鄒育雄, 陳明春, 許立達

(1.惠州市皮膚病防治研究所，廣東 惠州 516000；2.中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院皮膚科，廣東 廣州 510120)

瘢痕疙瘩是一種以成纖維細胞過度增殖和膠原蛋白過度合成為特征的真皮纖維化疾病。成纖維細胞活化蛋白(fibroblast activation protein，F(xiàn)AP) 是一種膜結(jié)合糖蛋白，在控制成纖維細胞生長、組織修復(fù)和上皮性腫瘤的發(fā)展過程中有一定作用[1]。本研究通過檢測FAP在瘢痕疙瘩組織中的表達情況，探討FAP在瘢痕疙瘩發(fā)病機制中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

病例納入標準：①臨床及組織病理檢查符合瘢痕疙瘩診斷[2]；②近6個月內(nèi)未經(jīng)局部注射糖皮質(zhì)激素等藥物治療；③未經(jīng)局部放射治療；④非妊娠、哺乳期；⑤無內(nèi)臟器官系統(tǒng)嚴重疾病；⑥知情同意本研究。共納入30例患者為病例組，其中男16例，女14例;年齡12～48歲，平均(22.00±10.65)歲；病程1～15年，平均(5.76±4.82)年。瘢痕疙瘩臨床分級參照Sawada標準[3],即瘢痕高度、色澤、硬度、癢、敏感或疼痛5項,每項計0～3分。將各項計分相加為積分,積分1～5分為輕度, 6～10分為中度, 11～15分為重度。30例患者中輕度5例，中度13例，重度12例。對照組20例，為我科手術(shù)切除皮膚贅生物并周邊帶有少量正常皮膚組織的患者，其中男11例，女9例；年齡9～51歲，平均(22.53±10.84)歲。兩組患者性別(2=10.23，P=1.086)、年齡比較(t=1.32，P=0.243)無明顯差異，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色檢測FAP表達 取病例組瘢痕疙瘩組織標本、對照組正常皮膚組織標本，經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋、連續(xù)切片。切片厚度4～6 μm。采用SABC法進行免疫組化染色，按SABC試劑盒(北京索萊寶公司)說明書操作，設(shè)立陽性對照和陰性對照，陽性對照為已知的陽性染色組織切片(博士德公司提供)，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 染色結(jié)果判定 根據(jù)陽性細胞所占比例及染色深度分別計分，其中染色深度以多數(shù)細胞顯色反應(yīng)為準。陽性細胞占比計分：無為0分，占比<1/3為1分,1/3～2/3為2分,>2/3為3分。染色深度計分：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分。根據(jù)陽性細胞占比計分與染色深度計分相乘結(jié)果判斷表達強度，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性(++)，6～9分為強陽性(+++)。

1.2.3 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件分析。兩組間FAP陽性率比較采用2檢驗， 病例組不同臨床分級間FAP陽性率比較采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組FAP表達陽性率比較

病例組30例瘢痕疙瘩組織中FAP陽性22例，陽性率為73.33%，主要在成纖維細胞(圖1)和血管內(nèi)皮細胞內(nèi)(圖2)表達；對照組正常皮膚組織中未見FAP表達(圖3)。兩組FAP表達陽性率比較有明顯差異(2=26.19，P<0.001)。

圖1 瘢痕疙瘩組織中FAP在成纖維細胞內(nèi)陽性表達(SABC，100×) 圖2 瘢痕疙瘩組織中FAP在血管內(nèi)皮細胞內(nèi)陽性表達(SABC， 400×) 圖3 FAP在正常皮膚組織內(nèi)無表達(SABC， 100×)

2.2 病例組瘢痕疙瘩臨床分級與FAP表達情況

輕度與重度之間(P=0.002)及中度與重度之間(P=0.006)比較，F(xiàn)AP表達陽性率均有統(tǒng)計學差異,而輕度與中度之間無明顯差異(P=0.082)，臨床分級為重度瘢痕疙瘩者，F(xiàn)AP表達陽性率較高，詳見表1。

表1 病例組瘢痕疙瘩臨床分級與FAP表達情況 例Tab.1 FAP expression among different grades of keloid Case

3 討論

FAP是由FAPα和FAPβ兩個亞單位組成的分子量為170 kD的二聚體，體外實驗證明這種二聚體具有分解明膠和Ⅰ型膠原蛋白的活性以及類似二肽肽酶活性，F(xiàn)AP最初被稱為F19抗原，是由體外培養(yǎng)的人成纖維細胞免疫小鼠獲得的單克隆抗體F19識別的一種膜抗原，存在于多種惡性上皮性腫瘤的間質(zhì)(如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、結(jié)腸癌等)、肉芽組織和培養(yǎng)的成纖維細胞膜上，而在正常成人靜息的成纖維細胞中通常不表達[4]，提示FAP是一個增生性成纖維細胞的表面標志物，在控制成纖維細胞生長、組織修復(fù)和上皮性腫瘤的演進過程中可能起一定的作用[5]。瘢痕疙瘩成纖維細胞過度增殖而凋亡不足，具有腫瘤組織的特性，可能是瘢痕疙瘩發(fā)生的重要機制[6]。FAP在瘢痕疙瘩組織中的作用可能有:①直接溶解與其相鄰的細胞外基質(zhì)或者激活另外一種蛋白酶原而間接起到溶解細胞外基質(zhì)的作用；②解離與基質(zhì)蛋白結(jié)合的生長因子，使之發(fā)揮促生長作用；③參與瘢痕疙瘩組織微血管生成過程，因為內(nèi)皮細胞的增殖和移動也需要有蛋白酶降解細胞外基質(zhì)[7-9]。有關(guān)FAP的功能尚有許多問題待研究。

大量研究證實，成纖維細胞是瘢痕疙瘩發(fā)病的主要效應(yīng)細胞。Nakaoka等[10]通過檢測增殖細胞核抗原表達情況,發(fā)現(xiàn)瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖活性明顯高于增生性瘢痕和正常皮膚；Aimes等[11]研究證明FAP mRNA表達上調(diào)導(dǎo)致了上皮細胞重建或者血管形成，說明FAP具有血管源性功能。本研究發(fā)現(xiàn),FAP除了在瘢痕疙瘩組織成纖維細胞內(nèi)表達，也在血管內(nèi)皮細胞內(nèi)表達，并且瘢痕疙瘩組織中FAP表達陽性率明顯高于正常皮膚組織(P<0.05)，從而證明了FAP可能通過促進血管內(nèi)皮細胞生長參與瘢痕疙瘩的發(fā)病機制。血管生成是創(chuàng)傷修復(fù)過程中的重要環(huán)節(jié), 從創(chuàng)傷早期炎癥反應(yīng)、肉芽組織的形成到機體組織的重建和瘢痕形成都離不開血管內(nèi)皮細胞的參與[12]。瘢痕疙瘩組織為紅色的斑塊,長時間不消退，并且像腫瘤一樣侵襲周圍組織，瘢痕疙瘩擴展過程中也先表現(xiàn)為瘢痕與正常皮膚組織交界處的血管增生和充血，隨后在充血帶區(qū)域進一步形成瘢痕疙瘩，所以血管因素可能在瘢痕疙瘩形成中起到重要作用。李波等[13]通過彩色多普勒超聲檢查，發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕和瘢痕疙瘩組織中微血管密度增高，隨著病程延長，增生性瘢痕血管密度呈先升高后降低的趨勢，而瘢痕疙瘩組織中血管密度未見明顯變化。從研究可以推測，瘢痕疙瘩組織中毛細血管增多，新生的血管為成纖維細胞合成膠原提供豐富的前體物質(zhì),從而出現(xiàn)膠原的大量合成和沉積[14]。本研究根據(jù)瘢痕疙瘩臨床表現(xiàn)將患者分為輕度、中度和重度，F(xiàn)AP陽性表達率分別為20.00%、69.23%和100%，輕度與重度、中度與重度比較差異有統(tǒng)計學意義(P值均<0.05)，瘢痕疙瘩臨床分級越嚴重者，F(xiàn)AP表達陽性率越高，結(jié)果進一步說明FAP可能參與了瘢痕疙瘩的發(fā)病。

目前瘢痕疙瘩的治療方法雖然眾多，但尚無確切有效的治療方法。針對FAP的靶向治療在肺纖維化的實驗研究上有了一定的進展，但在人體內(nèi)或者臨床上的有效性還需要進一步的探索。Egger等[15]用一種FAP抑制劑PT100，通過治療博萊霉素誘導(dǎo)的鼠肺纖維化模型發(fā)現(xiàn)可減輕肺纖維化的發(fā)生，認為FAP抑制劑PT100具有抗纖維增殖作用和增加巨噬細胞活性功能。本研究結(jié)果提示，針對FAP的干預(yù)可能有助于治療和預(yù)防瘢痕疙瘩，抑制FAP表達可以作為治療和預(yù)防瘢痕疙瘩的一個新思路。