郭同旺　周書洪　楊軍　趙大虎　張楠　張覬軒

摘 要：為探討渤海銀鯧（Pampus argenteus）消化酶活性，采用動(dòng)力學(xué)方法研究了渤海銀鯧胃、肝胰臟、前腸、后腸、幽門垂中的淀粉酶、蛋白酶和幾丁質(zhì)酶的活性分布，結(jié)果表明：肝胰臟淀粉酶活性最強(qiáng)，其次是胃，后腸中淀粉酶活性最低，幽門垂中的淀粉酶活性介于胃和腸道中間;胃中蛋白酶活性最高，肝胰臟次之，前腸最低，幽門垂蛋白酶活性介于肝胰臟和腸之間;幾丁質(zhì)酶活性以胃中最高，其次是后腸，肝胰臟中最低。

關(guān)鍵詞：渤海;銀鯧（Pampus argenteus）;淀粉酶;蛋白酶;幾丁質(zhì)酶;活性

中圖分類號(hào)：Q959.460.5

銀鯧（Pampus argenteus）為近海暖溫性中下層魚類，分布于印度洋至西太平洋區(qū)，包括朝鮮至日本的西部海域、中國(guó)諸海、太平洋印度洋區(qū)以及印度的孟加拉灣、波斯灣等海域。該魚肉質(zhì)潔白、細(xì)嫩，富含蛋白質(zhì)、脂肪、鈣、磷、鐵、維生素A、維生素B1等營(yíng)養(yǎng)素，深受消費(fèi)者的青睞，具有較好的市場(chǎng)開發(fā)前景。銀鯧幼魚主要攝食小魚、箭蟲和橈足類，成魚主要攝食水母、底棲動(dòng)物和小魚。一些學(xué)者進(jìn)行了銀鯧的年齡與生長(zhǎng)、成熟卵巢生化分析、肌肉生化分析、性腺發(fā)育規(guī)律、免疫器官的組織結(jié)構(gòu)特征、消化道菌群分析、營(yíng)養(yǎng)級(jí)及攝食習(xí)性、生殖力及渤海灣群體形態(tài)特征等研究[1-9]。

消化酶是消化系統(tǒng)分泌的能夠催化食物分解的一類酶。魚類消化酶的研究是魚類消化生理研究的重要內(nèi)容，是魚類配合飼料研制的基礎(chǔ)。周健愷等[10]研究了東海銀鯧不同消化器官中消化酶活性的分布，并比較分析了野生銀鯧成魚和養(yǎng)殖銀鯧幼魚的消化酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶）活性，彭士明等[11]開展了飼養(yǎng)密度對(duì)銀鯧幼魚增重率及消化酶活性的影響研究。關(guān)于渤海銀鯧的消化酶研究未見報(bào)道，為此我們開展了相關(guān)研究，旨在為渤海銀鯧資源的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

生物材料：海捕銀鯧20尾，叉長(zhǎng)（13.62±2.39）cm、體重（132.51±16.83）g。

主要儀器：TGL-16LM高速冷凍離心機(jī)、T6紫外可見分光光度計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 原材料預(yù)處理 將銀鯧放在冰塊上解剖，分別取出胃部、腸道（分為前腸、后腸）、肝胰臟和幽門盲囊，剪碎后，于組織勻漿器內(nèi)勻漿（pH 7.0磷酸緩沖溶液與組織比例為10∶1），4 ℃抽提20～24 h，冷凍離心20 min （10 000 r/min），上清液即為粗酶提取液，置于4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 消化酶活性測(cè)定

1.2.2.1 淀粉酶活性 2 mL 2%可溶性淀粉溶液中，依次加入1 mL pH 7.0的磷酸緩沖液、0.5 mL 1%NaCl溶液、0.5 mL酶粗提液（空白樣加入同樣體積的滅活酶），30 ℃水浴鍋中反應(yīng)30 min后加入0.5 mL 3，5-二硝基水楊酸，煮沸5 min，冷卻并離心，540 nm下測(cè)定吸光值，淀粉酶活性：1 mg蛋白的粗酶液每分鐘水解淀粉產(chǎn)生1 mg麥芽糖為1個(gè)酶活力單位。

1.2.2.2 蛋白酶活性 2%干酪素-0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）1 mL，加入酶粗提液0.5 mL， 30 ℃水浴中反應(yīng)15 min，加入0.5 mL 30%三氯乙酸 （空白樣在加入三氯乙酸后再加入粗提酶液），離心（8 000 r/min，4 min），取1 mL上清液，加入0.4 mol/L Na2CO3 5 mL與稀釋的Folin試劑1 mL，混勻，37 ℃水浴顯色15 min。680 nm處測(cè)定吸光值。蛋白酶活性：1 mg蛋白的粗酶液每分鐘水解干酪素產(chǎn)生1 μg酪氨酸為1個(gè)酶活力單位。

1.2.2.3 幾丁質(zhì)酶活性 200 mL已冷卻到4 ℃的33%濃鹽酸中加入幾丁質(zhì)粉5 g，30 ℃水浴鍋保溫30 min，過濾，濾液中加入2 000 mL冷卻至4 ℃的雙蒸水，攪拌30 min，4 ℃冰箱過夜，離心，用雙蒸水將沉淀洗至中性，分散至少許雙蒸水中。

將l mL膠體幾丁質(zhì)溶解在0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 6.6）中，配制成l%膠體幾丁質(zhì)-磷酸緩沖液，備用。

1%膠體幾丁質(zhì)-磷酸緩沖液中加入0.5 mL酶粗提液，30 ℃水浴反應(yīng)30 min，沸水浴10 min，離心，0.5 mL上清液中加入0.5 mL 3，5-二硝基水楊酸，煮沸7 min，冷卻，加蒸餾水4 mL，于540 nm處測(cè)定吸光值，用樣本液加DNS試劑作為空白對(duì)照。幾丁質(zhì)酶的活性：1 mg蛋白的酶液每分鐘生成l μg乙酰氨基葡萄糖為1個(gè)酶活力單位。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同組織器官淀粉酶活性的分布

不同組織器官中淀粉酶活性比較見圖1，從圖1看出，肝胰臟淀粉酶活性最強(qiáng)，其次是胃，后腸中淀粉酶活性最低，幽門垂中的淀粉酶活性介于胃和腸道中間。幽門垂的組織結(jié)構(gòu)與腸壁組織相似，它是否可以分泌消化酶，沒有相關(guān)資料報(bào)道，分析幽門垂中的消化酶主要可能來自于胃。

2.2 不同組織器官蛋白酶活性的分布

對(duì)于銀鯧魚來說，不同組織器官蛋白酶活性分布見圖2，從圖2看出，胃中蛋白酶活性最高，肝胰臟次之，前腸最低，幽門垂蛋白酶活性介于肝胰臟和腸之間，很可能胃就是銀鯧消化蛋白質(zhì)的主要器官。

2.3 不同組織器官幾丁質(zhì)酶活性的分布

資料研究證實(shí)，對(duì)于攝食甲殼動(dòng)物的魚類，幾丁質(zhì)酶活性較強(qiáng)，在銀鯧的天然食物組成中，甲殼動(dòng)物占了較大比例，分析比較不同器官幾丁質(zhì)酶的活性，對(duì)于確定它的來源尤為重要。從圖3看出，幾丁質(zhì)酶活性以胃中最高，其次是后腸，肝胰臟中最低，據(jù)此推斷，銀鯧消化道中的幾丁質(zhì)酶可能來自攝食進(jìn)入的甲殼動(dòng)物分泌的幾丁質(zhì)酶，有待深入研究。

3 討論

趙峰等[12]借助多變量形態(tài)度量學(xué)方法對(duì)渤海、黃海及東海近海五個(gè)銀鯧地理群體的形態(tài)變異進(jìn)行了研究，認(rèn)為渤海、黃海和東海區(qū)銀鯧群體可能存在著3個(gè)形態(tài)差異種群，即黃渤海種群、東海北部種群和東海南部種群。說明東海和渤海的銀鯧在形態(tài)上存在一些差異，在生理上是否存在不同，為此我們進(jìn)行了銀鯧消化酶活性的研究。

魚類的食性與其消化道的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)，消化道的不同部位由于所擔(dān)負(fù)的消化功能不同，消化酶的活性就會(huì)存在差異。周健愷等[10]比較研究了野生銀鯧（東海）成魚和養(yǎng)殖銀鯧幼魚的消化酶活性，指出成魚胃中蛋白酶活性最大，側(cè)囊中蛋白酶活性最小，成魚肝中淀粉酶活性最大，直腸最小。我們的研究表明，銀鯧胃中蛋白酶活性最高，前腸最低，肝胰臟淀粉酶活性最強(qiáng)，后腸中淀粉酶活性最低，與其結(jié)果基本一致?？紤]到在銀鯧的食性組成中小型甲殼動(dòng)物出現(xiàn)的頻率較多，所以我們進(jìn)行了銀鯧消化道幾丁質(zhì)酶研究，發(fā)現(xiàn)胃中幾丁質(zhì)酶活性最高，其次是后腸，肝胰臟中最低。這些研究為渤海銀鯧資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 崔青曼，袁春營(yíng)，董景崗，等.渤海灣銀鯧年齡與生長(zhǎng)的初步研究[J].天津科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，23（3）：30-32.

[2] 崔青曼，袁春營(yíng)，李小雙.渤海銀鯧成熟卵巢生化成分分析[J].海洋漁業(yè)，2009，31（2）：221-224.

[3] 袁春營(yíng)，崔青曼，李小雙.渤海銀鯧肌肉生化成分分析與營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)[J].海洋湖沼通報(bào)，2010（2）：67-71.

[4] 王騰飛，張鼎元，郭春陽，等.養(yǎng)殖銀鯧性腺發(fā)育規(guī)律和性類固醇激素變化[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2017，41（2）：198-211.

[5] 季益平，匡思雯，袁子，等.銀鯧脾臟和頭腎的形態(tài)與組織學(xué)特征[J].寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版），2020，33（4）：1-5.

[6] 王建建，高權(quán)新，張晨捷，等.野生與養(yǎng)殖銀鯧消化道菌群結(jié)構(gòu)中產(chǎn)酶菌的對(duì)比分析[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2014，38（11）：1899-1909.

[7] 魏秀錦，張波，單秀娟，等.渤海銀鯧的營(yíng)養(yǎng)級(jí)及攝食習(xí)性[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2019，26（5）：904-913.

[8] 崔青曼，袁春營(yíng)，李小雙.渤海銀鯧生殖力的研究[J].海洋通報(bào)，2009，28（6）：66-69.

[9] 蔣艷玲，徐海龍，喬秀亭，等.銀鯧渤海灣群體形態(tài)特征統(tǒng)計(jì)分析[J].河北漁業(yè)，2013（12）：10-14.

[10] 周健愷，徐善良，邱成功，等.銀鯧不同消化器官中消化酶活性的分布及其比較[J].寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版），2014，27（4）：1-6.

[11] 彭士明，林少珍，施兆鴻，等.飼養(yǎng)密度對(duì)銀鯧幼魚增重率及消化酶活性的影響[J].海洋漁業(yè)，2013，35（1）：73-76.

[12] 趙峰，莊平，章龍珍，等.渤海、黃海及東海近海五個(gè)銀鯧地理群體的形態(tài)變異[J].海洋學(xué)報(bào)，2011，33（1）：104-110.

Activities of digestive enzymes from Pampus argenteus in the Bohai Sea

GUO Tongwang1，ZHOU Shuhong2，YANG Jun3，ZHAO Dahu1，ZHANG Nan2，ZHANG Jixuan2

（1. Beitangjie Agriculture Service Center in Tianjin Binhai New Area，Tianjin 300453，China;2. Aquaculture Service Center in Tianjin Binhai New Area，Tianjin 300450，China; 3. Chadianjie Industry Development Service Center in Tianjin Binhai New Area，Tianjin 300480，China）

Abstract：To understand the digestive enzyme activity of Pampus argenteus， activities distribution of amylase， protease and chitinase in the stomach， hepatopancreas， foregut， hindgut and pyloric caeca of Pampus argenteus in Bohai were studied by dynamics method.The results showed that： activity of amylase in the hepatopancreas was the strongest， followed by that in the stomach， amylase activity in the hindgut was the lowest，and activity of amylase in the pyloric caeca was between those in the stomach and intestine. Activity of protease in the stomach was the highest， followed by that in the hepatopancreas， and protease activity in the foregut was the lowest， and activity of protease in the pyloric caeca was between those in the hepatopancreas and intestine.Activity of chitinase in the stomach was the highest， followed by that in the hindgut， chitinase activity in the hepatopancreas was the lowest.

Key words：Bohai Sea; Pampus argenteus; amylase; protease; chitinase;activity

（收稿日期：2020-09-07）

作者簡(jiǎn)介：郭同旺（1964-），男，農(nóng)機(jī)工程師，研究方向：水產(chǎn)養(yǎng)殖新品種、新技術(shù)研究與推廣。E-mail：btjnf@tjbh.gov.cn。