孫 宇， 游雪甫， 楊信怡

雙硫侖（disulfiram）是二乙基二硫代氨基甲酸酯（diethyldithiocarbamate，DDC）的二聚體，起初通過(guò)臨床試驗(yàn)證明雙硫侖通過(guò)抑制醛脫氫酶，阻礙乙醇在體內(nèi)的代謝，致使飲酒者出現(xiàn)乙醛中毒樣癥狀，并將這種癥狀表現(xiàn)命名為“雙硫侖樣反應(yīng)”。基于這一作用，雙硫侖被用作乙醇增敏藥，促使嗜酒者對(duì)乙醇產(chǎn)生厭惡感，從而用于戒酒治療[1-2]。當(dāng)前，雙硫侖作為戒酒藥已被包括美國(guó)藥典、日本藥典、歐洲藥典在內(nèi)的多國(guó)藥典收錄。雙硫侖安全性良好，口服用藥量可高達(dá)500 mg/d[3]。雙硫侖用于臨床后，其代謝產(chǎn)物DDC通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化酶活性對(duì)抗體內(nèi)過(guò)多自由基而產(chǎn)生的抗白內(nèi)障作用也被發(fā)現(xiàn)，并被認(rèn)為是頗具潛力的抗白內(nèi)障藥物[4]。近年來(lái)，研究還發(fā)現(xiàn)雙硫侖可通過(guò)抑制腫瘤干細(xì)胞生物標(biāo)志物醛脫氫酶的作用抑制腫瘤干細(xì)胞以及調(diào)節(jié)NF-κB等信號(hào)傳導(dǎo)通路發(fā)揮抗腫瘤作用，其抗腫瘤機(jī)制的有效闡明[5-6]，再次引起人們對(duì)該藥的廣泛關(guān)注。鑒于雙硫侖曾長(zhǎng)期作為除螨劑使用[7]，因此很多研究者開(kāi)始關(guān)注其在抗微生物感染領(lǐng)域的藥用價(jià)值，進(jìn)而關(guān)注其代謝產(chǎn)物的活性。本文針對(duì)雙硫侖及其主要代謝產(chǎn)物在抗感染研究領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為相關(guān)領(lǐng)域研究者提供參考。

圖1 雙硫侖化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 雙硫侖的藥動(dòng)學(xué)特性

雙硫侖口服后，經(jīng)胃腸黏膜吸收入血，在內(nèi)源性硫醇和紅細(xì)胞中谷胱甘肽還原酶系統(tǒng)作用下迅速還原為單體DDC。后者并不穩(wěn)定，可進(jìn)一步降解為二乙胺（DEA）和二硫化碳（CS2）。同時(shí)，DDC也是Ⅱ相代謝酶系統(tǒng)的底物，在S-甲基轉(zhuǎn)移酶等Ⅱ相代謝酶催化下形成二乙基二硫代氨基甲酸甲酯（Me-DDC）和葡萄糖醛酸化的DDC。Me-DDC再經(jīng)氧化脫硫轉(zhuǎn)化為二乙基硫代氨基甲酸甲酯（Me-DTC），Me-DTC則可被進(jìn)一步氧化成其對(duì)應(yīng)的砜和亞砜代謝物。吸收后，雙硫侖及其代謝產(chǎn)物均勻分布于全身各種組織中?？诜蚋骨唤o予大鼠或小鼠35S-雙硫侖，在整個(gè)胃腸道以及血液、肝臟、腎臟、心臟、腎上腺、甲狀腺、胰腺、睪丸、脾臟、骨髓和肌肉中均可檢測(cè)到雙硫侖和DDC，而在紅細(xì)胞中未檢測(cè)到放射性。然而每種代謝物在各器官中的分布差異很大，這可能與不同組織中具有的生物轉(zhuǎn)化酶類型有關(guān)。雙硫侖和DDC在體外和體內(nèi)均可與不同蛋白質(zhì)的游離巰基結(jié)合形成復(fù)合二硫化物，在血液中，雙硫侖和Me-DTC主要與白蛋白高度結(jié)合。雙硫侖的代謝終產(chǎn)物主要通過(guò)腎、糞便和肺排出。雙硫侖口服后，約20.0%以原藥形式經(jīng)糞便排出，大多數(shù)代謝產(chǎn)物包括DDC的葡萄糖醛酸苷或有機(jī)硫酸鹽通過(guò)腎臟消除，而CS2主要經(jīng)肺排出[8]。

Faiman等[9]利用高效液相色譜（HPLC）技術(shù)在15名男性健康酗酒者中開(kāi)展研究，獲得了雙硫侖單次和多次給藥后藥動(dòng)學(xué)特性的詳細(xì)報(bào)告。在受試者服藥前和口服250 mg雙硫侖片劑后，在不同時(shí)間點(diǎn)分別收集其血液、尿液和呼吸樣本，獲得單次給藥樣本。72 h后，受試者需每天口服250 mg雙硫侖至第15天以獲得多次給藥樣本。受試者服用單劑量或多劑量的雙硫侖后，雙硫侖及其代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1。雙硫侖、DDC、Me-DDC、DEA、CS2的消除半衰期分別為7.3 h、15.5 h、22.1 h、13.9 h、8.9 h。給藥劑量為250 mg時(shí)，雙硫侖及其代謝產(chǎn)物平均達(dá)峰時(shí)間為8～10 h。但是雙硫侖及其代謝產(chǎn)物的血漿濃度存在明顯的個(gè)體間差異，這種差異可能由于雙硫侖的強(qiáng)脂溶性及其在脂肪組織中的分布、與血漿蛋白的結(jié)合力各不相同導(dǎo)致。藥物一旦在脂肪組織達(dá)到“飽和”，將產(chǎn)生趨于一致的血漿藥物水平。在對(duì)雙硫侖及其代謝產(chǎn)物DDC的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物毒性研究中，未發(fā)現(xiàn)致癌、致畸或致突變作用[10]。

表1 雙硫侖及其代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

2 雙硫侖及其主要代謝產(chǎn)物的抗感染藥理活性

2.1 抗細(xì)菌活性

Frazier等[11]測(cè)定了雙硫侖及其主要代謝產(chǎn)物對(duì)30種革蘭陽(yáng)性和陰性菌的抗菌活性。發(fā)現(xiàn)雙硫侖對(duì)除單核細(xì)胞增生李斯特菌和鏈球菌之外的大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌均表現(xiàn)出抑菌活性。其中葡萄球菌（包括萬(wàn)古霉素不敏感菌株）對(duì)雙硫侖的敏感性較高，最低抑菌濃度（MIC）為1～16 mg/L，而炭疽桿菌對(duì)雙硫侖及代謝產(chǎn)物DDC均表現(xiàn)出很高敏感性，MIC為0.5～4 mg/L，但其余幾種代謝產(chǎn)物未表現(xiàn)出明顯的抗菌活性。見(jiàn)表2。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是引發(fā)臨床各類感染的重要病原，由于其耐多藥特性，往往致使病情遷延或抗感染治療失敗。Phillips等[12]發(fā)現(xiàn)體外條件下，雙硫侖對(duì)MRSA顯示較強(qiáng)的抑菌活性，MIC為1.33 mg/L。之后的研究發(fā)現(xiàn)雙硫侖除對(duì)耐多藥MRSA有較好體外抑菌活性，與萬(wàn)古霉素聯(lián)用還對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥金黃色葡萄球菌（VRSA）具有協(xié)同抗菌效應(yīng)，在研究中測(cè)得雙硫侖對(duì)臨床分離的MRSA和萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌（VRE）的MIC范圍為2～16 mg/L，對(duì)包括萬(wàn)古

霉素中介金黃色葡萄球菌（VISA）和VRSA菌株在內(nèi)的30株受試MRSA菌株，雙硫侖抑制90%菌株生長(zhǎng)的MIC（MIC90）為16 mg/L，但革蘭陰性菌對(duì)雙硫侖敏感性低（MIC≥32 mg/L）[13]。棋盤(pán)法檢測(cè)萬(wàn)古霉素和雙硫侖聯(lián)用，對(duì)萬(wàn)古霉素A型VRSA菌株具有明顯的協(xié)同抗菌作用，對(duì)3株臨床分離VRSA菌株，雙硫侖（0.5～1 mg/L）將萬(wàn)古霉素的MIC從＞128 mg/L降至4～16 mg/L，抑菌濃度（FIC）指數(shù) ＜0.5。這些研究提示雙硫侖或可作為萬(wàn)古霉素增效劑或聯(lián)用藥物，用于糖肽類藥物治療無(wú)效的慢性和復(fù)發(fā)性MRSA感染，其在體內(nèi)的聯(lián)用效果值得進(jìn)一步關(guān)注。

表2 雙硫侖及其代謝產(chǎn)物的抗菌活性

通過(guò)檢測(cè)雙硫侖及代謝產(chǎn)物在動(dòng)物體內(nèi)的分布，證實(shí)雙硫侖和DDC優(yōu)先分布于肺部，這為雙硫侖治療某些感染性肺病如肺結(jié)核提供了依據(jù)[14]。早先，Jeney等[15]首次報(bào)道了雙硫侖和DDC在豚鼠結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）感染模型中的抗菌活性。Hubner等[16]進(jìn)一步觀察到DDC在體外和體內(nèi)條件下均可增強(qiáng)單核細(xì)胞的抗結(jié)核活性。在評(píng)價(jià)雙硫侖和DDC對(duì)耐多藥Mtb（MDR-Mtb）和泛耐藥Mtb（XDR-Mtb）菌株的抗菌活性中，對(duì)包括MDRMtb和XDR-Mtb菌株在內(nèi)的42株臨床分離Mtb菌株，雙硫侖和DDC均顯示良好抗Mtb活性，MIC90分別為1.56 mg/L和3.13 mg/L，且與喹諾酮類藥物（左氧氟沙星、司帕沙星、環(huán)丙沙星）無(wú)交叉耐藥性[17]。隨后，研究者利用人單核細(xì)胞系THP-1檢測(cè)雙硫侖和DDC細(xì)胞內(nèi)殺Mtb的活性，發(fā)現(xiàn)二者以劑量依賴方式分別在6～30 mg/ L和10～30 mg/ L對(duì)細(xì)胞內(nèi)Mtb呈現(xiàn)明顯殺菌活性。在慢性結(jié)核?。═B）小鼠模型中，雙硫侖亦顯示較明顯的體內(nèi)殺菌活性。雙硫侖治療組在80～160 mg/kg劑量時(shí)，小鼠肺和脾中菌落形成單位計(jì)數(shù)值（CFU）從105CFU/臟器降低至104CFU/臟器。盡管目前雙硫侖抗Mtb的作用機(jī)制仍不清楚，但有研究顯示雙硫侖結(jié)構(gòu)類似物二硫代氨基甲酸鹽類可能通過(guò)抑制β碳酸酐酶（β-CAs）活性抑制Mtb的生長(zhǎng)，該作用機(jī)制對(duì)于尋找雙硫侖及DDC的抗Mtb靶標(biāo)具有一定啟示意義?？傊p硫侖及其代謝物DDC可能是一類潛在的治療MDR / XDR-TB的新型藥物，其抗Mtb作用機(jī)制值得進(jìn)一步關(guān)注。

2.2 抗真菌活性

免疫功能低下患者如艾滋病、癌癥晚期、重癥監(jiān)護(hù)患者易發(fā)生真菌感染，目前常用的抗真菌藥往往因真菌的跨膜外排機(jī)制[如P-糖蛋白（P-gp）介導(dǎo)的藥物外排]而活性降低[18]。研究顯示，雙硫侖對(duì)真菌細(xì)胞膜表面的P-gp有抑制調(diào)節(jié)作用。Sauna等[19]對(duì)雙硫侖作為多藥耐藥調(diào)節(jié)劑的分子基礎(chǔ)進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)雙硫侖能與多種ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的藥物-底物結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合并抑制耐藥性相關(guān)的ATP水解。以抗深部真菌的三唑類藥物為例，真菌對(duì)其產(chǎn)生耐藥性主要由P-gp介導(dǎo)。而雙硫侖作為一種外排泵調(diào)節(jié)劑，可通過(guò)抑制這種藥物外排克服真菌對(duì)三唑類藥物（主要是氟康唑耐藥白念珠菌）的耐藥性，從而可作為一種潛在的聯(lián)用藥物，輔助治療耐藥性真菌引起的感染。

受此啟發(fā)，Khan等[20]采用氟康唑聯(lián)合雙硫侖對(duì)白念珠菌和光滑念珠菌進(jìn)行抗真菌測(cè)試，然而并未觀察到兩藥存在任何協(xié)同或相加作用，他們推測(cè)可能是由于14-α-脫甲基酶的突變所致。之后，他們又對(duì)雙硫侖的抗一系列酵母和絲狀真菌活性進(jìn)行了檢測(cè)。研究顯示，雙硫侖對(duì)61株受試氟康唑敏感或耐藥的白念珠菌、非白念珠菌、絲狀真菌分離株均顯示良好殺真菌活性，MIC50、MIC90分別為4 mg/L、8 mg/L。雙硫侖對(duì)試驗(yàn)中13株曲霉也呈現(xiàn)明顯的殺真菌活性，MIC50、MIC90分別為2 mg/L、8 mg/L。盡管目前人們已觀察到雙硫侖具有較顯著的殺真菌活性，但其作用機(jī)制仍待闡明。

2.3 抗寄生蟲(chóng)活性

早在1942年，Gordon等[7]就提出四乙基結(jié)構(gòu)類似物應(yīng)具有殺螨作用，進(jìn)而利用背肛螨屬螨蟲(chóng)的感染大鼠模型研究了雙硫侖的殺螨作用，并與2種疥瘡治療藥物苯甲酸芐酯和二甲基噻吩（滅疥）進(jìn)行了療效比較。結(jié)果顯示，雙硫侖的殺螨作用較2種對(duì)照藥更為高效、迅速，應(yīng)是一種有效的疥瘡治療藥物。這一發(fā)現(xiàn)為雙硫侖用于疥瘡治療提供了依據(jù)，并啟發(fā)人們進(jìn)一步探索其治療其他寄生蟲(chóng)感染的可能。雙硫侖上市后，人們對(duì)其抗寄生蟲(chóng)活性的研究繼續(xù)深入，后續(xù)研究顯示其對(duì)利什曼蟲(chóng)、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)（賈第蟲(chóng)）、惡性瘧原蟲(chóng)、克氏錐蟲(chóng)、陰道毛滴蟲(chóng)等具有廣譜殺蟲(chóng)活性。

利什曼蟲(chóng)感染可導(dǎo)致內(nèi)臟或皮膚利什曼蟲(chóng)病，且一旦引起內(nèi)臟利什曼蟲(chóng)病，如未及時(shí)接受治療往往危及生命。Osorio等[21]采用熒光素酶轉(zhuǎn)染的杜氏利什曼原蟲(chóng)，對(duì)倉(cāng)鼠的離體脾臟進(jìn)行感染制成外植體培養(yǎng)系統(tǒng)，篩選抗蟲(chóng)劑。最終從4 000多個(gè)化合物中篩得雙硫侖，發(fā)現(xiàn)其在納摩爾濃度具有顯著殺利什曼原蟲(chóng)活性。Peniche等[22]通過(guò)進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)雙硫侖與二價(jià)金屬鹽（1 μmol/ L）合用，能顯著提高殺滅利什曼原蟲(chóng)活性。例如，雙硫侖與硫酸鋅組合可使針對(duì)杜氏利什曼原蟲(chóng)的體外治療指數(shù)增加1.8倍。研究人員通過(guò)對(duì)利什曼蟲(chóng)進(jìn)行代謝網(wǎng)絡(luò)計(jì)算機(jī)模擬評(píng)估，預(yù)測(cè)雙硫侖的抗利什曼原蟲(chóng)活性可能是與其干擾蟲(chóng)體中由LmjF25.1170和LmjF25.1180基因編碼的跨膜質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)有關(guān)。這些基因編碼的蛋白質(zhì)是F型ATP酶β鏈復(fù)合物組成部分，參與寄生蟲(chóng)ATP合成，通過(guò)特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)質(zhì)子（H+）產(chǎn)生電化學(xué)梯度，從而為ATP合成提供動(dòng)力。在杜氏利什曼蟲(chóng)中，雙硫侖導(dǎo)致F-ATP合成酶的抑制使線粒體膜電位去極化，ATP合成受損，從而增加細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生，導(dǎo)致寄生蟲(chóng)DNA斷裂而死亡。盡管目前尚無(wú)單用或聯(lián)用雙硫侖治療皮膚或內(nèi)臟利什曼病的臨床數(shù)據(jù)，但這些研究確為雙硫侖未來(lái)用于利什曼病的治療奠定了理論基礎(chǔ)。

賈第蟲(chóng)是一種常致人體腸道感染的寄生蟲(chóng)，可致賈第蟲(chóng)病。Nash等[23]發(fā)現(xiàn)體外條件下測(cè)得（1.23±0.32）μmol/L雙硫侖可殺滅賈第蟲(chóng)。在該寄生蟲(chóng)感染的小鼠模型中，研究者進(jìn)一步觀測(cè)到每天2次，持續(xù)4 d灌胃給予雙硫侖25 mg，可使40.0%小鼠治愈，未治愈小鼠的賈第蟲(chóng)負(fù)荷也有顯著性降低（P＜0.01），而對(duì)照組治愈率為0。Hill等[24]在體外、體內(nèi)條件下觀測(cè)了雙硫侖對(duì)寄生性鼠鞭蟲(chóng)卵殼形態(tài)的影響。研究人員在小鼠感染鼠鞭蟲(chóng)后第25天開(kāi)始每天分別給予劑量為2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、7.5 mg/ kg的雙硫侖，治療26 d后，觀察到治療組所有成年雌性鞭毛蟲(chóng)所產(chǎn)蟲(chóng)卵均為畸形卵。此外，與對(duì)照組小鼠比較，5.0 mg·kg-1·d-1、7.5 mg·kg-1·d-1劑量的雙硫侖治療組小鼠尸檢中發(fā)現(xiàn)的成蟲(chóng)數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。一般認(rèn)為，鼠鞭蟲(chóng)的卵殼可保護(hù)蟲(chóng)卵在發(fā)育過(guò)程中免受外界傷害，在卵殼形成過(guò)程中，聯(lián)苯酚氧化酶發(fā)揮著重要作用。研究者推測(cè)，雙硫侖作為一種氧化抑制劑，可能抑制該酶活性進(jìn)而干擾蟲(chóng)卵孵化為成蟲(chóng)。雙硫侖通過(guò)干擾卵殼形成，阻斷由卵發(fā)育為鞭蟲(chóng)成蟲(chóng)的殺蟲(chóng)方式具有重要臨床意義。

此外，大量報(bào)道還顯示雙硫侖和/或其代謝產(chǎn)物在體外對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)、克氏錐蟲(chóng)、陰道毛滴蟲(chóng)也具有抑制活性。Scheibel等[25]最早注意到雙硫侖和DDC的抗瘧活性，他們認(rèn)為這兩個(gè)化

合物具有的抑制多種金屬蛋白酶加氧酶的活性、良好的脂/水分配系數(shù)、與金屬離子的高結(jié)合常數(shù)等，均有利于針對(duì)瘧原蟲(chóng)發(fā)揮選擇性毒性。體外研究結(jié)果顯示，雙硫侖和DDC在濃度僅為0.1 mg/L時(shí)即表現(xiàn)出明顯的抗瘧活性。在該研究基礎(chǔ)上，Meshnick等[26]還發(fā)現(xiàn)DDC可通過(guò)與外源性銅離子或內(nèi)源性銅離子（存在于宿主細(xì)胞質(zhì)和寄生蟲(chóng)溶酶體中負(fù)載超氧化物歧化酶的紅細(xì)胞中）形成復(fù)合物，導(dǎo)致蟲(chóng)體細(xì)胞膜損傷，進(jìn)而發(fā)揮抗瘧作用。不過(guò)，DDC-Cu復(fù)合物誘導(dǎo)膜損傷的具體機(jī)制，目前仍不清楚。Lane等[27]在體外檢測(cè)了雙硫侖及其還原代謝產(chǎn)物二乙胺-N-二硫代碳酸鈉（DECD）對(duì)克氏錐蟲(chóng)包括上鞭毛體、錐鞭毛體、無(wú)鞭毛體形式的殺滅活性。結(jié)果顯示，在50 mg/L濃度下，雙硫侖和DECD對(duì)上鞭毛體的抑制率分別為64.6%和69.7%，對(duì)組織培養(yǎng)錐鞭毛體的抑制率分別為 47.7%和46.1%，對(duì)無(wú)鞭毛體感染的3T3成纖維細(xì)胞抑制率分別為60%和67%。研究者同時(shí)指出雙硫侖和DECD殺錐蟲(chóng)的潛在機(jī)制與干擾克氏錐蟲(chóng)的必需金屬離子代謝有關(guān)，并認(rèn)為二者均可作為預(yù)防或治療錐蟲(chóng)病的藥物候選物。另外，雙硫侖和DDC對(duì)甲硝唑敏感及耐藥的陰道毛滴蟲(chóng)和胎三毛滴蟲(chóng)也具有明顯抑制活性，雙硫侖和DDC對(duì)甲硝唑敏感、耐藥陰道毛滴蟲(chóng)的MIC分別為0.1～0.7 μmol/ L、0.2～1.3 μmol/ L和0.3～9 μmol/ L、1.2～9 μmol/L；雙硫侖和DDC對(duì)甲硝唑敏感、耐藥的胎三毛滴蟲(chóng)的MIC分別為0.1～1.0 μmol/L、1.0～6.9 μmol/L和0.3～1.3 μmol/L、0.6～6 μmol/L[28]?？傊?，上述多項(xiàng)研究均顯示雙硫侖及其代謝產(chǎn)物在治療寄生蟲(chóng)感染方面具有巨大應(yīng)用潛力。

2.4 抗病毒活性

1975年，Cari?-Lazar等[29]報(bào)道了雙硫侖可影響包膜病毒的增殖。在病毒吸附前1 h和吸附期間加入雙硫侖（0.1～0.3 mmol/L），對(duì)塞姆利基森林病毒（semliki forest virus，SFV）、禽瘟病毒（fowl plague virus）、新城疫病毒（newcastle disease virus）、水皰性口炎病毒（vesicular stomatitis virus）、偽狂犬病病毒（pseudorabies virus）的增殖均有明顯抑制作用。不過(guò)，在病毒吸附至雞胚細(xì)胞后再加入藥物，則不能觀察到病毒增殖受抑的現(xiàn)象。雙硫侖既不干擾病毒的受體也不干擾紅細(xì)胞，并且不會(huì)阻止病毒吸附，故研究者認(rèn)為雙硫侖可能影響病毒繁殖的早期步驟。

聯(lián)合抗反轉(zhuǎn)錄病毒療法（cART）是一種抑制人類免疫缺陷病毒（HIV）復(fù)制、延緩病情發(fā)展的有效治療方案，但這一療法無(wú)法根除病毒感染，主要是因?yàn)镠IV的基因組可通過(guò)反轉(zhuǎn)錄過(guò)程穩(wěn)定整合入宿主細(xì)胞如記憶性CD4+T細(xì)胞的染色體中，進(jìn)入潛伏狀態(tài)，表現(xiàn)為長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)錄沉默[30]。針對(duì)此現(xiàn)象，當(dāng)前的主要治療策略是重新激活潛伏的HIV，誘導(dǎo)受感染的細(xì)胞繼續(xù)產(chǎn)生病毒顆粒，從而使受感染的宿主細(xì)胞死亡或誘導(dǎo)HIV特異性T 細(xì)胞殺傷。Xing等[31]用抗凋亡蛋白Bcl-2轉(zhuǎn)染的原代CD4+T細(xì)胞模型高通量篩選能誘導(dǎo)病毒基因表達(dá)但不觸發(fā)細(xì)胞活化的化合物，發(fā)現(xiàn)雙硫侖可重新激活潛伏感染的HIV-1而不引起總體T細(xì)胞的活化。目前認(rèn)為，雙硫侖通過(guò)消耗細(xì)胞內(nèi)磷酸酶和張力蛋白同源體（PTEN）上調(diào)蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路，從而誘導(dǎo)HIV-1潛伏感染的單核細(xì)胞系中HIV-1基因轉(zhuǎn)錄[32]。在此基礎(chǔ)上，Spivak等[33]在臨床試驗(yàn)中，連續(xù)14 d給予HIV-1患者雙硫侖500 mg/ d，觀察到該藥確實(shí)可以重新激活人體靜息記憶CD4+T細(xì)胞中潛伏的HIV-1。隨后，Elliott等[34]又進(jìn)行了一項(xiàng)劑量遞增研究，他們對(duì)30例接受cART治療的AIDS患者，連續(xù)3 d每天分別給予500 mg、1 000 mg和2 000 mg劑量的雙硫侖，結(jié)果導(dǎo)致所有劑量組受試者均出現(xiàn)了細(xì)胞相關(guān)的未拼接 HIV RNA增加，且在高劑量下觀察到血漿HIV RNA的增加，與激活HIV潛伏期一致。該試驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)，即使雙硫侖用藥量達(dá)到常規(guī)解酒用藥量的4倍，患者依然耐受良好。鑒于其良好的安全性表現(xiàn)，雙硫侖應(yīng)該適用于長(zhǎng)期、聯(lián)合給藥，用于cART中潛伏HIV的激活。

鑒于雙硫侖能與銅離子螯合，Levinson等[35]研究了雙硫侖及其代謝產(chǎn)物DDC對(duì)勞氏肉瘤病毒惡性轉(zhuǎn)化、真核細(xì)胞合成和核酸結(jié)合的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雙硫侖可抑制勞氏肉瘤病毒RNA依賴性DNA聚合酶的活性，并使病毒喪失惡性轉(zhuǎn)化雞胚細(xì)胞的能力，但DDC對(duì)病毒無(wú)明顯影響。雙硫侖和DDC誘導(dǎo)正常雞胚和人類包皮細(xì)胞中四種蛋白質(zhì)的合成，當(dāng)銅離子存在時(shí)，DDC可與HeLa細(xì)胞DNA和勞氏肉瘤病毒70S基因組RNA結(jié)合。研究者認(rèn)為，雙硫侖可能是通過(guò)與DNA聚合酶活性位點(diǎn)中的Zn2+結(jié)合而對(duì)病毒粒子DNA聚合酶產(chǎn)生抑制，從而抑制勞氏肉瘤病毒轉(zhuǎn)化活性。

病毒蛋白中，Zn2+是維持天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的關(guān)鍵輔助因子。某些與Zn2+結(jié)合的半胱氨酸可與親電試劑反應(yīng)，致使Zn2+失去配體而被排出，從而導(dǎo)致天然蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能受到破壞。故病毒的某些重要結(jié)構(gòu)或功能蛋白中，這類含有反應(yīng)性鋅結(jié)合半胱氨酸殘基的不穩(wěn)定鋅位點(diǎn)可能成為一種頗具希望的抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療靶標(biāo)。雙硫侖作為一種經(jīng)臨床證明、安全性頗高的鋅驅(qū)逐劑，顯然可通過(guò)靶向鋅位點(diǎn)而成為一種潛在的抗病毒藥物。Lee等[36]在丙型肝炎病毒（HCV）的NS5A蛋白中鑒定出不穩(wěn)定的鋅位點(diǎn)，并證明雙硫侖可以從預(yù)測(cè)的靶位將Zn2+驅(qū)除，從而產(chǎn)生抑制HCV復(fù)制的活性，且抑制程度與抗病毒藥物利巴韋林相似，由此認(rèn)為，雙硫侖與干擾素和/或直接靶向HCV的抗病毒藥物聯(lián)用可以治療感染HCV并伴有酒精依賴的患者。Novo-Veleiro等[37]也指出，由于飲酒和HCV感染具有協(xié)同肝毒性作用，兩種因素共存可增加晚期肝硬化和患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)存在酒精依賴的HCV感染患者采用雙硫侖治療，可能會(huì)對(duì)抗病毒療效和患者依從性產(chǎn)生積極影響，為治療提供額外支持。此外，Chen等[38]通過(guò)RNA干擾基因組文庫(kù)篩選，發(fā)現(xiàn)ZBTB25是多種細(xì)胞基因的轉(zhuǎn)錄抑制因子，涉及ZBTB25的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-RNA相互作用促進(jìn)病毒RNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，而ZBTB25相關(guān)功能需要完整的鋅指結(jié)構(gòu)域和ZBTB25的翻譯后SUMO-1修飾。研究者發(fā)現(xiàn)用雙硫侖處理過(guò)表達(dá)ZBTB25的細(xì)胞，由于RNA合成減少導(dǎo)致甲型流感病毒的產(chǎn)生顯著降低，雙硫侖破壞鋅指結(jié)構(gòu)的功能有效抑制了甲型流感病毒復(fù) 制。

另外，對(duì)于具有高致病性的嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒（SARS-CoV）和中東呼吸綜合征冠狀病毒（MERS-CoV），雙硫侖對(duì)兩者的木瓜蛋白酶樣蛋白酶（PLpros）分別產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制和別構(gòu)抑制作用。除去未結(jié)合的雙硫侖后，病毒出現(xiàn)的緩慢結(jié)合抑制現(xiàn)象和酶活性的不可恢復(fù)性，表明雙硫侖很可能通過(guò)共價(jià)結(jié)合滅活了SARS-CoV PLpro，而雙硫侖和6-巰基鳥(niǎo)嘌呤或霉酚酸聯(lián)用對(duì)MERS-CoV PLpro顯示出的協(xié)同抑制作用則提示這3種臨床藥物聯(lián)合使用，可能具有治療冠狀病毒感染的潛在價(jià)值[39]。

3 結(jié)語(yǔ)

雙硫侖藥用歷史悠久，生物利用度高（80.0%），安全性良好。在當(dāng)今藥物研發(fā)領(lǐng)域，作為“老藥新用”策略中的一個(gè)代表，雙硫侖及部分代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出廣泛的藥理學(xué)活性，具有極高的藥用研究?jī)r(jià)值和發(fā)掘潛力。在抗感染治療研究領(lǐng)域，雙硫侖單用或與其他藥物聯(lián)用，在抑制耐藥金黃色葡萄球菌、Mtb生長(zhǎng)，殺滅多種真菌、寄生蟲(chóng)，抑制病毒轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、激化等方面展現(xiàn)出良好活性，為其作為抗感染藥物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供了可能。不過(guò)，與雙硫侖抗感染相關(guān)的許多作用機(jī)制仍不明確，因此還需基于更多藥理研究模型，提出合理科學(xué)假說(shuō)，深入探索其有效作用靶標(biāo)，并進(jìn)行可能的結(jié)構(gòu)改造，為其成為一類新型抗感染藥物提供依據(jù)。