朱風(fēng)華，朱連勤

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東青島 266109；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，山東青島 266109）

飼料原料中霉菌毒素檢出率高、超標(biāo)率高，與環(huán)境溫度、作物病蟲(chóng)害和谷物收獲倉(cāng)儲(chǔ)方式有密切關(guān)系。1961—2011 年，山東地區(qū)每10 年的年平均氣溫提高0.22℃、年平均最高氣溫提高0.17℃、年平均最低氣溫提高0.33℃[1]。近20 年，我國(guó)農(nóng)作物病蟲(chóng)害發(fā)生面積和病蟲(chóng)害發(fā)生面積率分別以8 520.05 千公頃次／年和每年0.05% 的速度顯著增長(zhǎng)，89.3% 的省份病蟲(chóng)害發(fā)生率距平與平均溫度距平呈正相關(guān)關(guān)系[2]。作物發(fā)生病蟲(chóng)害是田間霉菌毒素產(chǎn)生的主要誘因。玉米聯(lián)合收獲應(yīng)用不當(dāng)導(dǎo)致玉米碎粒率大幅度提升，自然曬干過(guò)程中破碎玉米容易霉變。我國(guó)烘干玉米的比例比較低，烘干玉米胚芽部水分高，更有利于霉菌生長(zhǎng)[3]?？傊?，受氣溫升高、作物病蟲(chóng)害頻發(fā)、玉米脫粒不當(dāng)以及玉米烘干比例較低等因素影響，飼料原料及工業(yè)加工副產(chǎn)品、配合飼料主要霉菌毒素檢出率較高，且存在不同程度的霉菌毒素含量超標(biāo)的現(xiàn)象。朱風(fēng)華等[4-6]在2014—2018 年連續(xù)調(diào)查了山東地區(qū)飼料原料和配合飼料中黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）背景值，發(fā)現(xiàn)飼料原料和配合飼料中AFB1、ZEN 和DON 含量均有不同程度超標(biāo)。為進(jìn)一步了解2019 年山東地區(qū)飼料原料和配合飼料中AFB1、ZEN 和DON 變化趨勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)室在2019 年對(duì)山東地區(qū)飼料原料和配合飼料中AFB1、ZEN 和DON 背景值進(jìn)行調(diào)查研究，為飼料企業(yè)、養(yǎng)殖企業(yè)針對(duì)畜禽霉菌毒素中毒風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集與制備 本試驗(yàn)于2019 年1—12 月采集自山東省各地規(guī)?；瘎?dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)、飼料廠(chǎng)中的飼料原料樣品1 006 份，主要包括玉米及副產(chǎn)物、餅粕類(lèi)飼料、麥類(lèi)及副產(chǎn)物；配合飼料樣品685 份，主要包括鵪鶉配合飼料、雞配合飼料、鴨配合飼料、豬配合飼料。

樣品采集方法按《飼料 采樣》（GB/T 14699.1-2005）進(jìn)行。樣品采集后，風(fēng)干飼料用四分法縮減取樣約200 g，粉碎過(guò)20 目篩后，裝入自封袋貼好標(biāo)簽，置于-20℃冰箱備用。

1.2 試劑 AFB1檢測(cè)卡（40T）、DON 檢測(cè)卡（40T）、ZEN 檢測(cè)卡（40T）、AFB1參數(shù)卡1 和參數(shù)卡2、DON 參數(shù)卡1 和參數(shù)卡2、ZEN 參數(shù)卡1 和參數(shù)卡2、ZEN 樣本稀釋液、AFB1樣本稀釋液、DON 樣本稀釋液均為北京熱景生物技術(shù)股份有限公司產(chǎn)品。

1.3 儀器設(shè)備 上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀（北京熱景生物技術(shù)股份有限公司），粉碎機(jī)，電子天平（0.000 1 g），渦旋儀，搖床，低速離心機(jī)。

1.4 樣品預(yù)處理

1.4.1 飼料中AFB1、ZEN 的提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取被檢5 g（精確到0.000 2 g）樣品，加入25 mL 甲醇溶液（水和甲醇比例為3:7），用搖床充分震蕩5 min 后，靜置5 min，用離心機(jī)（6000 r/min）離心30S 提取液。取200 μL 提取液加入600 μL AFB1（或ZEN）樣品稀釋液，用渦旋儀渦旋30 s，混勻備用。

1.4.2 飼料中DON 的提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取被檢樣品3 g（精確到0.000 2 g）樣品，加入30 mL 去離子水，用振蕩器充分震蕩5 min，之后靜置5 min，用離心機(jī)（6000 r/min）離心30S 提取液。取100 μL 濾液至2 mL 聚苯乙烯離心管中加入700 μL 樣本稀釋液，用渦旋儀渦旋30 s，混勻備用。

1.5 樣品檢測(cè)

1.5.1 AFB1、DON 和ZEN 的檢測(cè) 將上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀開(kāi)機(jī)，預(yù)熱，插入本批次產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的且與樣本類(lèi)型一致的參數(shù)卡進(jìn)行校參。用移液器吸取100 μL 經(jīng)過(guò)前處理的待測(cè)樣品加入檢測(cè)卡的加樣孔中。點(diǎn)擊“手動(dòng)測(cè)量”進(jìn)入“輸入ID 界面”，點(diǎn)擊“確定”后依照界面信息掃描測(cè)試卡底部條形碼，掃描成功后將測(cè)試卡插入上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行測(cè)量。在儀器屏幕上讀取檢測(cè)結(jié)果。

1.5.2 AFB1、DON 和ZEN 檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度 利用上轉(zhuǎn)發(fā)光（UPT）競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析法檢測(cè)飼料中AFB1、ZEN、DON 的加標(biāo)回收率均為80%～120%，變異系數(shù)≤15%。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SAS9.3 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，描述性統(tǒng)計(jì)量采用means過(guò)程，頻數(shù)統(tǒng)計(jì)采用freq過(guò)程。飼料原料及配合飼料限量值和超標(biāo)率計(jì)算依據(jù)參考《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078-2017）[7]。

2 結(jié)果

2.1 全部被檢飼料原料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 由表1 可知，被檢飼料原料中DON、ZEN和AFB1檢出率分別為63.42%、49.26% 和53.56%，DON、ZEN 和AFB1超標(biāo)率分別為4.70%、2.53%、2.18%。

表1 所有飼料原料中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.2 玉米中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 由表2 可知，玉米中DON、ZEN 和AFB1檢出率分別為65.27%、45.42%和為34.73%。玉米中DON、ZEN 和AFB1最高含量分別為7 256.04、1 000.00、100.00 μg/kg，玉米中DON、ZEN、AFB1超標(biāo)率分別為0.58%、5.88%和2.20%。

表2 玉米中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.3 玉米副產(chǎn)品中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果由表3 可知，DDGS、玉米胚芽餅粕、玉米蛋白粉中DON 檢出率分別為92.45%、39.13%、25.71%，最高含量分別為9 848.00、10 000.00、4 156.00 μg/kg，超標(biāo)率分別為11.22%、22.22%、0.00%。DDGS、玉米胚芽餅粕、玉米蛋白粉中ZEN 檢出率分別為89.62%、81.82%、64.29%，最高含量分別為2 527.55、848.05、587.54 μg/kg，超標(biāo)率分別為0.53%、11.11%、22.22%。玉米胚芽餅粕、玉米蛋白粉、DDGS 中AFB1檢出率分別為97.59%、82.11%、40.09%，最高含量分別為53.58、115.92、15.44 μg/kg，超標(biāo)率分別為3.70%、3.85%、0.00%。

表3 玉米副產(chǎn)品中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.4 餅粕類(lèi)飼料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 由表4可知，花生餅粕、大豆粕中DON檢出率分別為8.00%、6.25%，最高含量分別為640.00、630.00 μg/kg，未見(jiàn)超標(biāo)。ZEN 花生餅粕檢出率為16.67%，最高含量為96.42 μg/kg，未見(jiàn)超標(biāo)；大豆粕未檢出?；ㄉ炂?、大豆粕中AFB1檢出率分別為94.92%、21.82%，最高含量分別為131.17μg/kg、8.37 μg/kg，超標(biāo)率分別為2.68%、0.00%。

表4 餅粕類(lèi)DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.5 麥類(lèi)及副產(chǎn)物中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 如表5 所示，小麥麩皮、小麥面粉、大麥、小麥中DON 檢出率分別為80.95%、72.50%、60.00%、57.14%，最高含量分別為9 860.00、6 480.00、2 482.00、10 000.00 μg/kg，超標(biāo)率分別為5.88%、0.86%、0.00%、12.50%。小麥、小麥面粉、小麥麩皮中ZEN 檢出率分別為33.33%、22.00%、11.97%，最高含量分別為199.00、407.57、156.80 μg/kg，都不超標(biāo)，大麥未檢出ZEN。小麥麩皮、小麥、小麥面粉中AFB1檢出率分別為52.00%、44.44%、21.88%，最高含量分別為18.72、8.62、20.81 μg/kg，都不超標(biāo)。

表5 小麥及副產(chǎn)物中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.6 其他飼料原料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 如表6 所示，米糠及粕、大豆皮中DON 檢出率分別為72.06%、24.62%，最高含量分別為1 150.00 μg/kg 和640.00 μg/kg，都不超標(biāo)。大豆皮、米糠及粕中ZEN 檢出率分別為50.00%和38.64%，最高含量分別為480.80 μg/kg和100.60 μg/kg，都不超標(biāo)。米糠及粕、大豆皮中AFB1檢出率分別為47.22%和28.57%，最高含量分別為15.01 μg/kg 和6.05 μg/kg，都不超標(biāo)。

表6 其他原料中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.7 飼料配合料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 由表7 可知，被檢配合飼料中DON、ZEN 和AFB1檢出率分別為84.82%、54.17%和40.72%，DON、ZEN 和AFB1超標(biāo)率分別為0.00%、2.31%、0.74%。

表7 所有飼料配合料中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.8 家禽配合飼料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果 由表8 可知，產(chǎn)蛋鵪鶉配合飼料、雛鴨配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料、雛鵪鶉配合飼料、雛雞配合飼料中DON 檢出率分別為100.00%、90.74%、82.24%、80.39%、75.00%和75.00%，DON 最高含量分別為798.19、2 170.00、1 890.00、1 570.00、801.76、1 240.00 μg/kg，都不超標(biāo)。生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料、雛鴨配合飼料、雛雞配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料、雛鵪鶉配合飼料、產(chǎn)蛋鵪鶉配合飼料中ZEN 檢出率分別為79.82%、72.22%、70.37%、59.26%、57.14%和33.33%，ZEN 最高含量分別為361.68、372.30、316.91、244.12、191.42、225.50 μg/kg，都不超標(biāo)。產(chǎn)蛋鵪鶉配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料、雛鴨配合飼料、雛雞配合飼料、雛鵪鶉配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料中AFB1檢出率分別為59.62%、46.06%、44.83%、41.04%、35.29%和35.25%，最高含量分別為7.98、19.28、8.53、17.08、4.97、14.07 μg/kg，雛雞配合料AFB1含量超標(biāo)率2.82%，其他未見(jiàn)超標(biāo)。

表8 家禽配合飼料中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

2.9 豬配合飼料中DON、ZEN 和AFB1的檢測(cè)結(jié)果如表9 所示，青年母豬配合飼料、其他豬配合飼料、仔豬配合飼料中DON 檢出率分別為96.00%、87.08%和81.40%，DON 最高含量分別為1 040.00、1 406.00、1 230.00 μg/kg，超標(biāo)率分別為4.17%、2.20%和3.81%。其他豬配合飼料、仔豬配合飼料、青年母豬配合飼料中ZEN 檢出率分別為43.79%、30.00% 和29.41%，ZEN 最高含量分別為338.50、259.05、99.55 μg/kg，超標(biāo)率分別為1.35%、20.83%和0.00%。其他豬配合飼料、仔豬配合飼料中AFB1檢出率分別為20.00%、11.11%，最高含量分別為5.65、6.43 μg/kg，都不超標(biāo)。

表9 豬配合飼料中DON、ZEN 和AFB1 的檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

3.1 2019 年山東地區(qū)飼料原料和配合飼料中DON、ZEN 和AFB1污染狀況分析 由結(jié)果可知，被檢飼料原料均檢出DON，檢出率在6.25%～92.45%。玉米胚芽餅粕、小麥、DDGS、小麥麩皮、小麥面粉、玉米中DON 超標(biāo)率分別為22.22%、12.50%、11.22%、5.88%、0.86%和0.58%。其他原料未見(jiàn)超標(biāo)。可以看出，玉米胚芽餅粕、小麥、DDGS 和小麥麩皮DON 超標(biāo)引起畜禽中毒的風(fēng)險(xiǎn)比較大，也要高度關(guān)注小麥面粉和玉米DON 含量。

被檢飼料原料中除了大豆粕和大麥未檢出ZEN，其他原料均有檢出，檢出率在11.97%～89.62%。玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、玉米和DDGS 中ZEN 超標(biāo)率分別為22.22%、11.11%、5.88%和0.53%?？梢钥闯?，玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕和玉米ZEN 超標(biāo)引起畜禽中毒的風(fēng)險(xiǎn)比較大，也要高度關(guān)注DDGS 中ZEN 含量。

被檢飼料原料中除了大麥未檢出AFB1其他飼料原料中均有檢出，檢出率為21.82%～97.59%。玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、花生餅粕、玉米中AFB1超標(biāo)率分別為3.85%、3.70%、2.68%、2.20%，其他原料未超標(biāo)?？梢钥闯?，玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、花生餅粕、玉米AFB1超標(biāo)引起畜禽中毒的風(fēng)險(xiǎn)比較大?？傮w而言，飼料企業(yè)和養(yǎng)殖企業(yè)要高度關(guān)注玉米及其加工副產(chǎn)品中DON、ZEN 和AFB1的含量。

分品種來(lái)看，家禽配合飼料3 種毒素均有檢出，除雛雞配合料AFB1含量超標(biāo)率2.82%外，其他未見(jiàn)超標(biāo)。青年母豬配合飼料、其他豬配合飼料、仔豬配合飼料中DON 和ZEN 均有檢出；除了青年母豬配合飼料ZEN 不超標(biāo)外，其他豬配合飼料、仔豬配合飼料均有不同程度的超標(biāo)。其他豬配合飼料、仔豬配合飼料中AFB1檢出率分別為20.00%、11.11%，都不超標(biāo)。由此可見(jiàn)，DON、ZEN、AFB1在配合飼料中的檢出率比較高，雛雞配合料AFB1超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)比較高；青年母豬配合飼料、其他豬配合飼料、仔豬配合飼料中DON 和ZEN 超標(biāo)導(dǎo)致豬中毒的風(fēng)險(xiǎn)比較高，飼料企業(yè)和養(yǎng)殖企業(yè)要高度重視。

3.2 近3 年山東地區(qū)飼料原料和配合飼料中DON、ZEN和AFB1污染狀況的變化趨勢(shì) 在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，DDGS、小麥麩皮、小麥面粉、米糠及粕、玉米、小麥、玉米胚芽餅粕、玉米蛋白粉和花生餅粕的DON 均有檢出，檢出率高低不同，只有大豆皮在2019年的檢出率為24.62%，在2017 年未檢出。連續(xù)3 年，DDGS 的DON 檢出率排在首位，其次是小麥及其加工產(chǎn)品，排在第3 位的是玉米、玉米胚芽餅粕及玉米蛋白粉，花生餅粕中DON 檢出率較低。2017—2019 年，玉米胚芽餅粕DON 超標(biāo)率最高，連續(xù)排在首位，其次是小麥、DDGS，小麥面粉和玉米的超標(biāo)率較低?？梢钥闯觥ｋm然玉米胚芽餅粕的DON 檢出率不高，但是其超標(biāo)率高；DDGS 和小麥的DON 檢出率高，其超標(biāo)率也比較高，值得高度關(guān)注。

在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，玉米胚芽餅粕、花生餅粕、玉米蛋白粉、米糠及粕、小麥次粉、麩皮、小麥、DDGS、玉米、大豆皮AFB1檢出率呈現(xiàn)逐年增高的趨勢(shì)，玉米胚芽餅粕、花生餅粕、玉米蛋白粉AFB1的檢出率排在前列，其次是小麥及其加工副產(chǎn)品和玉米、DDGS。連續(xù)3 年，花生餅粕、玉米、玉米胚芽餅粕、玉米蛋白粉和DDGS 中AFB1超標(biāo)率比較高，需要高度關(guān)注。

在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、DDGS、米糠及粕、大豆皮、玉米、小麥次粉、麩皮、花生餅粕ZEN 檢出率高低不同，均有檢出。玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、DDGS 中ZEN 檢出率高，排在前3 位，其次是大豆皮、玉米、米糠及粕，小麥及其加工副產(chǎn)品檢出率相對(duì)較低。玉米中ZEN 檢出率呈現(xiàn)逐年增高的趨勢(shì)。連續(xù)3 年，玉米蛋白粉、玉米胚芽餅粕、玉米和DDGS 中ZEN 超標(biāo)率比較高，需要高度關(guān)注。

在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，雛鴨配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料中DON 檢出率高，2019 年不超標(biāo)，2017 年和2018 年超標(biāo)率分別為0.66%和0.64%。產(chǎn)蛋鵪鶉、雛鵪鶉、雛雞、小雞、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料DON 檢出率不為零，但均不超標(biāo)。連續(xù)3 年，育肥豬、生長(zhǎng)豬、仔豬、青年母豬配合飼料DON 檢出率高，且超標(biāo)率也高，值得高度關(guān)注。

在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，雛鴨、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料ZEN 檢出率高，在2017 年、2018年ZEN 超標(biāo)率比較高，2019 年沒(méi)有超標(biāo)現(xiàn)象。連續(xù)3 年，雛鵪鶉、產(chǎn)蛋鵪鶉、雛雞配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料中ZEN 檢出率高，僅在2017 年和2018 年，生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料ZEN 超標(biāo)率為0.83%、1.16%。其他未見(jiàn)超標(biāo)。連續(xù)3 年，仔豬、生長(zhǎng)豬、青年母豬、育肥豬配合飼料ZEN 的檢出率比較低，但是超標(biāo)率比較高，值得關(guān)注。

在2017 年[8]、2018 年[6]和2019 年，雛鴨配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋鴨配合飼料中AFB1檢出率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，在2017 年和2018 年超標(biāo)率比較高，2019 年未見(jiàn)超標(biāo)。連續(xù)3 年，產(chǎn)蛋鵪鶉配合飼料、雛鵪鶉配合飼料、生長(zhǎng)及產(chǎn)蛋雞配合飼料、雛雞配合飼料中AFB1檢出率比較高，雛雞配合飼料AFB1超標(biāo)率比較高，值得高度關(guān)注。其他未見(jiàn)超標(biāo)。連續(xù)3 年，仔豬、生長(zhǎng)豬、青年母豬、育肥豬配合飼料AFB1檢出率比較低，僅在2018 年仔豬配合飼料 AFB1超標(biāo)率為3.23%，其他未見(jiàn)超標(biāo)。

4 結(jié) 論

在2019 年檢測(cè)山東地區(qū)飼料原料和配合飼料，發(fā)現(xiàn)玉米胚芽餅粕中DON、ZEN 和AFB1超標(biāo)率高；玉米蛋白粉和玉米ZEN、AFB1超標(biāo)率高；小麥、DDGS和小麥麩皮DON 超標(biāo)率高，花生餅粕AFB1超標(biāo)率高。雛雞配合料AFB1超標(biāo)率高。青年母豬配合飼料、其他豬配合飼料和仔豬配合飼料中DON 超標(biāo)率高，仔豬和其他豬配合飼料ZEN 超標(biāo)率高。在生產(chǎn)中，使用DON、ZEN、AFB1含量超標(biāo)的飼料原料或配合飼料會(huì)引起畜禽DON、ZEN、AFB1中毒的風(fēng)險(xiǎn)加大，要引起高度關(guān)注。