劉穎，李光先，孫俠，陳秀娟，陳漢金

（廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測研究院，廣東廣州 511447）

氣霧劑制品在日常生活中應(yīng)用廣泛，通常指利用氣體壓力將封入耐壓密閉容器中的液體、流動性軟膏、乳液或粉劑噴出，分散為細(xì)微霧狀物或均勻泡沫的制品[1]。其中，拋射劑作為噴射動力的來源，是氣霧劑制品的重要組成部分。二甲醚（DME）相對分子質(zhì)量46.069，分子式CH3OCH3，作為氣霧劑的拋射劑是其主要應(yīng)用領(lǐng)域，使用量僅次于石油液化氣[2-4]。由于二甲醚與其他常用拋射劑相比，與水的相容性十分優(yōu)異，是很多水溶性噴霧產(chǎn)品選擇的拋射劑。二甲醚作為化妝品用氣霧劑拋射劑在國內(nèi)外均有報(bào)道[5-6]。一般認(rèn)為，二甲醚是低毒物質(zhì)，但大劑量吸入二甲醚對呼吸道和神經(jīng)系統(tǒng)會造成損害[7]。二甲醚對雌性生殖系統(tǒng)的影響尚不明確，特別是低濃度短時間吸入二甲醚的研究較少。本研究對成熟雌性大鼠予以亞急性吸入二甲醚染毒，以探討較低濃度二甲醚對雌性大鼠生殖系統(tǒng)的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雌性SD大鼠18只，8～10周齡，購自廣東省實(shí)驗(yàn)動物中心［SCXK（粵）2018-0002］，飼養(yǎng)于本單位屏障環(huán)境動物設(shè)施［SCXK（粵）2018-0137］，自由飲食。

1.2 主要試劑和儀器

二甲醚，純度99%，購自廣州市廣氣氣體有限公司；促卵泡素（Follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（Lutenizing hormone，LH）、睪酮（Testosterone，T）、孕酮（Progesterone，PROG）、雌二醇（Estradiol，E2）和抑制素B（Inhibin B，INH-B）均為酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測試劑盒，購自武漢華美生物工程有限公司；HOPE-MED 8050動式染毒控制系統(tǒng)，天津合普公司；多功能酶標(biāo)儀，美國Thermo公司；病理工作站，美國Thermo公司。

1.3 試驗(yàn)方法

大鼠按體重隨機(jī)分成3組，分別為對照組（吸入新鮮空氣）和低劑量染毒組（二甲醚含量0.5%，體積分?jǐn)?shù)）、高劑量染毒組（二甲醚含量1.0%，體積分?jǐn)?shù)），每組6只。大鼠以籠養(yǎng)方式放入染毒柜內(nèi)（染毒過程中禁水禁食），采用吸入方式染毒，2 h/ d，5 d/周，連續(xù)染毒4周。二甲醚氣體經(jīng)管道進(jìn)入HOPE-MED 8050A型動式染毒柜中。染毒持續(xù)過程中，氧氣濃度保持恒定，均大于20%，且染毒柜內(nèi)保持動態(tài)負(fù)壓，避免毒物外泄。每日觀察大鼠的活動情況，試驗(yàn)開始和結(jié)束時稱量大鼠體重。

1.4 血清生殖激素檢測

染毒結(jié)束24 h內(nèi)，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，3 000 r/min離心10 min，吸取上清，保存于-80 ℃冰箱。按試劑盒說明書檢測血清中各生殖激素的濃度。

1.5 組織病理學(xué)觀察

大鼠處死后，分離卵巢和子宮，卵巢稱重，計(jì)算卵巢臟器系數(shù)。臟器以4%甲醛溶液固定后，采用Thermo病理工作站制片，石蠟包埋，蘇木素-伊紅染色，顯微鏡下觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠體重和卵巢臟器系數(shù)

如表1所示，二甲醚染毒組與對照組比較，染毒前體重的組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），染毒后兩組大鼠的體重有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；染毒結(jié)束后大鼠卵巢重量和卵巢臟器系數(shù)的組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 組織病理學(xué)觀察

大體解剖觀察中，各染毒組的雌性大鼠子宮及卵巢組織與對照組比較，其臟器位置、大小、形狀、硬度、外觀顏色未見明顯異常改變。

組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，高劑量組、低劑量組在鏡下所見與對照組基本相同。子宮壁各層結(jié)構(gòu)清晰，子宮內(nèi)膜粘膜上皮呈單層柱狀排列，粘膜下固有膜結(jié)締組織內(nèi)有不分支的子宮腺，固有膜內(nèi)散在炎細(xì)胞浸潤，子宮內(nèi)膜呈周期性改變，子宮肌層和子宮外膜未見明顯病理改變。卵巢各級卵泡、黃體數(shù)量正常，未見濾泡囊腫、血腫及其他病理改變。組織學(xué)觀察圖片可參見圖1。

表1 二甲醚染毒對大鼠體重和卵巢的影響（n=6，±s）

表1 二甲醚染毒對大鼠體重和卵巢的影響（n=6，±s）

組別 初始體質(zhì)量/g 終末體質(zhì)量/g 卵巢重量/g 卵巢臟器系數(shù)/%對照組 198.40±12.17 309.68±34.68 0.187 3±0.015 4 0.061 5±0.010 6低劑量組 198.78±11.26 297.76±15.48 0.209 4±0.037 6 0.070 5±0.013 1高劑量組 200.39±11.04 293.28±23.21 0.192 4±0.021 3 0.065 8±0.008 1

綜合卵巢重量、大體解剖和組織病理學(xué)觀察結(jié)果，未觀察到二甲醚對大鼠卵巢和子宮造成明顯影響。

圖1 二甲醚吸入染毒后雌性大鼠的卵巢和子宮組織學(xué)形態(tài)（HE×50）

2.3 大鼠血清生殖激素

如表2所示，與對照組比較，高劑量組雌性大鼠血清中，T和E2水平略有波動，但幅度不大；FSH略微升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PROG和INH-B明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；LH水平明顯降低（P＜0.05）。低劑量組雌性大鼠在所檢測的8項(xiàng)生殖激素中，均無明顯變化。由結(jié)果可見，雌性大鼠血清中的LH、PROG和INH-B水平明顯受到吸入二甲醚的影響。

急性大量吸入二甲醚對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，在二甲醚相關(guān)的研究中，都認(rèn)為二甲醚屬于低毒物質(zhì)，在日常使用中未觀察到明顯的毒性[1,8]。本研究在染毒結(jié)束后，在卵巢的絕對重量、卵巢和子宮的組織病理學(xué)觀察中，均未發(fā)現(xiàn)明顯變化，證明在本實(shí)驗(yàn)條件下，二甲醚吸入對雌性大鼠生殖器官未造成實(shí)質(zhì)性的明顯損傷，與相關(guān)研究的結(jié)果基本一致[8]；但在染毒結(jié)束后發(fā)現(xiàn)，染毒動物與對照組動物相比，血清中的生殖激素（主要為LH、PROG和INH-B）水平紊亂。

表2 二甲醚染毒對大鼠血清中生殖激素的影響（n=6，±s）

表2 二甲醚染毒對大鼠血清中生殖激素的影響（n=6，±s）

注：與對照組比較，*表示P＜0.05；

組別 FSH/（mIU/mL） LH/（mIU/mL） T/（ng/mL） PROG/（ng/mL） E2/（pg/mL） INH-B/（pg/mL）對照組 7.04±1.30 2.73±0.58 0.45±0.16 23.18±7.94 50.69±33.61 7.58±2.60低劑量組 8.45±3.02 2.48±0.89 0.68±0.29 27.02±12.58 47.90±42.83 8.48±3.53高劑量組 9.92±5.32 1.80±0.32* 0.53±0.19 45.71±17.82* 51.12±43.98 11.59±2.62*

3 結(jié)論

二甲醚吸入對雌性大鼠血清中的LH、PROG和INH-B水平有顯著影響，有劑量反應(yīng)關(guān)系。高劑量組血清LH水平明顯降低，PROG和INH-B明顯升高，提示二甲醚能對卵巢激素的分泌和釋放產(chǎn)生影響，機(jī)體發(fā)生調(diào)節(jié)紊亂，存在影響卵泡發(fā)育、排卵，進(jìn)而產(chǎn)生不孕的不良后果。但二甲醚造成影響的機(jī)制尚不明確，需進(jìn)一步研究。