王 瑾，霍燕燕

（西安文理學(xué)院 化學(xué)工程學(xué)院，陜西 西安710065）

硒是生物體內(nèi)必需的生物微量元素，具有重要的生理生物活性。主要通過和酶或一些其它功能蛋白結(jié)合發(fā)揮作用，適量攝入可以起到抗氧化、抗衰老、抗癌等多項生理功能，被譽(yù)為生命的“火種”。機(jī)體內(nèi)硒水平下降將直接影響骨骼、心肌 及 肝、眼、前列腺、甲狀腺等重要的生命器官。Clark 等報道膳食中以富硒酵母形式補(bǔ)充硒的攝入，可使癌癥發(fā)病率、死亡率下降50 % 左右。我國科學(xué)家通過補(bǔ)硒預(yù)防治療克山病，大骨節(jié)病，肝癌等威脅人類健康的重大疾病，在國際上已獲重大進(jìn)展。硒在生物體內(nèi)的生物利用度、有效性、以及遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律，不僅與生物體內(nèi)硒的總濃度水平有關(guān)，而且與硒存在的生物化學(xué)形態(tài)，以及不同生物化學(xué)形態(tài)下硒的濃度水平密切相關(guān)[1]。

茶葉是一種傳統(tǒng)純天然飲料，茶樹在環(huán)境中具有富集硒的作用，茶葉中的小分子有機(jī)硒和少量無機(jī)硒及微量的硒蛋白，是茶湯硒素的主要來源（有機(jī)硒Se2-、無機(jī)硒Se4+）。天然富硒茶近年來倍受青睞[2]。鑒于此，目前市場上出現(xiàn)了許多品種的富硒茶，但因其產(chǎn)地不同，種植方法各異，魚目混雜，急需簡單、高效的檢驗(yàn)方法和品質(zhì)評價方法跟進(jìn)。

目前，硒的測定方法主要有：原子熒光光譜法、火焰原子吸收分光光度計法、石墨爐原子吸收分光光度計法、分光光度法、氣相色譜法等[3-6]。目前，最常用的硒的測定方法是氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法，它具有靈敏度高、光譜干擾少、檢出限低、自動進(jìn)樣、分析成本低等優(yōu)點(diǎn)[6]。

本文運(yùn)用HG-AFS 技術(shù)就日常生活中人們最常飲用的紫陽富硒茶、綠茶、茉莉花茶3 種不同茶葉中硒的含量進(jìn)行了研究測試，旨在幫助人們對均衡體內(nèi)的微量元素含量做以借鑒。同時作為硒保健茶，不僅要含硒高，而且所含硒要易浸出，才能為人體所吸收，即硒保健茶的品質(zhì)主要決定于硒的有效浸出率[2]。本文以此為研究的重點(diǎn)，用接近實(shí)際飲茶方式的實(shí)驗(yàn)?zāi)M方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計，采用微波消解-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法，研究探討茶葉中硒的浸出情況，以求建立簡單、高效的富硒保健茶硒測定方法，同時也為人們飲茶方式提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.2 儀器與試劑

AFS-9900 系列非色散四通道原子熒光光度計（帶硒元素空心陰極燈，西安海光科創(chuàng)有限公司）。

KBH4溶液:3.33g·L-1KOH 2g 溶于水中,溶解后加入10g KBH4用水稀釋至1000mL,現(xiàn)配現(xiàn)用；

硒標(biāo)準(zhǔn)液：1000μg·mL-1（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心）；載流體積分?jǐn)?shù)為8% HCl 溶液。

陜西紫陽富硒茶；山陽天竺山茶、漢中毫克、茉莉花茶；實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，所用水為超純水。

1.3 儀器工作條件

燈電流70mA，載氣流量300mL·min-1，輔氣流量800mL·min-1，原子化器高度8mm，負(fù)高壓310V，分析信號為峰面積。

2 結(jié)果與結(jié)論

2.1 儀器參數(shù)的選擇

2.1.1 高壓 實(shí)驗(yàn)測定不同負(fù)高壓下的熒光強(qiáng)度，結(jié)果表明：隨著負(fù)高壓增大，熒光強(qiáng)度增大，同時隨著負(fù)高壓的增大，信號和噪聲也升高，且負(fù)高壓的增大燈壽命會減小，在不影響結(jié)果重現(xiàn)性和滿足靈敏度的前提下，實(shí)驗(yàn)選擇負(fù)高壓為310V，見圖1。

圖1 負(fù)高壓的選擇Fig.1 The choose of the negative high pressure

2.1.2 燈電流 在60～80mA 之間改變燈電流測定硒標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雖燈電流的增大硒的熒光強(qiáng)度值也在增大，但燈電流過高會影響燈的使用壽命，燈電流為70mA 時，具有良好的重現(xiàn)性和靈敏性，實(shí)驗(yàn)選擇燈電流為70mA。

2.1.3 載氣流量 載氣流量過大，將會稀釋蒸汽的濃度,載氣流量過小，難以將硒蒸汽帶出。測定了流量在100～600mL·min-1時的熒光強(qiáng)度值，實(shí)驗(yàn)選擇載氣流量為300mL·min-1。

2.1.4 輔氣流量 通過調(diào)節(jié)輔氣流量在700 ～1000mL·min-1之間，結(jié)果表明，輔氣流量對熒光強(qiáng)度的影響不大。實(shí)驗(yàn)選擇輔氣流量為800mL·min-1。

2.1.5 原子化器高度 原子化器的高度影響試驗(yàn)的原子化效率，實(shí)驗(yàn)在6～11mm 之間改變原子化器高度測定硒標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度值，結(jié)果表明：原子化器高度對熒光強(qiáng)度值有一定的影響，當(dāng)原子化器高度為8mm 時，熒光強(qiáng)度值最好。實(shí)驗(yàn)選擇原子化器高度為8mm。

2.1.6 KBH4濃度 增大KBH4的濃度，熒光強(qiáng)度值隨之增大，靈敏度得到提高，但如果KBH4濃度值過高，由于產(chǎn)生大量的H2產(chǎn)生稀釋作用同時對儀器產(chǎn)生一定的影響，會影響下一次的測量，最終選擇1%濃度KBH4為最佳濃度。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

移取質(zhì)量濃度1000μg·mL-1硒標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL于100mL 容量瓶中，用去離子水定容至刻度。分別取該標(biāo)液0.00、0.25、0.75、1.25、2.5mL 于25mL 容量瓶中，再分別加2mL 濃鹽酸并用蒸餾水定容至刻度[7]。使儀器在工作條件下進(jìn)行測定，硒的濃度與熒光強(qiáng)度呈線性關(guān)系，其線性回歸方程為Y=107.0185X+17.3439，相關(guān)系數(shù)為0.9998。

按上述測定方法，將空白溶液進(jìn)行11 次空白試驗(yàn)，計算出標(biāo)準(zhǔn)偏差S=4.6685，檢出限D(zhuǎn)L=0.1309ng·mL-1，將濃度為30ng·mL-1的硒標(biāo)液連續(xù)進(jìn)行測7 次，計算出精密度為2.06。

2.3 樣品預(yù)處理

2.3.1 HNO3消化法

（1）稱取1g（精確到0.001g）紫陽富硒茶于100mL 燒杯中，用沸騰的開水浸泡10min 后將茶水轉(zhuǎn)移到另一燒杯中冷卻，將茶渣繼續(xù)用沸騰的開水浸泡10min，得另一份茶水，以此類推，分別將得到的茶水標(biāo)記為紫陽1、紫陽2、紫陽3、紫陽4，將冷卻的茶水紫陽1、2、3、4 分別移取20mL 于100mL 錐形瓶中，再分別加5mL HNO3在100～160℃電熱板上進(jìn)行消化，同時做一組空白對照。在電熱板上蒸發(fā)至體積1～2mL，分別加3mL 濃HCl 在電熱板上加熱至體積為1～2mL。冷卻后全部轉(zhuǎn)入五支10mL 比色管定容至刻度，過夜后進(jìn)行上機(jī)測定[9]。

（2）分別稱取紫陽富硒茶、茉莉花茶、天竺山茶、漢中仙毫各1g 及上述紫陽富硒茶渣一半于100mL干凈的燒杯，同時做兩組空白對照。用蒸餾水潤濕，然后加入20.00mL 濃HNO3，在100～160℃電熱板上進(jìn)行消化。在消解的過程中當(dāng)燒杯內(nèi)液體剩余1～2mL 時，各補(bǔ)加5mL 濃HNO3繼續(xù)在電熱板上進(jìn)行消解，待液體剩余1mL 時冷卻分別添加10mL 濃HCl，在電熱板上進(jìn)行消解當(dāng)液體濃縮至1～2mL 時。冷卻將其轉(zhuǎn)移到25mL 比色管中，分別添加2mL 濃HCl，定容至刻度，過夜后進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表1、表2。

2.3.2 HNO3-HClO4混酸消化法

（1）稱取1g 紫陽富硒茶于100mL 燒杯中，用沸騰的開水浸泡10min 后將茶水轉(zhuǎn)移到另一燒杯中冷卻，將茶渣繼續(xù)用沸騰的開水浸泡10min，得另一份茶水，以此類推，分別將得到的茶水標(biāo)記為紫陽1、紫陽2、紫陽3、紫陽4，將冷卻的茶水紫陽1、2、3、4分別移取20mL 于100mL 錐形瓶中，加HNO3-HClO4混酸5mL，搖勻，放置12h, 在100～160℃電熱板上進(jìn)行消化，至HClO4冒煙，液體剩余約1～2mL時取下。補(bǔ)加5mL 1∶1 HCl 再加熱至溶液變?yōu)榍辶?，將Se（VI）完全還原為Se（IV），液體剩余約1～2mL時取下，冷卻，將其轉(zhuǎn)移到10mL 比色管中，分別添加1mL 濃HCl，定容至刻度，過夜后進(jìn)行測定，同時做空白對照。

再分別加5mL HNO3在100～160℃電熱板上進(jìn)行消化，同時做一組空白對照。在電熱板上蒸發(fā)至體積1～2mL，分別加3mL 濃HCl 在電熱板上加熱至體積為1～2mL。冷卻后全部轉(zhuǎn)入五支10mL 比色管定容至刻度，過夜后進(jìn)行上機(jī)測定。

（2）分別稱取紫陽富硒茶、茉莉花茶、天竺山茶、漢中仙毫各1g 及（1）中的茶渣一半于100mL 干凈的錐形瓶中，加HNO3-HClO4混酸10mL，搖勻，放置12h，在100～160℃電熱板上進(jìn)行消化，至HClO4冒煙，液體剩余約2mL 時取下。補(bǔ)加10mL 1∶1 HCl 再加熱至溶液變?yōu)榍辶?，以將六價硒完全還原為四價硒，取下，冷卻，將其轉(zhuǎn)移到25mL 比色管中，分別添加2mL 濃HCl，定容至刻度，過夜后進(jìn)行測定，同時做兩組空白對照，測定結(jié)果見表1、2。

表1 用不同的酸消解同一份紫陽富硒茶不同茶液所得硒的含量Tab.1 With different acid dissolves the same ziyang seleniumrich tea liquid of different selenium content

由表1 數(shù)據(jù)可知，一般泡茶時，在第一、二、三泡時茶水質(zhì)量較好。

表2 不同的酸消解不同種茶葉所得硒的含量Tab.2 With different acid digestion selenium content from different kinds of tea

由表2 數(shù)據(jù)可知，HNO3-HClO4混酸消解方式可靠，其特點(diǎn)是消化完全，消化過程中硒的損失小。而HNO3消解方式消化不完全，且不易控制消化過程中硒的損失。

3 結(jié)論

本文研究了富硒茶中硒元素原子熒光分析測定方法，對儀器的測定參數(shù)以及氫化物發(fā)生條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了浸泡茶水中以及不同茶葉中微量元素硒含量的分析測定方法。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，方法對茶葉中Se 的檢出限為0.1309ng·mL-1，方法靈敏度高。對茶葉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測定結(jié)果表明，方法準(zhǔn)確可靠。

經(jīng)過比較，茶葉樣品的單酸和混酸兩種消化方式，證實(shí)HNO3-HClO4混酸消解方式可靠，其特點(diǎn)是消化完全，消化過程中硒的損失小。而硝酸消解方式消化不完全，且不易控制消化過程中硒的損失。

本文用接近實(shí)際飲茶方式的實(shí)驗(yàn)?zāi)M方法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計，研究了浸泡不同時間、不同次數(shù)的茶水中微量元素硒的浸出情況。實(shí)驗(yàn)表明，一般茶葉3 遍浸泡即可使其中的可浸微量元素硒基本浸出，故就富硒茶而言，建議人們在日常飲茶的過程中以前3 泡茶水為主，再多無益。本方法可作為茶葉中微量元素有效硒（可浸出含量）品質(zhì)的參考評價方法。