朱 琳,李 屹,張 蛟,俞 泓,張曉靜,劉惠亮

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍總醫(yī)院第三醫(yī)學(xué)中心臨床學(xué)院心臟病研究所，北京 100039；2.解放軍總醫(yī)院第三醫(yī)學(xué)中心心內(nèi)科,北京 100039；3國(guó)家電網(wǎng)公司北京電力醫(yī)院心內(nèi)科，北京 100073)

他汀類(lèi)藥物，是臨床常用的降膽固醇類(lèi)藥物。多項(xiàng)基礎(chǔ)研究表明他汀類(lèi)藥物具有非降膽固醇作用外的多效心肌保護(hù)功能，如：抗炎、抗氧化、抗凋亡等[1-3]。臨床研究證實(shí)，長(zhǎng)期口服他汀類(lèi)藥物可以有效減少心梗面積、改善心肌再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)損傷后的心功能[4-5]。但尚有臨床研究指出，經(jīng)皮動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention,PCI)術(shù)前給予患者連續(xù)1周服用他汀類(lèi)藥物卻無(wú)明顯抗MIRI的保護(hù)作用，他汀類(lèi)對(duì)心肌的保護(hù)作用與服用的時(shí)間成明顯的正相關(guān)[6,7]，推測(cè)可能因他汀缺乏組織特異性識(shí)別及易于在體內(nèi)代謝所致。對(duì)于急性心梗需緊急行血液再灌注的患者，如何能夠通過(guò)短時(shí)給予他汀類(lèi)藥物，使藥物在體內(nèi)持續(xù)緩釋以長(zhǎng)時(shí)間在心肌部位達(dá)到他汀類(lèi)的有效作用濃度，成為突破他汀類(lèi)藥物在臨床抗MIRI應(yīng)用限制的關(guān)鍵點(diǎn)。藥物遞送系統(tǒng)可為解決他汀類(lèi)藥物在臨床治療MIRI的應(yīng)用限制提供了有效的策略。阿托伐他汀(Atorvastatin, Ator)作為強(qiáng)效降脂藥，具有強(qiáng)抗氧化性、較長(zhǎng)的半衰期、安全性好等特點(diǎn)使其在臨床應(yīng)用受到廣泛關(guān)注。因此，采用Ator作為本研究的目標(biāo)藥物。

新型納米材料-金納米顆粒(gold nanoparticle，AuNPs)是易于合成的小型穩(wěn)定金屬膠體粒子(尺寸范圍為1～100 nm)，因其官能化較為簡(jiǎn)單，具有良好的生物相容性及親和性，是潛在的心肌細(xì)胞基因/藥物載體[8]。此外，由于金納米顆粒的特殊結(jié)構(gòu)或基團(tuán)使其可模擬超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶等多種酶的生物學(xué)活性。已有研究將金納米顆粒單獨(dú)應(yīng)用于糖尿病、肝損傷等疾病的抗氧化應(yīng)激的治療研究中[9]。因此，金納米顆粒不僅可作為治療心肌缺血/再灌注損傷的藥物載體以達(dá)到他汀類(lèi)藥物緩釋的作用，其抗氧化性能更能與他汀藥物協(xié)同，以增強(qiáng)單一他汀類(lèi)藥物抗MIRI作用。

綜上，本研究旨在通過(guò)觀(guān)察“AuNPs-Ator”藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體對(duì)體外心肌細(xì)胞氧糖剝奪再灌注損傷后的保護(hù)作用，為AuNPs進(jìn)一步應(yīng)用于心肌疾病中藥物/基因遞送及協(xié)同他汀類(lèi)藥物以高效發(fā)揮抗MIRI保護(hù)作用提供有價(jià)值的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠24 h內(nèi)乳鼠若干只，雌雄不限，北京維通利華有限公司提供，使用合格證號(hào)：SCXK(京)2016-0006。

1.1.2試劑 DMSO(美國(guó)Sigma公司，No 1129E0311)；檸檬酸三鈉(西隴化工股份有限公司,GB/T 16493-1996)；SH-PEG-NH2(MW 2000，北京華力德有限公司,RO0192305)；阿托伐他汀(上海麥克林有限公司,C10326766)；CCK-8試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)公司，No 090619200102)；DMEM(8119416)、0.05%胰蛋白酶(2003820)、0.25%胰蛋白酶(美國(guó)Gibco公司，2053591)；BCA染色試劑盒(中國(guó)碧云天生物技術(shù)有限公司，No 071019190910)；抗熒光衰減封片劑(北京索萊寶有限公司，No S2110)。

1.1.3儀器 納米粒度及Zeta電位分析儀(英國(guó)馬爾文公司)；超凈臺(tái)(BCV-1360，中國(guó))；細(xì)胞孵箱(日本松下公司)；酶標(biāo)儀(美國(guó)Versa公司)；動(dòng)物手術(shù)器械(上海手術(shù)器械廠(chǎng))；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(美國(guó)lambda公司)。

1.2 金納米顆粒的制備采用檸檬酸鹽還原法合成AuNPs。取100 mL濃度為0.25 mmol·L-1HAuCl4水溶液加熱，溶液沸騰后加入4.5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的檸檬酸鈉水溶液，繼續(xù)保持沸騰狀態(tài)15 min。此時(shí)，溶液可呈深紅色。室溫下冷卻后備用。

1.3 藥物復(fù)合載體的制備及表征

1.3.1藥物復(fù)合載體的制備 PEG與AuNPs按W/W為3 ∶1修飾金顆粒表面，室溫條件下避光攪拌6 h。15 000 r·min-1離心15 min、棄上清重懸，這一過(guò)程重復(fù)多次以棄去未結(jié)合的PEG，即可得到功能化的AuNPs(F-AuNPs)，室溫下留置備用。取2 mg的Ator溶于3 mL含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1% DMSO的功能化金顆粒溶液中，室溫條件下攪拌24 h，15 000 r·min-1離心15 min取上清重懸，小心吸取上清備用。重懸液冷凍干燥后稱(chēng)重。

1.3.2DLS測(cè)量粒徑及電勢(shì) 取1 mL AuNPs、F-AuNPs、AuNPs-Ator三種溶液，加入純水稀釋至4 mL。分別取3 mL、1 mL上述溶液置于粒徑與電勢(shì)測(cè)量的樣品池中，每種溶液運(yùn)行3次。

1.3.3UV-Vis測(cè)量阿托伐他汀的搭載量 精密稱(chēng)取25 mg的Ator于25 mL的容量瓶中，用含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1% DMSO溶液的蒸餾水溶解并定容至刻度，超聲5 min，充分溶解。將Ator母液分別用純水稀釋至不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，過(guò)濾，UV-Vis測(cè)定在238 nm處測(cè)定不同濃度標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度。得到以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。將Ator與F-AuNPs反應(yīng)后離心得到的待測(cè)液過(guò)濾，測(cè)定吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)公式算出未加載的Ator濃度。并根據(jù)公式(1)計(jì)算出Ator的負(fù)載量。

負(fù)載量/%=(阿托伐他汀的總投入量-上層清液阿托伐他汀的含量)/載阿托伐他汀的納米復(fù)合物的總質(zhì)量×100%

(1)

1.3.4UV-Vis測(cè)定藥物復(fù)合載體的釋放速率 稱(chēng)取一定質(zhì)量的Ator溶解于含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1% DMSO的F-AuNPs溶液中，室溫條件下反應(yīng)24 h。反應(yīng)后的溶液，離心去上清，重懸，這一過(guò)程重復(fù)2～3次，以充分棄去溶液中未結(jié)合的Ator。重懸后的溶液靜置室溫條件下，分別在不同時(shí)間段取500 μL溶液于離心管中離心取上清，純水重懸后再次加入原溶液中。取出的上清液，用純水稀釋至3 mL，采用UV-Vis在238 nm處測(cè)出最大吸光度值，所得結(jié)果帶入阿托伐他汀的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中得出待測(cè)液濃度。

1.3.5原代心室肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定 參考文獻(xiàn)中方法提取新生乳鼠的心室肌細(xì)胞(neunatal rat ventricular mycytes,NRVMs)，隔天換液[10]。原代的心室肌細(xì)胞鑒定應(yīng)用心肌特異肌鈣蛋白T(cTNT)細(xì)胞免疫熒光染色。

1.3.6CCK-8評(píng)估藥物復(fù)合載體的細(xì)胞毒性 將NRVMs培養(yǎng)于96孔板中(1×105個(gè)細(xì)胞/孔)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組(0、0.05、0.1、0.15、0.2 mmol·L-1)設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。分別培養(yǎng)1 d、3 d。PBS輕柔沖洗細(xì)胞2～3遍，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行CCK-8的配置與操作。酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞于450 nm處的吸光度。根據(jù)公式(2)計(jì)算得出細(xì)胞的存活率。

細(xì)胞存活率/%=[A(加藥)-A(空)]/[A(0)-A(空)]×100%

(2)

1.4 原代心肌細(xì)胞OGD/R模型的建立與抗MIRI的檢測(cè)

1.4.1氧糖剝奪再灌注模型(Oxygen glucose deprivation/ reperfusion，OGD/R)的建立 經(jīng)不同條件處理的NRVMs，置于37 ℃、5% CO2條件下孵育24 h后，將原高糖培養(yǎng)基更換為含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15% FBS無(wú)糖的培養(yǎng)基，細(xì)胞在充滿(mǎn)95% N2和5% CO2的孵箱中繼續(xù)孵育24 h，孵育后的細(xì)胞重新?lián)Q成新鮮的原培養(yǎng)基成分，在充滿(mǎn)5% CO2和95%空氣再孵育3 h，以建立OGD/R模型。

1.4.2DHE染色評(píng)估藥物復(fù)合載體的抗氧化性 將NRVMs以6×105個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種在24孔板，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、OGD/R組、AuNPs預(yù)處理組、Ator預(yù)處理組、AuNPs-Ator預(yù)處理組。將含15%血清的DMEM稀釋好的終濃度為0.05 mmol·L-1AuNPs、AuNPs-Ator及4 μmmol·L-1Ator加入相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)組中孵育24 h，除空白對(duì)照組正常培養(yǎng)外，其他組均建立OGD/R模型。按說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行細(xì)胞DHE染色。激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察不同視野。

1.4.3RNA提取及qRT-PCR檢測(cè) 心肌細(xì)胞分組及處理方法同上。使用TRIzol試劑盒提取各處理組RNA。采用Bulge-LoopTMmiRNA qRT-PCR Starter Kit檢測(cè)試劑盒進(jìn)行qRT-PCR，反應(yīng)在7500 Real-Time PCR System上進(jìn)行。用于實(shí)時(shí)PCR的引物如下：rno-miR-199a-5p和U6內(nèi)參。使用2-ΔΔCt方法計(jì)算各處理組中目標(biāo)基因miRNA-199a-5p的表達(dá)水平。

1.4.4Western blot檢測(cè) 心肌細(xì)胞分組及處理方法同上。提取處理后各組的細(xì)胞蛋白，配置15% SDS-PAGE凝膠，濃縮膠，在冰浴下進(jìn)行電轉(zhuǎn)使蛋白盡快轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。將PVDF膜置于5%配置好的脫脂奶粉中室溫條件下封閉1 h，根據(jù)所顯示的marker條帶分離相應(yīng)的目的條帶。獲取的條帶置于預(yù)先配置好的一抗稀釋液(caspase-3、GSK-3β)中過(guò)夜，充分洗滌后室溫條件下繼續(xù)二抗孵育1 h，超敏發(fā)光液顯影蛋白。最終采用ImageJ分析目標(biāo)條帶及內(nèi)參條帶的灰度值。

2 結(jié)果

2.1 藥物復(fù)合載體的表征

2.1.1粒徑及電勢(shì) Fig 1所示，AuNPs在水溶液中分散測(cè)得的納米粒徑集中在5～15 nm左右的范圍，電勢(shì)為-11 mV(Fig 1A、D)。經(jīng)PEG修飾后，粒徑集中在10～25 nm，電勢(shì)為4 mV(Fig 1B、D)。靜電吸附上Ator后，藥物復(fù)合載體的粒徑分布在20～55 nm的區(qū)間內(nèi)，電勢(shì)則為-7 mV(Fig 1C、D)。根據(jù)藥物搭載前后的納米粒徑及電勢(shì)的變化，可以確定“AuNPs-Ator”藥物復(fù)合材料已成功構(gòu)建。

Fig 1 Particle size and electric potential distribution curve of drug complex A:Particle size distribution of AuNPs; B:Particle size distribution of F-AuNPs;C:Particle size distribution of “AuNPs-Ator”; D:Electric potential of different materials.

Fig 2 Schematic illustration of Ator connect to F-AuNPs

2.1.2藥物復(fù)合載體的搭載量 利用UV-Vis測(cè)得Ator的紫外吸收峰(Fig 3A)，根據(jù)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同濃度下的最大吸收峰，繪制出吸光度與濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)。以濃度(C,g·L-1)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，建立兩者之間的回歸方程為Y=37.82X+0.118，R2=0.994 78(Fig 3B)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和公式(1)可間接計(jì)算出，Ator的搭載量為60%。

Fig 3 UV absorption peak of atorvastatin (A)and its standard curve of concentration against

2.1.3阿托伐他汀的釋放速率 “AuNPs-Ator”藥物復(fù)合載體在室溫靜置條件下于不同時(shí)間點(diǎn)收集上清，測(cè)定其紫外吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到不同時(shí)間點(diǎn)的上清液中的藥物濃度，計(jì)算與所搭載藥物總量的比值得到累積釋放率，曲線(xiàn)擬合得到藥物釋放曲線(xiàn)(Fig 4)。結(jié)果顯示藥物復(fù)合載體48 h的累積釋放率達(dá)到88.36%，10 h藥物即可達(dá)到穩(wěn)定釋放狀態(tài)。

Fig 4 Drug-releasing profile

2.1.4藥物復(fù)合載體的細(xì)胞相容性 CCK-8試劑因與活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶發(fā)生反應(yīng)，經(jīng)CCK-8孵育細(xì)胞的活性與其在450 nm處檢測(cè)得到的吸光度值成正比。細(xì)胞存活率與吸光度之間的關(guān)系按公式(2)計(jì)算，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如Fig 5所示。1、3 d培養(yǎng)后的藥物復(fù)合載體濃度在0.05 mmol·L-1組的細(xì)胞存活率與正常未加藥空白組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但0.10、0.15、0.20 mmol·L-1這3組濃度與空白組相比，均明顯影響細(xì)胞的活性(P<0.05)。表明藥物復(fù)合載體的濃度為0.05 mmol·L-1時(shí)，對(duì)細(xì)胞具有良好的相容性。

Fig 5 Viability of NRVMs treated with different concentrations of drug complex carrier after one day or three A:viability of NRVMs at 24 h time pretreated by drug complex carrier; B: viability of NRVMs at 72 h time pretreated by drug complex carrier. *P<0.05,**P<0.01 vs 0 mmol·L-1.

2.2 體外NRVMs模型中的藥物復(fù)合載體抗氧糖剝奪再灌注損傷

2.2.1各組心室肌細(xì)胞氧糖剝奪后的ROS水平比較 DHE染色后紅色熒光的強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)ROS的水平與呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(Fig 6)，相對(duì)于正?？瞻捉M，OGD/R模型建立后的心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯增加(P<0.01)。0.05 mmol·L-1濃度的AuNPs組、4 μmmol·L-1的Ator處理組，細(xì)胞內(nèi)ROS含量均明顯低于OGD/R組細(xì)胞(P<0.01)。而加入“AuNPs-Ator”藥物復(fù)合載體處理的NRVMs，其胞內(nèi)ROS水平不僅明顯低于OGD/R組(P<0.01)，而且亦明顯低于兩組單獨(dú)材料孵育組(P<0.01)。因此，我們可以說(shuō)明AuNPs不僅可以適用于A(yíng)tor的藥物搭載載體，也可以發(fā)揮與Ator協(xié)同抗氧化的作用。

Fig 6 ROS levels in NRVMs of different groups detected by DHE staining(scale bar: 50 μm)**P<0.01 vs Blank;##P<0.01 vs OGD/R; △△P<0.01 vs Ator

2.2.2各組miRNA-199a-5p基因表達(dá)的水平 miR-199a-5p是對(duì)缺氧敏感的miRNA，研究指出其表達(dá)上調(diào)通過(guò)miR-199a-5p/GSK-3β機(jī)制途徑參與MIRI后心肌梗死與肥大的進(jìn)展[11]。如Fig 7所示，OGD/R組與正?？瞻捉M相比miR-199a-5p表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，AuNPs處理組的目的基因表達(dá)水平相較于OGD/R組而言無(wú)明顯變化(P>0.05)，阿托伐他汀可明顯降低OGD/R處理后心肌細(xì)胞中miR-199a-5p的表達(dá)水平(P<0.05)，而“AuNPs-Ator”易被細(xì)胞吞噬的特點(diǎn)及較高Ator搭載量，使得其降低目標(biāo)基因的表達(dá)水平要優(yōu)于單獨(dú)Ator的應(yīng)用(P<0.01)。

Fig 7 miR-199a-5p expression level of different *P<0.05 vs OGD/R;##P<0.01 vs Ator

2.2.3各組蛋白量的表達(dá) 各處理組中蛋白表達(dá)結(jié)果如Fig 8所示，與空白組相比OGD/R可誘導(dǎo)miR-199a-5p表達(dá)上調(diào)以抑制GSK-3β這一心肌保護(hù)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)心肌細(xì)胞的凋亡。Ator與“AuNPs-Ator”均可通過(guò)明顯抑制miR-199a-5p表達(dá)以上調(diào)GSK-3β蛋白(P<0.01)，而藥物復(fù)合載體組的保護(hù)作用優(yōu)于單獨(dú)他汀治療組(P<0.01)?！癆uNPs-Ator”、AuNPs及Ator均可以明顯抑制心肌細(xì)胞凋亡(P<0.01)，且“AuNPs-Ator”的心肌保護(hù)作用均優(yōu)于單獨(dú)的材料處理組(P<0.01)。

Fig 8 Expression of capase-3 protein and GSK-3β protein measured by Western A:The expression of GSK-3β protein,**P<0.01 vs Blank;#P<0.05,##P<0.01 vs OGD/R ;B:The expression of capase-3 protein,**P<0.01 vs OGD/R；##P<0.01 vs Ator.

3 討論

缺血性心肌病是我國(guó)居民致死的主要原因之一，雖然隨著藥物溶栓、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)血管成形術(shù)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)等治療方法的臨床應(yīng)用，缺血心肌可得到及時(shí)而有效的再灌注治療，明顯降低了缺血性心臟病的死亡率。但與此同時(shí)，MIRI也引起了我們極大的關(guān)注，可以說(shuō)MIRI已成為缺血心肌從冠脈再灌注治療中獲得最佳療效的主要障礙。本研究構(gòu)建了原代心肌細(xì)胞的氧糖剝奪再灌注模型，研究結(jié)果表明OGD/R處理組的細(xì)胞內(nèi)ROS含量、miR-199a-5p基因及凋亡蛋白表達(dá)水平均明顯高于空白組，體外的OGD/R可很好地模擬在體的心肌缺血/再灌注損傷。

他汀類(lèi)藥物的多效心肌保護(hù)作用得到廣泛的基礎(chǔ)研究證實(shí)，但在臨床研究中他汀類(lèi)抗MIRI的有效性卻未得到統(tǒng)一結(jié)論。如上文所述，他汀類(lèi)藥物早期啟動(dòng)與更好的臨床抗MIRI療效呈明顯正相關(guān),他汀類(lèi)藥物在冠脈開(kāi)通前的短期急性給藥的心肌保護(hù)效用明顯降低[12]。因此，急需一種新的給藥策略以突破這種限制。金納米顆粒作為被廣泛研究應(yīng)用的納米材料，其臨床應(yīng)用的安全性被大量證實(shí)。且PEG修飾后的AuNPs可降低單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)對(duì)其吞噬作用，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)清除時(shí)間，有望增加心肌局部的他汀類(lèi)藥物濃度?；诖?，本研究構(gòu)建“AuNPs-Ator”這一復(fù)合載體并進(jìn)行理化表征。結(jié)果表明，該藥物復(fù)合載體在0.05 mmol·L-1處對(duì)細(xì)胞具有良好的相容性，且具有較高Ator的搭載量及緩釋效果。

大量研究表明，氧化應(yīng)激是MIRI發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一，可在冠脈開(kāi)通時(shí)的前幾分鐘內(nèi)在多種途徑的作用下大量產(chǎn)生。再灌注損傷發(fā)生過(guò)程中也存在持續(xù)引起ROS增加的正反饋?zhàn)饔猛緩?，這一作用途徑主要依賴(lài)于ROS刺激下胞膜L型鈣離子通道的活化作用。MIRI發(fā)展過(guò)程中在高ROS水平作用下，導(dǎo)致LTCC被谷胱甘肽化，離子通道活性增加，細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平升高促進(jìn)線(xiàn)粒體ROS產(chǎn)生。而ROS的增加則繼續(xù)使LTCC保持活躍狀態(tài)。ROS“滾雪球效應(yīng)”加重了血管開(kāi)通后的心肌損傷，誘導(dǎo)了再灌注后心肌細(xì)胞的凋亡、壞死，促進(jìn)了心肌細(xì)胞肥大與重構(gòu)的進(jìn)展[13]。因此，通過(guò)研究抗氧化應(yīng)激對(duì)MIRI所產(chǎn)生的有利影響，將為預(yù)防和控制MIRI的不良預(yù)后提供有價(jià)值的治療策略。DHE染色結(jié)果表明，“AuNPs-Ator”藥物復(fù)合載體中AuNPs與Ator可具有協(xié)同抗氧化作用。

細(xì)胞凋亡是目前公認(rèn)的MIRI發(fā)生發(fā)展過(guò)程中另一重要的病理生理機(jī)制，預(yù)防和治療心肌細(xì)胞凋亡是減緩MIRI后心室重構(gòu)研究的重要領(lǐng)域。微小RNA(miRNA)是小的(<22個(gè)核苷酸)非編碼RNA，miRNA作為mRNA翻譯的內(nèi)源性細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)劑，可通過(guò)調(diào)節(jié)多種基因表達(dá)在心血管疾病進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。Zuo等[11]率先提出Ator可能通過(guò)抑制miR-199a-5p基因表達(dá)以上調(diào)心肌保護(hù)蛋白GSK-3β的水平來(lái)降低MIRI后心肌的凋亡，這一特定的途徑揭示了他汀類(lèi)藥物心肌保護(hù)效用的部分潛在作用機(jī)制。本研究中通過(guò)qRT-PCR及Western blot再次證實(shí)了Ator對(duì)miR-199a-5p/GSK-3β這一通路的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)由于A(yíng)uNPs易被細(xì)胞吞噬的特性，使得藥物復(fù)合載體相較于A(yíng)tor更易進(jìn)入細(xì)胞以調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)。

綜上所述，“AuNPs-Ator” 藥物復(fù)合載體不僅具有Ator藥物高搭載量及緩釋效果，其更可協(xié)同AuNPs與Ator的抗氧化性，增強(qiáng)對(duì)目的基因的調(diào)節(jié)作用，從而更好地發(fā)揮他汀類(lèi)藥物的心肌保護(hù)效應(yīng)。