張欣倩，包 穎，陳 贊，王曉紅，趙 楊

(1.淄博市林業(yè)科學(xué)研究所，山東 淄博 255000；2.吉林省林業(yè)技術(shù)推廣站，吉林 長(zhǎng)春 130022；3淄博潤(rùn)豐原生態(tài)環(huán)境工程有限公司，山東 淄博 255000；4.淄博市野生動(dòng)植物保護(hù)站，山東 淄博 255000)

豚草(Ambrosiaartemisiifolia)又名艾葉破布草，屬菊科(Compositae)、豚草屬(Ambrosia)植物，常生于荒地、路邊、水溝旁或農(nóng)田中。以種子隨作物、水流及交通工具攜帶進(jìn)行傳播。豚草適應(yīng)能力強(qiáng)，由于生長(zhǎng)旺盛，所以對(duì)水和營(yíng)養(yǎng)的消耗量很高，當(dāng)其形成一定的長(zhǎng)勢(shì)后，會(huì)對(duì)其他人類種植的作物產(chǎn)生壓制作用，若不及時(shí)清除，還會(huì)對(duì)農(nóng)業(yè)操作產(chǎn)生阻礙，對(duì)農(nóng)業(yè)環(huán)境和人類健康均有害[1,2]。

生物農(nóng)藥是指可以用來(lái)防治有害生物的生物體本身或者是源自生物體中各種對(duì)有害生物具有一定類似“農(nóng)藥”生理活性的物質(zhì)[3]。目前人們習(xí)慣把生物農(nóng)藥分為：植物源農(nóng)藥、動(dòng)物源農(nóng)藥、微生物源農(nóng)藥三大類[4]。植物源農(nóng)藥作為一種生物農(nóng)藥，對(duì)環(huán)境破壞小，對(duì)靶標(biāo)以外的生物具有毒性低、安全性，并且不易產(chǎn)生抗藥性，由于來(lái)源于植物活性成分，所以這類生物農(nóng)藥在施用后能快速自然降解[5]。植物源農(nóng)藥包括植物體內(nèi)的次生代謝物質(zhì)和轉(zhuǎn)基因植物農(nóng)藥[6]，目前研究普遍認(rèn)為這些次生代謝產(chǎn)物對(duì)非靶標(biāo)生物相對(duì)安全[4]。

近年來(lái)，一些學(xué)者嘗試對(duì)豚草活性成分進(jìn)行提取，并用其提取液對(duì)害蟲(chóng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室毒力試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)豚草提取液具有一定的殺蟲(chóng)抑菌活性[7]。本文以豚草為原料，采用超聲波法提取活性物質(zhì)，選擇錦鯉和小白鼠為急性毒性試驗(yàn)對(duì)象，為豚草植物源制劑對(duì)動(dòng)物的作用提供安全依據(jù)。

1試驗(yàn)材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試植物

豚草，平均株高60 cm，平均含水率79.37 %。

1.1.2供試哺乳動(dòng)物

小白鼠，體重17～22 g。

1.1.3供試魚

錦鯉，體長(zhǎng)4 cm左右。

1.2試驗(yàn)方法

采集新鮮豚草全株并洗凈，將其陰干，置于干燥箱內(nèi)50 ℃烘干，粉碎后置于棕色廣口瓶中。選取300 mL錐形瓶，稱取豚草干粉10 g和80 %的乙醇100 mL放入瓶中并封口，將混合液在40 ℃下超聲波振蕩45 min。抽濾超聲波處理后的混合物，所得殘?jiān)?jīng)干燥后，稱其質(zhì)量。將濾液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至油狀，用蒸餾水定容到50 mL，4 ℃避光保存。

1.2.1豚草粗提液對(duì)小白鼠安全性測(cè)定方法

正式試驗(yàn)前首先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，找出引起白鼠0 %和100%死亡的劑量，以便安排正式試驗(yàn)。正式試驗(yàn)選用健康小白鼠，性別相同或雌雄各半，采用胃腸給藥，每只受試小白鼠喂藥前稱體重，記錄體重?cái)?shù)據(jù)并算出平均體重，本試驗(yàn)小白鼠平均體重為22.35 g。在預(yù)試驗(yàn)測(cè)得的劑量范圍內(nèi)設(shè)5個(gè)劑量組。本研究通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定正式試驗(yàn)的五個(gè)劑量組分別為1 mL、2 mL、3 mL、4 mL和5 mL。每個(gè)劑量設(shè)10只小白鼠，3次重復(fù)，并設(shè)置一個(gè)對(duì)照組。對(duì)受試小白鼠分組灌服不同劑量。給藥后24 h內(nèi)對(duì)照組與受試組同樣不喂食，不喂水，24 h后記錄死亡率。

1.2.2豚草粗提液對(duì)錦鯉安全試驗(yàn)測(cè)定方法

正式試驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，通過(guò)預(yù)試驗(yàn)找出引起紅錦鯉0 %和100 %死亡的劑量，以便正式試驗(yàn)在此范圍內(nèi)設(shè)置不同的劑量組。預(yù)試驗(yàn)中每個(gè)濃度設(shè)3次重復(fù)，5條一組。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，設(shè)置了5個(gè)劑量組，將不同劑量粗提液裝入容器中，然后將錦鯉放入進(jìn)行觀察，每個(gè)容器中都放置加氧泵，間隔2 h記錄死亡數(shù)，共觀察48 h，及時(shí)取出死亡個(gè)體，計(jì)算死亡率。試驗(yàn)從中間劑量開(kāi)始，從錦鯉受藥反應(yīng)判斷劑量和組數(shù)是否合適，以便調(diào)整。

2結(jié)果與分析

2.1 豚草提取液活性成分提取率

活性成分的提取率計(jì)算采用差值法，公式如下：提取率=(原干粉質(zhì)量-提取后殘?jiān)|(zhì)量)/原干粉質(zhì)量×100 %，由試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，超聲波提取法提取率為22.16 %(見(jiàn)表1)。

表1 超聲波提取法對(duì)豚草活性成分的提取率

2.2 豚草提取液對(duì)小白鼠急性毒性

小白鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，豚草提取液對(duì)小白鼠的半致死劑量為2.515 mL，LD50為4 986.396 mg·kg-1。根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，豚草活性物質(zhì)對(duì)白鼠的LD50=4 986.396 mg·kg-1>500 mg·kg-1，在低毒范疇。

表2 豚草提取藥液對(duì)小白鼠急性毒性測(cè)定結(jié)果

分析濃度對(duì)數(shù)與死亡機(jī)率值間的相關(guān)性得出，R2=0.962 9，相關(guān)性密切?；貧w方程為y=3.261 1x-7.059。劑量越大，白鼠的死亡率越高，兩者呈正相關(guān)(見(jiàn)圖1)。

圖1 豚草粗提液對(duì)小白鼠急性毒性試驗(yàn)毒力回歸線

2.3豚草提取藥液對(duì)錦鯉安全測(cè)定結(jié)果

受試錦鯉在給藥后，產(chǎn)生明顯的中毒癥狀，加速游動(dòng)，活動(dòng)較正常時(shí)更為劇烈。

表3 豚草粗提液對(duì)紅鯉魚急性毒性測(cè)定結(jié)果

從表3中可以看出，豚草粗提物對(duì)紅鯉魚的致死中濃度LC50為350.262 μg·mL-1，濃度對(duì)數(shù)與死亡機(jī)率值間的相關(guān)性分析得出，R2=0.987，相關(guān)性密切?；貧w方程為y=1.866 6x+0.250 7(見(jiàn)圖2)。

圖2 豚草粗提液對(duì)紅鯉魚急性毒性試驗(yàn)線性直線

根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行農(nóng)藥對(duì)魚類的毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，豚草活性物質(zhì)對(duì)錦鯉LC50=350.262 μg·mL-1=350.262 mg·L-1>10 mg·L-1，低毒。

3結(jié)論與討論

LD50即致死中量，為衡量農(nóng)藥毒性的重要指標(biāo)，根據(jù)LD50大小即可劃分農(nóng)藥的毒性等級(jí)，本研究結(jié)果表明：豚草提取液對(duì)小白鼠經(jīng)口腸胃給藥后的LD50為4 986.396 mg·kg-1，屬于低毒范疇。

豚草稀釋液對(duì)錦鯉急性毒性試驗(yàn)表明：豚草提取液對(duì)錦鯉LC50為350.262 mg·L-1，根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)可以確定，屬于低毒范疇，對(duì)環(huán)境幾乎無(wú)害，對(duì)人、畜安全性較高，可在林木有害生物防治工作中進(jìn)一步驗(yàn)證并推廣。