趙 琳，王慶云，鄒秋萍

（安陽市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 安陽455000）

偽狂犬?。≒R）是由偽狂犬病病毒引起家畜和多種野生動物的一種急性傳染病。PR 最早發(fā)生于1813 年美國的牛群，病牛極度瘙癢，最后死亡。因此該病也被稱為“瘋癢病”。瑞士于1849年首次采用“偽狂犬病”這一名詞，這是因為病牛的臨床診斷癥狀與狂犬病相似。1902年匈牙利學(xué)者Aujeszky證明由病毒引起，故命名為奧耶斯基病。目前，豬、牛及綿羊等動物的發(fā)病率逐年增加，山羊感染偽狂犬病比較少見。除豬以外的其他動物發(fā)病后通常具有發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎等典型癥狀，均為致死性感染，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟損失。病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為該病重要傳染源，偽狂犬病毒對外界抵抗力較強，在污染的豬舍能存活1個多月。2020年3月，安陽市某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的158只山羊中有4只山羊發(fā)病，均為母羊，且有3只處于懷孕期間，其中已有2 只先后死亡，潛伏期短，病程短，病死率高，疑似為山羊偽狂犬病。

1 臨床診斷

1.1 臨床癥狀

該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)波爾山羊共158只，當(dāng)日，有4只母山羊發(fā)病，且有3 只處于懷孕期間；發(fā)病羊體溫升高至42 ℃，頭部搖晃，食欲減退，神志不清，出現(xiàn)磨牙等神經(jīng)癥狀，頭頸、尾部因奇癢出現(xiàn)蹭墻，撕咬，呈犬坐姿勢使勁在地上摩擦，奇癢部位因強烈搔癢而引發(fā)脫毛、水腫，輕微出血；后期，羊只站立不安，最終臥地不起。次日，2只發(fā)病母羊先后死亡，死前口吐白沫。

1.2 病理剖檢

剖檢病死羊，可見心內(nèi)外膜出血，心耳大理石花紋，心臟瓣膜出血，冠狀溝明顯出血，心肌壞死，心包積液；胸腔外膜出血；肺出血壞死，片狀水腫；肝臟點狀壞死灶；小腸輕度脹氣；腎斑狀出血，片狀出血，水腫；腸系膜淋巴出血；脾臟水腫，肌肉水腫。組織變化可見中樞神經(jīng)系統(tǒng)呈彌漫性非化膿性腦膜炎和神經(jīng)節(jié)炎，出現(xiàn)明顯膠質(zhì)細胞壞死，病變部位周圍細胞可見與神經(jīng)細胞一樣的核內(nèi)包涵體。

2 實驗室診斷

2.1 細菌學(xué)檢查

在無菌條件下采集病羊腦、肝、脾、腎等組織樣品涂片進行革蘭氏染色然后鏡檢，并接種營養(yǎng)肉湯蛋白胨培養(yǎng)基、血平板培養(yǎng)基在37℃條件下進行有氧和厭氧兩種方式培養(yǎng)，48 h后觀察結(jié)果，均未發(fā)現(xiàn)病原菌。

2.2 血清學(xué)檢測

對發(fā)病羊只進行采血，獲得全血后，于37℃培養(yǎng)箱靜置2 h，再放置4℃冰箱過夜，次日2 500 r/min 離心5 min，取上清備用。采用偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒對采集血清進行抗體檢測，結(jié)果樣品為PRV gE抗體陽性。gE抗體的存在表明豬曾感染PRV 的野毒株和/或接種過含gpI抗原的疫苗。而此養(yǎng)殖戶未給飼養(yǎng)羊只接種過偽狂犬疫苗，從而判斷受檢羊只為PRV野毒株感染羊只。

表1 偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果

2.3 分子病原學(xué)檢測

采集病羊扁桃體、淋巴結(jié)等組織病變部與健康部交界處組織，共3份組織，每份組織分別從3個不同位置剪取樣品1 g左右，放入2 ml離心管內(nèi)，加入研磨專用不銹鋼珠2粒，生理鹽水1.5 ml，放入自動研磨儀進行研磨，1 min后取出，放入4℃高速冷凍離心機8 000 r/min 離心2 min，取上清備用。采用核酸提取試劑盒對樣本進行處理后放入核酸自動提取儀進行核酸提取，提取物按試劑盒方法處理后置于熒光定量PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)進行擴增。結(jié)果顯示3 份樣品均為偽狂犬核酸陽性。

表2 偽狂犬病毒核酸熒光定量PCR檢測結(jié)果

3 防控

將發(fā)病羊只全部撲殺，病死羊只全部焚燒進行無害化處理，其余羊只隔離圈養(yǎng)，密切觀察。

用1%～2%氫氧化鈉、10%～20%生石灰對羊舍及周邊環(huán)境進行全方位噴灑消毒，水槽等用具及飼料也進行相應(yīng)消毒。

對暫無癥狀的羊只使用豬偽狂犬雙基因缺失疫苗按照2頭份/只進行偽狂犬疫苗緊急接種，電解多維飲水，提高羊只免疫力。羊群在免疫1 w 內(nèi)禁用其他抗病毒和激素類藥物，確保疫苗抗體的有效產(chǎn)生。

4 討論

該養(yǎng)殖戶的山羊和豬混養(yǎng)，其飼養(yǎng)的豬只和山羊均未免疫過偽狂犬疫苗，豬只也未見發(fā)病，分析其原因，該養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的山羊可能被攜帶病毒卻未發(fā)病的豬只、老鼠或其排泄物經(jīng)多種途徑感染而發(fā)病。豬只對該病毒具有一定的抵抗力，部分豬只感染后隱性帶毒成為重要的傳染源，建議山羊與豬分別飼養(yǎng)，豬只和山羊同時做好偽狂犬疫苗的接種，山羊飼料要定期檢查，避免病毒污染。

此次發(fā)病山羊的病原學(xué)檢測使用全自動核酸提取儀和普通熒光定量PCR儀，儀器操作時間為2.5 h，快速地診斷了發(fā)病病種，如果使用快速熒光定量PCR儀，1 h內(nèi)就可讀取試驗結(jié)果。近年來，熒光定量PCR技術(shù)已非常成熟，各縣區(qū)動物疫病防控機構(gòu)都已經(jīng)配備熒光定量PCR 儀，相比傳統(tǒng)的PCR，熒光定量PCR 靈敏性特異性有了顯著提高，并且速度快、安全無污染。這使得我們在較短時間內(nèi)可以安全準(zhǔn)確地確定動物發(fā)病原因，快速高效地分析病毒在動物體內(nèi)的增殖情況。熒光定量PCR技術(shù)是較為推薦的病原學(xué)檢測手段。

養(yǎng)殖場戶可定期對飼養(yǎng)羊只進行抗體水平檢測，確保羊只免疫具有較高的保護力。采集羊血清，首先使用偽狂犬病毒gE 抗體檢測試劑盒進行檢測，如果偽狂犬病毒gE 抗體陽性，則說明羊只遭受野毒感染，可予以淘汰；如果偽狂犬病毒gE 抗體陰性，則使用偽狂犬病毒gB抗體檢測試劑盒進行檢測，如若使用IDEXX 偽狂犬病毒gB 抗體檢測試劑盒，檢測值小于等于0.6，則證明羊只體內(nèi)產(chǎn)生了疫苗免疫抗體，但通過長期試驗證明，當(dāng)gB 抗體檢測值小于等于0.2 時，疫苗免疫保護力較高，建議gB抗體檢測值大于0.2時，對飼養(yǎng)羊只及時進行補免。