張帆 朱賢林

[摘要] 目的 探討丙泊酚改善抑郁大鼠電休克治療（ECT）后學(xué)習(xí)記憶功能的組織型纖溶酶原激活物（tPA）基因甲基化/去甲基化調(diào)控機(jī)制。 方法 成年雄性SD大鼠72只，隨機(jī)取18只作為對(duì)照組（C組），剩余54只大鼠進(jìn)行抑郁造模后隨機(jī)分為D組、E組、F組，每組18只。C組不予實(shí)驗(yàn)處理;D組腹腔注射生理鹽水+偽ECT;E組腹腔注射生理鹽水+ECT;F組腹腔注射丙泊酚+ECT。采用糖水偏好百分比（SPP）、逃避潛伏期（EL）及空間探索時(shí)間（SET）檢測(cè)大鼠抑郁行為及學(xué)習(xí)功能;逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)海馬tPA、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT）1、DNMT3a、DNMT3b及10～11易位（TET）1mRNA水平;Western blot檢測(cè)海馬tPA及DNMT1的表達(dá);MeDIP-qPCR檢測(cè)tPA甲基化率。 結(jié)果 ECT處理后，與D組比較，E、F組SPP上升，E組EL延長(zhǎng)、SET縮短，海馬CA1區(qū)tPA mRNA及蛋白表達(dá)下降，DNMT1 mRNA及蛋白表達(dá)增加，tPA甲基化率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）;與E組比較，F(xiàn)組EL縮短、SET延長(zhǎng)，海馬CA1區(qū)tPA mRNA及蛋白表達(dá)增加，DNMT1 mRNA及蛋白表達(dá)下降，tPA甲基化率降低（均P < 0.05）;各組DNMT3a、DNMT3b及TET1 mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。 結(jié)論 丙泊酚能夠有效減輕ECT誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損傷，其機(jī)制可能與下調(diào)海馬CA1區(qū)DNMT1表達(dá)減輕tPA的甲基化水平，增加tPA mRNA及蛋白表達(dá)水平有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 丙泊酚;電休克;組織型纖溶酶原激活物;表觀遺傳學(xué);學(xué)習(xí)記憶功能

[中圖分類號(hào)] R749.054? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）08（a）-00

11-06

[Abstract] Objective To investigate the protective effect of Propofol on learning and memory function in depressive rats after electroshock therapy （ECT） by regulating tissue plasminogen activator （tPA） gene methylation/demethylation. Methods Seventy-two adult male SD rats were used in this study and eighteen rats were randomly selected as the control group （group C）. The remaining fifty-four rats were randomly divided into group D， group E and group F after depressive modeling， with 18 rats in each group. Group C was not given experimental treatment; group D was intraperitoneally injected with normal saline + pseudo-ECT; group E was intraperitoneally injected with normal saline + ECT; group F was intraperitoneally injected with Propofol + ECT. Depressive behavior and learning function of rats were measured by sucrose preference percentage （SPP）， escape latency （EL） and space exploration time （SET）. The mRNA levels of hippocampus tPA， DNA methyltransferase （DNMT） 1， DNMT3a， DNMT3b and ten-elevan translocation （TET） 1 were detected by reverse transcription PCR. The expressions of tPA and DNMT1 in hippocampus were detected by Western blot. MeDIP-qPCR was used to detect tPA methylation rate. After ECT treatment， compared with group D， SPP increased in Group E and F， EL prolonged and SET shortened in group E， tPA mRNA and protein expression in hippocampal CA1 area decreased， DNMT1 mRNA and protein expression increased， and tPA methylation rate increased， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Compared with group E， in group F， EL shortened and SET prolonged， tPA mRNA and protein expression in hippocampal CA1 area increased， DNMT1 mRNA and protein expression decreased， and tPA methylation rate decreased （all P < 0.05）. There was no significant difference in mRNA expression of DNMT3a， DNMT3b and TET1 in each group （all P > 0.05）. Conclusion Propofol can effectively reduce ECT-induced learning and memory impairment in depressive rats. The mechanism may be related to the downregulate the expression of DNMT1 in the hippocampal CA1 region to reduce the methylation level of the tPA gene resulting in increase the expression level of tPA mRNA and protein.

[Key words] Propofol; Electroshock; Tissue plasminogen activator; Epigenetics; Learning and memory function

電休克治療（electroconvulsive therapy，ECT）是治療抑郁癥起效最快的方法，但存在學(xué)習(xí)記憶功能損害等副作用[1-3]。本課題組前期研究[4]發(fā)現(xiàn)，丙泊酚麻醉下行ECT可以明顯減輕抑郁大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能損害，且與調(diào)節(jié)海馬內(nèi)組織型纖溶酶原激活物（tissue plasminogen activator，tPA）相關(guān)，然而該研究卻未能揭示丙泊酚在此過(guò)程中對(duì)tPA基因表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制以及海馬CA3及DG區(qū)是否也參與其中。研究[5]顯示，表觀遺傳修飾等在基因的轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮了重要的作用，主要包括DNA甲基化/去甲基化等。DNA的甲基化由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，DNMT）催化完成，DNA在DNMTs的作用下使其CpG二核苷酸5′端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，5-mC），導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄活性下降[6]。真核細(xì)胞主要表達(dá)3類DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b，其中DNMT2作用尚不清楚[7]。研究[8]顯示，5-mC的水平是由DNA甲基化和去甲基化共同決定，DNA中5-mC可在10～11易位（ten-eleven translocation，TET）蛋白家族的羥基化作用下進(jìn)一步修飾為5-羥甲基胞嘧啶，誘發(fā)DNA去甲基化改變，且TET蛋白家族的TET1在腦部的表達(dá)水平較高。

本研究擬明確丙泊酚是否可能通過(guò)調(diào)節(jié)海馬各分區(qū)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b及TET1的表達(dá)，進(jìn)而影響tPA mRNA的水平參與抑郁大鼠ECT后學(xué)習(xí)記憶功能的變化，以期為臨床應(yīng)用丙泊酚保護(hù)抑郁患者ECT后學(xué)習(xí)記憶功能提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物選擇及建模

2～3月齡健康SD大鼠72只，雄性，SPF級(jí)，體重180～250 g。由重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（渝）2018-0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：0017476。本研究已通過(guò)四川省簡(jiǎn)陽(yáng)市人民醫(yī)院科學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。動(dòng)物飼養(yǎng)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心，SPF飼養(yǎng)環(huán)境：室溫22℃，相對(duì)濕度65%，單籠飼養(yǎng)。隨機(jī)獲取54只大鼠采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）建立抑郁模型[4]。大鼠每天隨機(jī)給予1種刺激：明暗顛倒24 h，4℃冰水游泳5 min，45℃熱水游泳5 min，禁飲24 h，禁食24 h，夾尾1 min，水平搖晃鼠籠10 min，潮濕墊料24 h，45°鼠籠傾斜24 h。2 d不連續(xù)使用同種刺激，連續(xù)28 d。CUMS處理后，通過(guò)行為學(xué)方法評(píng)估大鼠抑郁狀態(tài)，所有大鼠均成功建模。

1.2 動(dòng)物分組及處理方法

將剩余18只SD大鼠列為對(duì)照組（C組）;取建模成功的抑郁大鼠隨機(jī)分為抑郁組（D組）、ECT組（E組）、ECT+丙泊酚組（F組），每組18只。C組不予實(shí)驗(yàn)處理;D組腹腔注射8 mL/kg生理鹽水后行偽ECT處理，即兩耳夾電極但不予通電;E組腹腔注射生理鹽水8 mL/kg后行ECT（Niviqure-SA型，印度Niviqure公司）處理，電極放置方法與偽ECT一致，輸出電量約120 mC，以引發(fā)大鼠強(qiáng)直—陣攣抽搐作為ECT誘發(fā)成功標(biāo)準(zhǔn)[4]。F組腹腔注射丙泊酚注射液80 mg/kg（批號(hào)：NG149，意大利AstraZeneca公司）后行ECT處理，方法同E組。實(shí)驗(yàn)處理1次/d，連續(xù)7 d。ECT處理期間，E組和F組大鼠吸入50% O2，維持其正常呼吸功能。

1.3 大鼠行為學(xué)檢測(cè)

1.3.1 糖水偏好實(shí)驗(yàn)? 以糖水偏愛(ài)百分比（sucrose preference percentage，SPP）作為衡量指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)前，訓(xùn)練動(dòng)物適應(yīng)含糖飲水，每籠放置兩個(gè)水瓶。第一個(gè)24 h，兩瓶均裝有1%蔗糖水;隨后的24 h，一瓶裝1%蔗糖水，另一瓶裝純水。24 h禁食禁水后進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)：同時(shí)給予每只大鼠事先定量好的兩瓶水：一瓶1%蔗糖水，一瓶純水，24 h后取走兩瓶并稱重，計(jì)算大鼠總液體消耗、糖水消耗及SPP。SPP=（糖水消耗/總液體消耗）×100%[4]。

1.3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)? 建模前后及實(shí)驗(yàn)處理后，各進(jìn)行1次Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。水箱分為SE、SW、NW、NE 4個(gè)象限。第1～5天進(jìn)行逃避潛伏期（escape latency，EL）實(shí)驗(yàn)：將NE象限設(shè)置為目標(biāo)象限，每只大鼠隨機(jī)選定1個(gè)入水象限，然后按照逆時(shí)針?lè)较蛞来螐母飨笙奕胨?，從入水開始計(jì)時(shí)，到登上平臺(tái)為止，記錄為EL;若大鼠60 s內(nèi)未上平臺(tái)，將其引上平臺(tái)，并計(jì)EL為60 s。取第3～5天的平均值作為EL最終成績(jī)。大鼠第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)：撤除目標(biāo)象限中的平臺(tái)，讓大鼠從目標(biāo)象限的對(duì)側(cè)象限入水，記錄大鼠60 s時(shí)間內(nèi)在目標(biāo)象限的停留時(shí)間為空間探索時(shí)間（space exploration time，SET）[4]。

1.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR（Rt-PCR）分析

每組取6只大鼠分離海馬并提取RNA。根據(jù)基因庫(kù)tPA、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、TET1及GAPDH的序列，設(shè)計(jì)tPA的上游引物為5′-AGAGAGGTTTC-CACCCCATC-3′，下游引物為5′-CTGTCCAGTCAG-GGAGCTGT-3′;DNMT1的上游引物為5′- CAGAT-GTTCCATGCACACT -3′，下游引物為5′- TGTGGATG-TAGGAAAGTTGCA-3′;DNMT3a的上游引物為5′-AGGGACATGGGGGCAAACT-3′，下游引物為5′-GC-AAGAAACAAAAACCCAAAC-3′;DNMT3b的上游引物為5′-GGACTACTTTGCATGTGAATA-3′，下游引物為5′-GCTGTTGTTTTGGTATCTTAG-3′;TET1的上游引物為5′-TGGCCAGAAGGGAAAAGCAA-3′，下游引物為5′-TAATCACCCACTTGGCGACC-3′;GAPDH的上游引物為5′-GAAGGTCGGAGTCAACGGA-3′，下游引物為5′-TGAGTCCTTCCACGATACCAA-3′。將逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性2 min，94℃變性30 s，55℃退火30 s，47℃延伸30 s，31個(gè)循環(huán)后72℃補(bǔ)充延伸3 min。取等量擴(kuò)增產(chǎn)物電泳，使用凝膠發(fā)光圖像分析系統(tǒng)顯影，目的mRNA與GAPDH mRNA比值即為目的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 Western blot分析

每組取6只大鼠分離海馬并提取蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度。取等量蛋白與上樣緩沖液混合，100℃煮沸5 min，樣品經(jīng)電泳后電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，膜經(jīng)BSA 37℃封閉1 h后與相應(yīng)一抗[大鼠抗tPA抗體（Abcam，ab157469）、大鼠抗DNMT1抗體（Abcam，ab188453）及大鼠抗GAPDH抗體（上海碧云天生物技術(shù)研究所，AF0006）]結(jié)合，4℃孵育過(guò)夜。沖洗后滴加辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗37℃溫孵2 h，漂洗后采用ECL法顯色，以目的蛋白與GAPDH條帶灰度值的比值作為目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.6 MeDIP-定量聚合酶鏈反應(yīng)

各組采用Qiagen基因組DNA提取試劑盒提取6只大鼠海馬DNA并檢測(cè)其純度及完整性;采用超聲儀對(duì)DNA進(jìn)行隨機(jī)片段化（400～500 bp），并取5 μL于2%瓊脂糖凝膠電泳;加熱變性后將單鏈DNA樣品分成兩份，其中一份作為IP加入抗5-mC抗體，另一份作為input抗體。使用免疫磁珠分離上述樣品中甲基化DNA片段的抗體復(fù)合物，通過(guò)酚氯仿抽提和乙醇沉淀法純化免疫共沉淀的甲基化DNA片段（MeDIP）并檢測(cè)DNA濃度。qPCR在熒光定量PCR 儀（ABI，StepOnePlus）上進(jìn)行，分別記錄Ct值，用Ctinput和CtMeDIP表示。tPA的甲基化率=2 （Ctinput-CtMeDIP）×100%。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，并行方差齊性檢驗(yàn)。部分行為學(xué)數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析，其余數(shù)據(jù)采用單因素方差分析且兩兩比較采用LSD-t法。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠CUMS建模前后及ECT處理后SPP和Morris水迷宮結(jié)果比較

CUMS建模前，各組大鼠SPP比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）;CUMS建模后，與C組比較，D組、E組及F組SPP下降，EL明顯延長(zhǎng)、SET明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;ECT處理后，與D組比較，E組、F組SPP明顯升高、EL明顯延長(zhǎng)、SET明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;與C組比較，D組及F組SPP下降，且D組、E組及F組EL明顯延長(zhǎng)、SET明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 海馬各分區(qū)tPA、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b及TET1 mRNA表達(dá)情況

各組大鼠海馬CA1區(qū)tPA及DNMT1 mRNA表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;CA3區(qū)及DG區(qū)tPA及DNMT1 mRNA表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。與C組比較，D組、E組和F組tPA mRNA表達(dá)水平降低，DNMT1 mRNA表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;與D組比較，E組和F組tPA mRNA表達(dá)水平降低，DNMT1 mRNA表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;與E組比較，F(xiàn)組tPA mRNA表達(dá)水平升高，DNMT1 mRNA表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。各組大鼠海馬各區(qū)DNMT3a、DNMT3b及TET1 mRNA表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 各組大鼠海馬CA1區(qū)tPA及DNMT1蛋白相對(duì)表達(dá)水平及tPA啟動(dòng)子區(qū)甲基化率比較

各組大鼠海馬CA1區(qū)tPA及DNMT1的蛋白相對(duì)表達(dá)水平及tPA啟動(dòng)子區(qū)甲基化率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。與C組比較，D 組、E組和F組tPA蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低，DNMT1蛋白相對(duì)表達(dá)水平及tPA啟動(dòng)子區(qū)甲基化率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;與D組比較，E組和F組tPA蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低，DNMT1蛋白相對(duì)表達(dá)水平及tPA啟動(dòng)子區(qū)甲基化率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;與E組比較，F(xiàn)組tPA蛋白相對(duì)表達(dá)水平升高，DNMT1蛋白相對(duì)表達(dá)水平及tPA啟動(dòng)子區(qū)甲基化率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)圖1，表3。

3 討論

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抑郁造模降低了大鼠的SPP，增加其EL，縮短SET，大鼠表現(xiàn)出抑郁行為和學(xué)習(xí)記憶功能的下降。盡管ECT處理能夠提高抑郁大鼠的SPP，改善其抑郁樣行為，但同時(shí)增加了大鼠的EL及縮短了SET，大鼠表現(xiàn)出學(xué)習(xí)記憶功能的損傷。然而，丙泊酚預(yù)處理有效改善ECT后抑郁大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。

本課題組前期研究顯示，海馬內(nèi)tPA的表達(dá)變化是調(diào)節(jié)抑郁大鼠ECT后學(xué)習(xí)記憶功能改變的重要原因[4]。本研究結(jié)果進(jìn)一步明確，抑郁大鼠ECT后學(xué)習(xí)記憶功能的損傷僅與海馬CA1區(qū)tPA基因及蛋白的表達(dá)下調(diào)相關(guān)，丙泊酚預(yù)處理能夠減少抑郁大鼠海馬CA1區(qū)tPA基因及蛋白的表達(dá)下調(diào)，改善抑郁大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。這一結(jié)果與之前研究中電生理實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相符，提示海馬CA1區(qū)是調(diào)節(jié)抑郁大鼠ECT后學(xué)習(xí)記憶功能的關(guān)鍵區(qū)域。真核生物基因的表達(dá)受到多種遺傳因素的共同調(diào)控[9-12]。近年來(lái)，有關(guān)于DNA啟動(dòng)子區(qū)域甲基化及去甲基化的表觀遺傳學(xué)修飾機(jī)制是諸多學(xué)者關(guān)注的重點(diǎn)[13-15]。新近的研究顯示，DNA甲基化是長(zhǎng)期記憶形成和維持的分子機(jī)制之一，可通過(guò)影響突觸相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)調(diào)控突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶[16-17]。Levenson等[18]通過(guò)使用DNMTs抑制劑干預(yù)離體小鼠海馬的腦片后發(fā)現(xiàn)， 記憶促進(jìn)相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化減少，海馬腦片長(zhǎng)時(shí)程記憶減弱，提示DNA甲基化參與了中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸可塑性。Miller等[19]也發(fā)現(xiàn)，大鼠在條件性恐懼記憶形成過(guò)程中，海馬區(qū)蛋白磷酸酶1 基因甲基化水平增高，應(yīng)用DNMTs抑制劑可以逆轉(zhuǎn)其甲基化，阻礙了恐懼記憶的形成。研究顯示DNA甲基化也能夠影響到神經(jīng)細(xì)胞tPA 的表達(dá)水平。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，乙醇孵育能夠下調(diào)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)tPA mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)，而加入DNMT抑制劑后能夠明顯的增加該細(xì)胞內(nèi)tPA的表達(dá)[20]。對(duì)于去甲基化酶TET1的研究則顯示，TET1 基因敲除小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元生成障礙伴學(xué)習(xí)記憶能力損傷，同時(shí)與前體細(xì)胞分化相關(guān)的基因表現(xiàn)為高甲基化和表達(dá)下調(diào)，提示TET1與神經(jīng)元前體細(xì)胞的分化以及學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能密切相關(guān)[21]。為了進(jìn)一步明確丙泊酚對(duì)接受ECT的抑郁大鼠海馬tPA基因甲基化的影響，本實(shí)驗(yàn)觀察了海馬各區(qū)甲基化酶及去甲基化酶的表達(dá)變化，結(jié)果顯示海馬CA1區(qū)DNMT1的表達(dá)變化可能與接受不同處理抑郁大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能變化相關(guān)。此外，本研究結(jié)果同時(shí)發(fā)現(xiàn)海馬各分區(qū)DNMT3a、DNMT3b及TET1并未參與抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的變化，提示海馬CA1區(qū)的DNMT1的改變可能是影響tPA基因表達(dá)的核心因素。鑒于DNA的甲基化酶及去甲基化酶均為非特異性酶，可作用于多種基因，本研究進(jìn)一步驗(yàn)證了tPA啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，與海馬CA1區(qū)的DNMT1表達(dá)變化趨勢(shì)相符，抑郁能夠增加海馬CA1區(qū)tPA啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平，ECT則進(jìn)一步增加了tPA的甲基化，丙泊酚能夠減輕ECT引起的tPA甲基化改變，推測(cè)丙泊酚可以通過(guò)減少海馬CA1區(qū)DNMT1的表達(dá)，抑制tPA啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平，進(jìn)而增加tPA蛋白及mRNA的表達(dá)水平，在ECT的治療過(guò)程中發(fā)揮學(xué)習(xí)記憶功能的保護(hù)作用。

鑒于DNMT抑制劑作用的廣譜性，因此本研究無(wú)法使用DNMT抑制劑特異性下調(diào)DNMT1的表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證tPA的表達(dá)變化對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，這可能是本研究的主要不足之處[22-23]。此外，表觀遺傳學(xué)機(jī)制尚涉及組蛋白的乙酰化/去乙?；?，這些機(jī)制是否參與了丙泊酚對(duì)抑郁大鼠電休克處理的學(xué)習(xí)記憶保護(hù)作用尚不明確，后續(xù)需進(jìn)一步深入研究[24-25]。

綜上所述，丙泊酚能夠有效減輕抑郁大鼠ETC后的學(xué)習(xí)記憶損傷，其機(jī)制可能與下調(diào)海馬CA1區(qū)DNMT1表達(dá)減輕tPA啟動(dòng)區(qū)域的甲基化水平，增加tPA mRNA及蛋白表達(dá)水平有關(guān)。

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（收稿日期：2020-04-14）