黃龍艷 潘越博 王璽年 吳孝杰

摘 ?要：為了獲得豬精液最佳的保存效果，本試驗采用不同的稀釋液和保存溫度對豬精液的保存效果進行了研究。試驗結(jié)果：Ⅰ組稀釋液的稀釋保存效果最好，精子活力、有效存活時間、總存活時間及生存指數(shù)分別為0.75、98.5 h、129.8 h、75.9 h，除精子活力與其他組間差異不顯著（P>0.05）外，其他指標(biāo)差異極顯著（P<0.01）;Ⅰ組稀釋液在17 ℃條件下保存時，精子活力、存活時間和生存指數(shù)等指標(biāo)最高。

關(guān)鍵詞：豬精液稀釋液;精子活力;存活時間;生存指數(shù)

中圖分類號：R913+S859.1 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2020）07-0019-03

1 ?試驗材料

1.1 精液來源

試驗用長白種公豬15頭，18～24月齡，身體健康，性欲良好，生產(chǎn)成績優(yōu)秀，體質(zhì)健壯結(jié)實，遺傳性能穩(wěn)定，且無任何遺傳疾病。人工采集公豬精液，選擇精子活力在0.8以上，且氣味、色澤正常的精液稀釋保存。

1.2儀器設(shè)備

控溫冰箱、偉力精液分析儀、恒溫水浴箱、電子秤、燒杯、量筒、高壓消毒鍋、生化培養(yǎng)箱、干燥箱、雙蒸儀、磁力攪拌器和pH測定儀。

1.3 稀釋液配方

稀釋液配方見表1。

2 ?試驗方法

2.1 試驗用品的消毒

為了盡可能實現(xiàn)無菌操作，試驗所用的玻璃器械均用干燥箱進行干燥消毒，金屬器械用高壓鍋蒸汽消毒，新鮮雞蛋洗凈外殼后用75%酒精消毒。

2.2 稀釋液的配制

準(zhǔn)確稱量葡萄糖、碳酸氫鈉、二水檸檬酸鈉、氯化鈉、氨基乙酸、氨苯磺胺和EDTA并轉(zhuǎn)移至消毒過的量杯中，加100 mL雙蒸水?dāng)嚢柘♂?將稀釋液過濾、分裝到消毒過的玻璃瓶中，蓋好瓶塞并用紗布將其包裹后高壓蒸汽消毒10 min～15 min，將溶液冷卻至室溫，按比例加入新鮮卵黃、新鮮牛奶和抗生素并攪拌混勻，測定pH后密封保存。

2.3 精液處理及保存

首先，按國家標(biāo)準(zhǔn)采集精液，測定并記錄精液pH和精子活力;然后，將同一頭豬采集的合格精液分成4份，分別用4種稀釋液按1∶3進行稀釋;第三，將每種處理分成2份，快速測定其中一份的精子活力;第四，將精子活力最高的稀釋精液分成4份，分別置于15 ℃、16 ℃、17 ℃和18 ℃的環(huán)境中保存36 h;第五，測定精子活力、生存指數(shù)等指標(biāo)，記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

2.4 數(shù)據(jù)處理

首先統(tǒng)計15個樣本的預(yù)定測試指標(biāo)，并計算各指標(biāo)的平均值，然后利用Х2檢驗對數(shù)據(jù)進行獨立分析，最終確定組間的差異顯著性。

3 試驗結(jié)果

3.1 精液稀釋效果

如表2所示，4種稀釋液稀釋后精子的生存指數(shù)、總存活時間、有效存活時間和精子活力均以Ⅰ組稀釋液效果最好，分別為75.9 h、129.8 h、98.5 h和0.75;但稀釋后的生存指數(shù)、總存活時間、有效存活時間，Ⅰ組與Ⅱ組之間差異不顯著（P>0.05），與其他組間的差異極顯著（P<0.01）;精子活力四組間差異不顯著（P>0.05）。

3.2 稀釋精液保存溫度

為了測試稀釋精液的最佳保存溫度，對Ⅰ組稀釋液在不同溫度下精子的總存活時間、有效存活時間、生存指數(shù)和活力進行試驗。結(jié)果表明：稀釋精液于17 ℃恒溫環(huán)境中保存效果最佳，精子的生存指數(shù)、總存活時間、有效存活時間和活力分別為72.9 h、125.9 h、97.7 h和0.66（表3）。

3.3 抗生素的作用

試驗結(jié)果表明，在稀釋液中加入適量林肯霉素和慶大霉素可延長精子抗菌時間，提高抗菌效果，并且不易產(chǎn)生耐藥性。

4 結(jié)果分析

4.1 稀釋液成分全面，用量適宜

在所設(shè)計的稀釋液配方中，Ⅰ組稀釋液的常溫保存效果最好。因為該稀釋液含有精子所需要的營養(yǎng)物質(zhì)、緩沖物質(zhì)和抗生素等，所以Ⅰ組稀釋液適于精液保存，有助于提高精子活力。

4.2 Ⅰ組稀釋液保存效果比Ⅱ組好的原因

在稀釋液配方中，雖然Ⅱ組稀釋液中能量物質(zhì)葡萄糖的添加比Ⅰ組多，但緩沖物質(zhì)檸檬酸鈉和EDTA的添加量少，導(dǎo)致Ⅱ組稀釋液稀釋后的精子活力和存活時間等指標(biāo)降低，影響稀釋效果。

4.3 成分越單一，精液稀釋保存效果越差

雖然Ⅲ組稀釋液含有緩沖物質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)和抗生素，Ⅳ組稀釋液含有卵黃、牛奶和抗生素，但這兩種稀釋液不符合精液稀釋液組成要求，在生產(chǎn)中通常只適用于現(xiàn)配現(xiàn)用。

4.4 精子活力越高，精液稀釋保存效果越好

精子活力在0.8以上時稀釋保存效果較好，保存溫度為17 ℃時可以使精子的物質(zhì)能量需求與代謝處于動態(tài)平衡，酶的活性也很強，從而能維持精子活力，延長精液保存時間，提高母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。

值得一提的是，影響精液稀釋和保存的因素有很多，機理也非常復(fù)雜，一些細微因素和原理有待進一步研究探討。

作者簡介：黃龍艷（1972— ），女，助理獸醫(yī)師，從事畜禽良種繁育與研究工作;E-mail：1318925701@qq.com

通信作者：潘越博