李 洪 趙永旭 安姝亭

（1云浮力智農(nóng)業(yè)有限公司，廣東云浮 527526；2浙江詩華諾倍威生物技術(shù)有限公司，浙江杭州 310018）

自2012年以來豬流行性腹瀉（PED）一直是豬場仔豬高死亡率的首要因素，目前缺乏有效的疫苗及完善的評估手段。但有資料證實[1]，母源SIgA與仔豬對PEDV感染抵抗力有關(guān)，而血液中的中和抗體與其對新生仔豬的保護(hù)力作用沒有相關(guān)性。目前很多集團(tuán)豬場正在通過IgA監(jiān)測來評估仔豬PED的免疫狀態(tài)及調(diào)整相關(guān)免疫程序。

本試驗嘗試通過選擇不同的PED免疫策略后對母豬初乳及常乳中的IgA抗體消長規(guī)律監(jiān)測及比對，選出最優(yōu)組合，進(jìn)一步進(jìn)行免疫時間、劑量、免疫途徑優(yōu)化，為豬場PED的免疫接種方案調(diào)整及PED防控提供參考依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗時間、地點

2019年5月至2019年7月，試驗在某規(guī)模豬場開展。

1.2 試驗材料

1.2.1 活苗（經(jīng)典株）

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒（G5型）三聯(lián)活疫苗（弱毒華毒株＋弱毒CV777株＋NX株）。

1.2.2 活苗（變異株）

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗（WH-1R株＋AJ1102-R株）。

1.2.3 滅活苗

豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（華毒株＋CV777株）。

1.3 試驗分組

選取胎次、預(yù)產(chǎn)期相近的健康妊娠母豬50頭，隨機(jī)分為A、B、C、D、E 5個組，每組10頭母豬。A組母豬產(chǎn)前25 d肌肉注射PED變異株活苗1頭份，產(chǎn)前10 d后海穴注射PED滅活苗4 mL；B組產(chǎn)前25 d肌肉注射PED經(jīng)典株活苗1頭份，產(chǎn)前10 d后海穴注射PED滅活苗4 mL；C組母豬產(chǎn)前25 d、產(chǎn)前10 d各后海穴注射PED滅活苗4 mL；D組母豬產(chǎn)前25 d、產(chǎn)前10 d各肌肉注射PED滅活苗4 mL；E組為對照組，該組母豬免疫4 mL PBS。試驗的具體分組情況見表1。

表1 試驗分組及免疫程序

1.4 采樣檢測

采集產(chǎn)后1、3、5、7、9、12和15 d的每頭試驗?zāi)肛i乳汁，使用韓國安捷（Bionote）豬流行性腹瀉IgA抗體檢測試劑盒檢測IgA水平。

1.5 分娩數(shù)據(jù)記錄與數(shù)據(jù)處理

記錄下各組母豬產(chǎn)仔數(shù)據(jù)，進(jìn)行組間差異性比較。用Excel進(jìn)行初步統(tǒng)計與整理，再用SPSS進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果

2.1 分娩產(chǎn)仔情況

由表2可知，試驗組與對照組的總產(chǎn)仔數(shù)、死胎率、畸形率均無顯著差異，表明在產(chǎn)前25 d和產(chǎn)前10 d免疫接種PED疫苗對妊娠母豬無明顯應(yīng)激反應(yīng)，胎兒的生長發(fā)育情況均正常。母豬產(chǎn)仔具體情況見表2。

表2 不同免疫組母豬產(chǎn)仔情況統(tǒng)計

2.2 母豬乳汁中PEDV IgA抗體檢測

由表3可知，在組間比較上，C組母豬在產(chǎn)后第1 d乳汁中IgA抗體滴度顯著高于B、E組，其他各階段不同免疫組間IgA抗體滴度均無顯著差異；組內(nèi)比較上，B組母豬產(chǎn)后第1 d乳汁中IgA抗體滴度顯著低于產(chǎn)后第5、7、15 d，其他各組內(nèi)不同階段IgA抗體滴度均無顯著差異。

由圖1-4、表4-5可知，A、B、C、D組比E組整體的IgA抗體水平高，保護(hù)力更好；C、D組的IgA抗體水平優(yōu)于A、B組；C組的IgA抗體水平在5組中最好。

不同免疫策略產(chǎn)生抗體水平的變化規(guī)律不同，A、B、E組母豬在分娩后1～15 d乳汁中IgA抗體水平呈現(xiàn)出由低升高后再下降、升高的波浪曲線；而C、D組母豬在分娩后1～15 d乳汁中IgA抗體水平呈現(xiàn)的是持續(xù)穩(wěn)定的平直線。A組的IgA抗體水平峰值出現(xiàn)在第2、6次采樣檢測；B組出現(xiàn)在第3次采樣檢測時；C組出現(xiàn)在第5、6次采樣檢測時；D組出現(xiàn)在第6次采樣檢測時；E組出現(xiàn)在第3次采樣檢測時。

3 分析討論

產(chǎn)仔情況表明，產(chǎn)前25 d和產(chǎn)前10 d的腹瀉苗免疫對妊娠母豬無明顯應(yīng)激反應(yīng)，胎兒的生長發(fā)育情況均正常。

表3 不同免疫組PEDV IgA抗體在450和630 nm雙波長的OD值 （±s）

表3 不同免疫組PEDV IgA抗體在450和630 nm雙波長的OD值 （±s）

注：同列肩標(biāo)小寫字母不同表示組間差異顯著（P＜0.05）；同行肩標(biāo)大寫字母不同表示組內(nèi)差異顯著（P＜0.05）。

t 分娩/d組別1 3 5 7 9 12 15 A 組 2.48±0.32cd 2.92±0.21 2.46±0.29 2.48±0.27 2.72±0.32 2.93±0.19 2.57±0.2 B 組 2.16±0.23acA 2.63±0.19AB 2.97±0.2B 2.92±0.24B 2.63±0.2AB 2.63±0.2AB 2.8±0.23B C 組 2.82±0.22bd 2.73±0.25 2.69±0.25 2.8±0.29 2.92±0.18 2.91±0.27 2.63±0.18 D 組 2.78±0.12cd 2.83±0.19 2.68±0.17 2.76±0.24 2.68±0.26 2.8±0.27 2.78±0.22 E 組 2.15±0.18ac 2.38±0.29 2.77±0.2 2.52±0.25 2.33±0.22 2.38±0.26 2.42±0.26

表4 不同階段各組母豬IgA檢測陽性率 （%）

表5 不同階段各組母豬IgA檢測整齊度 （%）

不同免疫組母豬各階段的IgA抗體水平均較高，試驗組母豬和對照組母豬在分娩后的1～15 d乳汁對仔豬均有保護(hù)作用，這可能與試驗?zāi)肛i的免疫背景有關(guān)，通過背景調(diào)查發(fā)現(xiàn)，試驗場的腹瀉苗免疫程序是普免結(jié)合跟胎免疫，免疫記錄顯示，在試驗前半年左右試驗?zāi)肛i進(jìn)行過腹瀉苗的3次免疫，免疫間隔為1個月。

與對照組相比，免疫組的IgA抗體水平更高，表明疫苗免疫后，母豬乳汁能產(chǎn)生保護(hù)性PEDV IgA抗體，腹瀉苗的免疫對哺乳仔豬抗PEDV是有幫助的。

不同免疫策略IgA抗體水平的變化規(guī)律不同，通過免疫組間的比較可得，與注射PED活苗＋PED滅活苗相比，只注射滅活苗的母豬IgA抗體水平更高、更穩(wěn)定，保護(hù)力更好，該試驗結(jié)果與Paudel等人的試驗結(jié)果相符[2]。通過分析發(fā)現(xiàn)，這可能是由于母豬前期普免的原因使得母豬PED抗體水平很高（參考對照組），此時使用活疫苗免疫相比滅活疫苗更容易受到抗體干擾，因此針對普免2次以上PED疫苗的母豬或1年內(nèi)感染過PED的母豬，若進(jìn)行加強免疫更傾向于使用滅活疫苗，以此減少抗體對免疫的干擾。而針對未免疫過PED疫苗或未感染過PED的豬場，由于沒有PED抗體的感染，活苗＋死苗的免疫方式更能激發(fā)IgA抗體的產(chǎn)生[3]。另外，在只注射滅活苗的組別中，后海穴注射的母豬免疫效果較肌肉注射抗體產(chǎn)生更佳，證明在接種滅活苗時，后海穴注射具有更大的優(yōu)越性。

綜合5組母豬乳汁中PEDV IgA抗體的動態(tài)變化規(guī)律可得，初乳中的PEDVIgA抗體水平并非最高，母豬乳汁中PEDV IgA抗體水平最高點是在分娩后的5～12 d左右，這可能與母豬胎次、免疫次數(shù)、免疫方式及IgA的結(jié)構(gòu)與產(chǎn)生機(jī)制等有關(guān)。IgG在母豬體內(nèi)由血清傳至初乳中，出生小豬攝入的初乳抗體主要是IgG，但由于IgG只能在出生后24～48 h內(nèi)通過腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運，因此母豬分娩2～3 d以后乳汁中的主要抗體變?yōu)镮gA[4]。

有研究[5]表明，對母豬進(jìn)行2次口服腹瀉活疫苗后，其IgA在整個哺乳期均不會明顯下降。本試驗結(jié)果表明，經(jīng)產(chǎn)母豬在分娩后的1～15 d PEDV IgA抗體水平均較高，能有效保護(hù)仔豬。據(jù)此可推斷，經(jīng)產(chǎn)母豬在2次免疫腹瀉苗后，能在整個哺乳期保護(hù)仔豬免受PEDV的侵襲。

4 結(jié)論

通過選擇不同的PED免疫策略后對經(jīng)產(chǎn)母豬初乳及常乳中的IgA抗體消長規(guī)律監(jiān)測及比對，綜合產(chǎn)仔指標(biāo)結(jié)果可得，在產(chǎn)前25 d和產(chǎn)前10 d免疫腹瀉苗可產(chǎn)生較好的免疫保護(hù)，對經(jīng)產(chǎn)母豬推薦使用后海穴注射，2次免疫滅活苗，保護(hù)力更好，保護(hù)時間更長，可保護(hù)仔豬在整個哺乳期免受PEDV的侵襲。