冉乾鴻，姜 波，譚凱升，羅 藝，劉月洋，徐志芊

（大連民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，遼寧大連 116600）

南方降雨多且氣候溫和，適合動(dòng)植物的生長(zhǎng)，因此自然資源極為豐富，特別是中藥材種類多不勝數(shù)。平時(shí)經(jīng)常接觸到的一些常見的植物或者水果在中藥配方中都頻繁出現(xiàn)。本研究選用的中藥材都是南方普遍存在的，同時(shí)都具有抗癌性。經(jīng)檢測(cè)，無花果的葉子、果實(shí)及乳汁中均含有不同成分的抗癌性元素，如補(bǔ)骨脂素、苯甲醛、佛手柑內(nèi)酯、多糖和硒等抗癌活性物，有研究表明，能提高人體的免疫力、有抑制4 種癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的功效，故有人稱其為“抗癌斗士”[1]。蛇莓的根、莖、葉均可入藥，常用于臨床醫(yī)治多種熱病驚癇、咳嗽吐血、咽喉腫痛、疔瘡癰腫、蛇蟲咬傷、濕疹、痢疾及燙火傷等。近年來發(fā)現(xiàn)了蛇莓有顯著的抗腫瘤活性[2-3]，從而引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的注意。蒲公英作為臨床治療研究常用的中草藥，其藥味苦甘、性寒,無毒，具有消腫散結(jié)、止痛散淤、通乳、利尿通淋、通便胃、保肝利膽、增強(qiáng)免疫和防癌抗衰等功效[4]。

這3 種中藥材都具有抗癌性，近年來才開始有關(guān)方面的研究。當(dāng)前對(duì)其脂肪酸組成與其藥用成分價(jià)值的研究極少。因此，本研究分別對(duì)蛇莓、無花果、蒲公英的脂肪酸進(jìn)行分析和比較，通過所得的數(shù)據(jù)來確定其脂肪酸的組成。GC－MS 法將色譜法的分離能力與質(zhì)譜法的定性能力相結(jié)合，由色譜柱對(duì)各組分分配能力不同而對(duì)組分進(jìn)行分離，同時(shí)利用不同離子在電磁場(chǎng)的運(yùn)動(dòng)行為不同而進(jìn)行分離相結(jié)合，具有高靈敏度、定性準(zhǔn)確、分析快速的優(yōu)點(diǎn)[5]。

1 試驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑。石油醚、甲醇、氫氧化鉀、三氟化硼-乙醚溶液等試劑，分析純：正己烷，優(yōu)級(jí)純。

1.1.2 儀器。GCMS：QP2010 plus 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，日本島津公司；氣相色譜部GC-2010，AOC-20i 自動(dòng)進(jìn)樣器，日本島津公司；RE52CS 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；恒溫水浴鍋，鞏義市英峪予華儀器廠；BSA1245 型分析天平（萬分之一感量），賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；DHG-9036A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；250mL 索氏提取器，上海豫明儀器有限公司生產(chǎn)；蛇形冷凝管，上海豫明儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 中藥材的脂肪酸的測(cè)定

1.2.1 樣品處理。試驗(yàn)步驟參照姜波等[6]論文內(nèi)容進(jìn)行，中藥材蛇莓、無花果、蒲公英采購(gòu)于貴州銅仁藥店。首先將3 份樣品在70℃的烘箱中烘干，干燥后分別放入研磨機(jī)粉碎成粉末，然后將已粉碎的樣品分別過60 目篩，并放入袋中密封儲(chǔ)存。

1.2.2 中藥材油脂的提取。精確稱取干燥粉碎后3 種中藥材樣品各10g（精確至0.0001g）于索氏提取器中，加入180mL 石油醚（30～60℃），在42℃恒溫水浴回流6h，在37℃（水浴溫度）下蒸發(fā)至無溶劑，然后在60℃水浴中使溶劑完全蒸發(fā)，得到蛇莓油脂、無花果油脂和蒲公英油脂。

1.2.3 油樣品甲酯化。分別精確量取0.2mL 已提取的3種中藥材油脂，分別放入3 個(gè)10mL 塞管中，分別添加2.0mL 5%氫氧化鉀甲醇溶液，立即搖勻。將裝好反應(yīng)溶液的塞管放入60℃恒溫水浴中反應(yīng)30min，待冷卻至室溫，加14%三氟化硼甲醇溶液1.0mL 至塞管，搖勻。置60℃恒溫水中3min，然后冷卻至室溫，加入正己烷2mL，搖勻。靜置完成后，依次取上層溶液進(jìn)行GC-MS 分析。

1.2.4 氣相色譜-質(zhì)譜條件。氣相色譜條件：rxi-5si1ms毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；控制程序連續(xù)升溫，初始工作為溫度150℃，保持1min，以12℃/min 升至200℃，保持20min，以15℃/min 升至230℃，保持45min；進(jìn)樣溫度250℃；柱溫180℃，進(jìn)樣量1μL；載氣為高純氦氣，柱流速為1mL/min。質(zhì)譜條件：離子源為EI 源，電力電壓參數(shù)70eV，離子源溫度200℃，接口端溫度230℃，溶劑延遲1.6min，質(zhì)量掃描控制范圍40.00～600.0m/z。

1.2.5 3 種中藥材油脂脂肪酸測(cè)定及相對(duì)含量的計(jì)算。通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀來測(cè)定3 種中藥材油中的脂肪酸組成，采用GC-MS solution 工作站對(duì)植物油中的脂肪酸進(jìn)行定性分析，以確定蛇莓、無花果和蒲公英的脂肪酸類型。然后用歸一化法計(jì)算脂肪酸的相對(duì)含量。

2 試驗(yàn)結(jié)論

2.1 3 種中藥材的得油率

表1 3 種中藥材得油率

2.2 3 種中藥材的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖1 蛇莓的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖2 蒲公英的脂肪酸甲酯總離子流圖

圖3 無花果的脂肪酸甲酯總離子流圖

表2 蛇莓中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對(duì)含量

以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)3 種中藥材甲酯化的油脂，通過GC-MS solution 工作站解析譜圖，確定各樣品油脂中脂肪酸種類和相對(duì)含量。3 種中藥材的總離子流圖分別見圖1、2、3。

2.3 脂肪酸相對(duì)含量計(jì)算公式

根據(jù)歸一化方法計(jì)算分析3 種樣品中各種脂肪酸的相對(duì)含量，按如下公式計(jì)算：

相對(duì)含量（%）=一種脂肪酸甲酯峰面積/各種脂肪酸甲酯峰面積之和×100。

2.4 結(jié)果與討論

由表2 可知，通過索氏提取法提取蛇莓、蒲公英、無花果中的油脂，其得油率分別為0.91%、0.29%、0.69%，其中蛇莓的得油率最高，蒲公英的得油率最低。

表3 蒲公英中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對(duì)含量

表4 無花果中所含脂肪酸種類及各種脂肪酸相對(duì)含量

由表2 得，蛇莓油脂中共分離出14 種脂肪酸，其中主要的脂肪酸成分8,11-十八碳二烯酸（55.102%）、8-十八烯酸（17.623%）、11-油酸（12.691%）、硬脂酸（9.307%），主要成分是不飽和脂肪酸。

由表3 得，蒲公英油脂中共分離出14 種脂肪酸，其中主要的脂肪酸成分11-油酸（31.710%）、8,11-十八碳二烯酸（27.020%）、9,12,15-亞麻酸（8.207%）、硬脂酸（7.651%），主要成分是不飽和脂肪酸。

由表4 得，無花果油脂中分離出14 種脂肪酸，其中主要脂肪酸成分為棕櫚酸（8.889%）、8,11-十八碳二烯酸（45.815%）、9,12,15-亞麻酸（25.925%）、8-十八烯酸（9.206%）、硬脂酸（5.692%），主要成分是不飽和脂肪酸。

3 種中藥材中一共含有脂肪酸21 種，主要幾種為棕櫚酸、8,11-十八碳二烯酸、9,12,15-亞麻酸、8-十八烯酸、硬脂酸，均為不飽和脂肪酸，是人體重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是人體必需的脂肪酸，也是構(gòu)成人體不飽和脂肪的脂肪酸，由此可見不飽和酸對(duì)人類的重要性，同時(shí)表明它與許多疾病密切相關(guān)。

目前有很多研究表明不飽和脂肪與許多疾病密切相關(guān)，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)多不飽和脂肪酸和癌癥間有相互關(guān)系；主要為n-3 多不飽和脂肪酸有抗癌作用，而N-6 多不飽和脂肪酸對(duì)癌癥只有促進(jìn)作用[7]。通過這3種中藥材的脂肪酸的組成及其相對(duì)含量分析，表明這3 種中藥材對(duì)抗癌都有一定的積極治療作用，有效成分可能是多不飽和脂肪酸。