已簽署知情同意書。

1.2RNA的提取與實時熒光定量PCR 采集對照組人群、未治療的腫瘤組、良性組患者肘靜脈血5 mL。使用北京源暢致和生物科技有限公司的RNA提取試劑盒(RNA simple總RNA提取試劑盒，貨號：dp419)進行總RNA提取。使用微克特銳生物科技(武漢)有限公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號：K1622)進行逆轉(zhuǎn)錄。使用廣州鋮銨生物科技有限公司的SYBR green(貨號：AQ140-01)進行LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152相對水平的檢測。所有反應設置兩組重復試驗，取中間值以2-ΔΔCt進行mRNA相對水平的計算。

表1 一般臨床資料在腫瘤組和良性組患者間的比較

2 結(jié) 果

2.13組受試人員血清LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152相對表達水平比較 腫瘤組、良性組和對照組血清LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 3組受試人員血清LncRNA Loc344887、GAS5、 Linc00152的相對表達水平比較

2.2LncRNA鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關參數(shù) 為了評估血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者中的診斷價值，繪制ROC曲線。LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關參數(shù)見表3。

2.3LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關參數(shù) 為了評估血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152在早期NSCLC患者與體檢健康者中的診斷價值，通過軟件繪制ROC曲線。LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關參數(shù)見表4。

表3 LncRNA鑒別早期NSCLC患者與肺部良性疾病患者的ROC曲線相關參數(shù)

表4 LncRNA鑒別早期NSCLC患者與體檢健康者的ROC曲線相關參數(shù)

2.4LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152對NSCLC的聯(lián)合診斷 以Loc344887的陽性臨界值1.914、GAS5的陽性臨界值0.620、Linc00152的陽性臨界值1.868為診斷閾值，三者均滿足為聯(lián)合診斷陽性，反之則為聯(lián)合診斷陰性?；加性缙贜SCLC的為真陽性，未患有早期NSCLC的為真陰性。采用以上標準對兩所醫(yī)院就診的324例肺部疾病患者進行聯(lián)合診斷，血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc 00152聯(lián)合對早期NSCLC的診斷結(jié)果為陽性117例(其中病理結(jié)果陽性101例、陰性16例)、陰性207例(其中病理結(jié)果陽性7例、陰性200例)。因此，三者聯(lián)合診斷的靈敏度為0.863(101/117)，特異度為0.926(200/216)，準確度為0.929(301/324)。

3. 討 論

肺癌是全球最常見的癌癥。癌癥統(tǒng)計資料顯示，2015年中國約有429.2萬例新癌癥病例和281.4萬例癌癥死亡病例，其中肺癌是導致癌癥死亡的主要原因[9]。NSCLC約占肺癌病例的85%，其中包括鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌和其他幾種類型[10]。盡管已經(jīng)取得了一些癌癥治療進展，但NSCLC患者的5年生存率仍然未能令人滿意[11]。目前，癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和糖類抗原19-9(CA19-9)等傳統(tǒng)NSCLC生物標志物的靈敏度已不能令人滿意[12]，因此，迫切需要找到新的非侵入性的敏感生物標志物，以補充和改善當前的NSCLC篩選方法。

腫瘤細胞可以向外周血釋放大量RNA，并且RNA的水平足以進行定量分析[13-14]。據(jù)報道，血清中的LncRNA可以反映癌癥患者的病理和生理變化。現(xiàn)階段，許多研究將關注點集中于LncRNA[15-16]。LncRNA是一種轉(zhuǎn)錄物，長度超過200個核苷酸，保守性很差，不能翻譯成蛋白質(zhì)[17]。研究表明，LncRNA在許多生物學過程中，特別是在腫瘤生物學中起至關重要的作用[18]。例如，血清中的LncRNA HULC可以作為胃癌的新型生物標志物[19]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152聯(lián)合檢測對早期NSCLC診斷靈敏度為0.863，特異度為0.926，準確度為0.929。具有良好的診斷效能。

腫瘤組、良性組和對照組血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Loc344887、GAS5、Linc00152水平鑒別腫瘤組與良性組的靈敏度分別為0.86、0.87、0.87，特異度分別為0.85、0.88、0.88。Loc344887、GAS5、Linc00152水平鑒別腫瘤組與對照組的靈敏度分別為0.96、0.94、0.96，特異度分別為0.96、0.85、0.94。Linc00152是一種位于2p11.2的新型LncRNA，已被證明在胃癌、肝細胞癌、腎透明細胞癌、結(jié)腸癌和膽囊癌中表達失調(diào)[20-21]。此外，最近的研究表明，Linc00152可以作為食管鱗狀細胞癌和胃癌的血清生物標志物[22-23]。WU等[24]的一項研究報道了Loc344887在膽囊癌組織和細胞中的表達明顯升高。體外測定表明Loc344887通過調(diào)節(jié)誘導膽囊癌的上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化來抑制遷移、侵襲和增殖。GAS5位于1q25.1，包含12個外顯子，只有一個短的開放閱讀框，不能編碼功能蛋白[25]。GAS5的高表達豐度可以通過mTOR途徑與NMD途徑之間的相互作用來解釋[26-27]。提示mTOR途徑與NMD途徑可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用。

4 結(jié) 論

綜上所述，血清中LncRNA Loc344887、GAS5、Linc00152的相對表達量檢測可作為早期NSCLC的潛在標志。