曹 喻，周 婷，段曉雷，陳澤慧，楊 歡，閔 迅,

漫游球菌屬(Vagococcus)是一類獨(dú)特的革蘭氏陽(yáng)性菌，呈球形，與乳球菌類似，可與乳酸鏈球菌抗血清反應(yīng)，可感染多種動(dòng)物；同時(shí)也有少數(shù)菌株被報(bào)道能引起人類感染，在臨床標(biāo)本中可分離到。首株漫游球菌發(fā)現(xiàn)于1989年，由Collins等人發(fā)現(xiàn)并報(bào)道[1]，為河流漫游球菌(Vagococcusfluvialis)；隨后其他研究團(tuán)隊(duì)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了鮭魚漫游球菌(Vagococcussalmoninarum)[2-3]、水獺漫游球菌(Vagococcuslutrae)[4]、海豹漫游球菌(Vagococcusfessus)[5]和嗜肉漫游球菌(Vagococcuscarniphilus)[6]等。到目前，已發(fā)現(xiàn)的多種漫游球菌屬細(xì)菌中僅有河流漫游球菌和水獺漫游球菌報(bào)道與人類感染有關(guān)，主要可以在血液、腹膜液、傷口和牙根幾個(gè)地方分離到該細(xì)菌。1997年Teixeira等人[7]首次從人體組織中分離出河流漫游球菌；2008年Al-Ahmad A等人從根周病變的根部填充牙齒內(nèi)[8]發(fā)現(xiàn)了第一株口腔中的河流漫游球菌；2009年Schirrmeister JF等人也對(duì)口腔根周病變的根部填充牙齒內(nèi)的河流漫游球菌進(jìn)行了報(bào)道[9]。水獺漫游球菌最初分離于水獺等海洋生物，很少被報(bào)道為人類的病原體。Garcia V等人于2016年發(fā)現(xiàn)了首例人感染的水獺漫游球菌[10]。河流漫游球菌可引起人類和動(dòng)物感染，如傷口感染時(shí)會(huì)出現(xiàn)邊緣皮膚紅腫、患肢腫脹、周圍皮膚張力及皮溫高、壓痛及觸痛存在。臨床若不及時(shí)給與抗感染治療或治療不合理，可引發(fā)血流感染，重者可危及生命[10-11]。

近年來(lái)，基于質(zhì)譜平臺(tái)的蛋白質(zhì)組技術(shù)飛速發(fā)展，不同于蛋白質(zhì)組學(xué)在腫瘤等重大疾病的廣泛應(yīng)用，目前其在細(xì)菌研究中的應(yīng)用相對(duì)較少，具有較大的發(fā)展空間[12-14]。用蛋白質(zhì)組學(xué)揭示細(xì)菌的特異蛋白質(zhì)表達(dá)，由表達(dá)引出內(nèi)在蛋白質(zhì)之間的差異是近幾年來(lái)相關(guān)研究的一個(gè)重點(diǎn)，但是至今尚無(wú)關(guān)于漫游球菌屬微生物特異表征的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的任何報(bào)道。最近的研究工作中，團(tuán)隊(duì)成員在一骨科臨床患者左股骨中下段創(chuàng)口術(shù)后感染穿刺液中分離得到一株革蘭陽(yáng)性球菌，經(jīng)鑒定為河流漫游球菌；在此部位發(fā)現(xiàn)河流漫游球菌在世界范圍內(nèi)尚屬首次[15]。本研究利用高精度無(wú)標(biāo)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)該臨床發(fā)現(xiàn)的河流漫游球菌進(jìn)行蛋白質(zhì)組組分的全面鑒定；采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)河流漫游球菌表達(dá)蛋白的生物學(xué)功能開展探討，以為臨床河流漫游球菌的診斷與治療提供新的蛋白質(zhì)組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1菌株樣本分離和培養(yǎng) 菌株樣本分離自遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院骨一科病房住院的女性患者，為術(shù)后感染菌。取患處穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)，以分區(qū)劃線的方式接種于麥康凱平皿和哥倫比亞血平皿中，放置于溫度為35 ℃、二氧化碳濃度為5%的孵箱中培養(yǎng)24～48 h，觀察并記錄菌落形態(tài)。此株細(xì)菌在哥倫比亞血平板上生長(zhǎng)，涂片經(jīng)革蘭染色后通過(guò)油鏡觀察其形態(tài)，判斷為革蘭陽(yáng)性的球菌；隨后經(jīng)過(guò)一系列生化試驗(yàn)，以及質(zhì)譜和16S rRNA分析，最終鑒定該菌株為河流漫游球菌[15]。

1.2主要試劑和儀器 實(shí)驗(yàn)中使用的主要儀器包括：顯微鏡(Olympus，型號(hào)：CX41)，全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)(Bio Mérieux，型號(hào)：VIYTEK- 2Compact)，全自動(dòng)快速微生物質(zhì)譜監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(Bio Mérieux，型號(hào)：VITEK MS)，測(cè)序儀(ABI，型號(hào)：3730xl)，電泳系統(tǒng)(Bio-Rad)，渦旋振蕩器(其林貝爾儀器，型號(hào)：QL-901)，離心機(jī)(賽默飛世爾科技，型號(hào)：PICO17)，恒溫孵育器(浦東榮豐科學(xué)儀器，型號(hào)：HH.S4)，酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技，型號(hào)：Multiskan MK3)，高效液相色譜儀：(賽默飛世爾科技，型號(hào)：EASY-nLC 1000 System)，質(zhì)譜系統(tǒng)(賽默飛世爾科技，型號(hào)：Orbitrap Fusion)。

主要試劑包括：陽(yáng)性球菌鑒定卡板(Bio Mérieux)，CHCA基質(zhì)液(Bio Mérieux)，快速革蘭氏染色液(珠海貝索)，哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基(鄭州貝瑞特生物)，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(鄭州貝瑞特生物)，Mueller-Hinton瓊脂培養(yǎng)基(鄭州貝瑞特生物)，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(上海歐孚生物醫(yī)藥科技)，通用型16SrDNA PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(北京派拓科技)，抗菌藥物紙片(塞默飛世爾科技)，尿素(Bio-Rad)，硫脲(Sigma-Aldrich)，CHAPS(Bio-Rad)，蛋白定量染液(Thermo Scientific)，牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich)，DTT(10 mmol/L IAA in H2O)，IAA(50 mmol/L IAA in H2O)，Trypsin buffer(4 μL Trypsin in 40 μL NH4HCO3)，胰蛋白酶(AB Sciex)，乙腈(Thermo Scientific)，F(xiàn)A(Sigma)。

1.3蛋白提取和定量 蛋白裂解液(7 mol/L尿素，2 mol/L硫脲)加入菌株樣本中，隨后進(jìn)行渦旋混勻；超聲60 s(0.2 s on、2 s off，振幅22%)；在室溫條件下進(jìn)行蛋白質(zhì)提取(30 min)；4 ℃條件下15 000 r/min離心20 min，取上清分裝后于-80 ℃冰箱保存待用。實(shí)驗(yàn)樣本提取的蛋白質(zhì)采用Bradford方法[16]完成定量：首先使用裂解液將樣本蛋白混合物進(jìn)行一定比例稀釋，使待測(cè)樣本濃度處于標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)；然后，將稀釋好的樣本蛋白混合物和標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)蛋白品由BSA和不同比例裂解液溶解制成)各取10 μL，分別和蛋白定量染料避光進(jìn)行反應(yīng)(300 μL，20 min)；最后，使用酶標(biāo)儀分別測(cè)定樣本蛋白和標(biāo)準(zhǔn)品蛋白在595 nm下的吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品吸光值和濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系計(jì)算樣本蛋白濃度。

1.4蛋白質(zhì)酶解 蛋白質(zhì)定量后取60 μg蛋白溶液置于離心管中；按照溶液總體積加入1 mol/L DTT溶液5 μL，渦旋混勻，放入水浴鍋中37 ℃保溫1 h，取出放至室溫。還原后的樣品加入1mol/L IAA溶液20 μL，渦旋混勻，室溫條件下避光放置1 h；吸取所有樣品加入超濾管中，12 000 r/min離心10 min后棄收集管底部溶液；加入100 μL UA(8M urea，100 mmol/L Tris-HCl，pH8.0)至超濾管中，離心后棄收集液，重復(fù)2次；加入50 mmol/L NH4HCO3100 μL，離心后棄收集液，重復(fù)3次；更新收集管，在超濾管中加入胰蛋白酶，按照蛋白和酶50∶1的比例加入Trypsin，37 ℃酶解12～16 h。

1.5質(zhì)譜分析 采用納升級(jí)反相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)對(duì)胰蛋白酶酶解后肽段進(jìn)行無(wú)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組檢測(cè)。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)(LC-MS/MS)由納升級(jí)高效液相色譜儀(HPLC，賽默飛EASY-nLC 1000)和Orbitrap Fusion質(zhì)譜儀(塞默飛世爾科技)組成。肽段混合物首先采用high-pH反向色譜(Hp-RP)進(jìn)行分離，然后用20 μL 2%甲醇，0.1%甲酸進(jìn)行復(fù)溶；12 000 g離心10 min，吸取上清10 μL進(jìn)行上樣。使用120 min線性梯度填充液相色譜柱，Orbitrap Fusion質(zhì)譜系統(tǒng)以數(shù)據(jù)依賴模式運(yùn)行(Data-dependent mode)，選擇每次一級(jí)質(zhì)譜(MS)掃描的前20個(gè)最強(qiáng)峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜(MS/MS)分析。一級(jí)質(zhì)譜母離子掃描范圍為：350～1 800 m/z，分辨率為：70 000 FWHM，AGC目標(biāo)值為：3×106，一級(jí)Maximum IT(maximum injection time)為：60 ms。二級(jí)質(zhì)譜分辨率為：17 500 FWHM，AGC目標(biāo)值為：5×106，二級(jí)Maximum IT為：70 ms；碰撞能量為：HCD 29%。

1.6質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定及生物信息學(xué)分析 質(zhì)譜儀器產(chǎn)出的原始數(shù)據(jù)采用軟件MaxQuant[17-18](軟件版本：1.6.5.0)進(jìn)行搜庫(kù)鑒定及定量分析。從UniProt[19](https://www.uniprot.org/)中下載的漫游球菌屬(Vagococcus)蛋白質(zhì)序列作為搜索數(shù)據(jù)庫(kù)。主要數(shù)據(jù)庫(kù)搜索參數(shù)設(shè)置如下：母離子及碎片離子質(zhì)量誤差分別為±(15×10-6)和± 20 mmu；半胱氨酸(Cysteine，C)還原烷基化(Carbamidomethylation，+57.02 Da)為固定修飾；蛋氨酸(Methionine，M)氧化(Oxidation，+15.99 Da)和蛋白質(zhì)N端乙酰化(Acetyl，Protein N-term)為可變修飾；胰酶酶切且最多允許兩個(gè)漏切位點(diǎn)。要求肽段和蛋白水平的假陽(yáng)性率均低于1%，采用MaxQuant軟件中絕對(duì)定量算法iBAQ[20]進(jìn)行鑒定蛋白質(zhì)豐度計(jì)算。

1.7生物信息學(xué)分析 基于UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中蛋白質(zhì)功能注釋，對(duì)質(zhì)譜鑒定得到的河流漫游球菌蛋白質(zhì)進(jìn)行Gene Ontology (GO)[21]功能注釋和KEGG通路[22]注釋，其中GO功能注釋主要包括生物學(xué)過(guò)程(biological process，BP)，分子功能(molecular function，MF)以及細(xì)胞組分(cellular component，CC)3大類別；進(jìn)一步采用過(guò)表達(dá)分析方法進(jìn)行功能富集分析，基于超幾何分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，計(jì)算出鑒定蛋白質(zhì)在特定GO功能類別或KEGG通路上顯著富集程度的P值，以及基于多重假設(shè)檢驗(yàn)的FDR校正值，并基于-log(Pvalue)計(jì)算獲得富集度。

2 結(jié) 果

2.1蛋白質(zhì)組質(zhì)譜數(shù)據(jù)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)探索及選擇 為了獲得最優(yōu)的蛋白質(zhì)鑒定，我們對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)搜索的漫游球菌屬蛋白質(zhì)組序列庫(kù)進(jìn)行探索。首先，下載UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中漫游球菌屬(Vagococcus)中17個(gè)物種共31 361條蛋白質(zhì)序列，包括：Vagococcusfluvialis(2 890條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcuscarniphilus(2 909條蛋白質(zhì)序列)，VagococcusfluvialisbH819(2 822條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcussp.SS1994(2 356條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcusmartis(2 263條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcussp.AM17-17(2 134條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcuspenaei(2 065條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcusteuberi(1 936條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcussp.SS1995(2 196條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcusacidifermentans(2 679條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcussalmoninarum(2 867條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcusfessus(2 113條蛋白質(zhì)序列)，VagococcuslutraeLBD1(1 736條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcusentomophilus(2 260條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcuslutrae(1 834條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcuselongatus(2 623條蛋白質(zhì)序列)，Vagococcushumatus(1 966條蛋白質(zhì)序列)。將上述漫游球菌屬17個(gè)物種的蛋白質(zhì)序列混合進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)搜索，并查看鑒定肽段序列在各個(gè)子物種序列庫(kù)中的匹配情況。如圖1所示，藍(lán)色代表多個(gè)子物種庫(kù)共同鑒定的肽段序列數(shù)目，紅色代表各個(gè)子庫(kù)獨(dú)有鑒定的肽段序列數(shù)目；兩個(gè)數(shù)字分別代表獨(dú)有鑒定的肽段序列數(shù)目和總鑒定肽段數(shù)；采用河流漫游菌蛋白質(zhì)序列庫(kù)(Vagococcusfluvialis，2 890條蛋白質(zhì)序列)，不僅可以鑒定得到最多的總肽段數(shù)(9 818條肽段)，并且可以鑒定到大量其他子物種數(shù)據(jù)庫(kù)未包含的序列(5 790條肽段)；該結(jié)果首先從蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)的水平進(jìn)一步佐證了前期菌種鑒定的準(zhǔn)確性，同時(shí)也提示我們可以只采用河流漫游菌(Vagococcusfluvialis)蛋白質(zhì)序列庫(kù)的鑒定結(jié)果進(jìn)行后續(xù)功能注釋分析。

圖1 鑒定肽段序列在漫游球菌屬各個(gè)子物種序列庫(kù)中匹配的分布Fig.1 Distribution of the identified peptide sequences in 17 different sub-species of Vagococcus

2.2河流漫游球菌蛋白質(zhì)組表達(dá)譜 本研究對(duì)河流漫游菌樣本進(jìn)行了3次質(zhì)譜技術(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，共鑒定得到1 372個(gè)蛋白質(zhì)，為目前已知河流漫游球菌最全面的蛋白質(zhì)組組分表達(dá)譜(詳細(xì)列表見(jiàn)附錄表1)；如圖2A所示，3次質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)分別鑒定到1 344(Rep1)、1 335(Rep2)和1 337(Rep3)個(gè)蛋白質(zhì)，并且，3次技術(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)鑒定蛋白質(zhì)重疊率極高，同時(shí)鑒定和定量的蛋白質(zhì)達(dá)到1 301(為總數(shù)的94.83%)，說(shuō)明了質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

圖2 河流漫游菌蛋白質(zhì)組表達(dá)譜數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)信息展示Fig.2 Statistics information of Vagococcus fluvialis proteome profile dataset

基于MaxQuant軟件鑒定結(jié)果中的絕對(duì)定量值iBAQ，對(duì)所有鑒定蛋白質(zhì)的3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)豐度計(jì)算平均值，進(jìn)一步基于平均iBAQ定量值對(duì)所有鑒定蛋白質(zhì)豐度進(jìn)行排序，蛋白質(zhì)平均豐度的分布如圖2B所示，跨越了5個(gè)數(shù)量級(jí)(104～109)；豐度排名前10的蛋白質(zhì)組成如表1所示，主要為酶和核糖體蛋白，包括甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)、烯醇化酶(Enolase)、磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase)，50S核糖體蛋白L4、L24和L19(50S ribosomal protein L4, L24, L19)，以及30S核糖體蛋白S5、S9和S10(30S ribosomal protein S5, S9, S10)。

表1 平均豐度前10位蛋白質(zhì)鑒定信息列表Tab.1 Detail information of the proteins identified with top ten intensities

2.3河流漫游球菌蛋白質(zhì)功能注釋分析 基于UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中的注釋，對(duì)蛋白質(zhì)組質(zhì)譜數(shù)據(jù)鑒定到的河流漫游菌的1 372個(gè)蛋白質(zhì)分別進(jìn)行生物學(xué)過(guò)程(Biological process)、分子功能(Molecular Function)和細(xì)胞組分(Cellular Component)注釋和富集分析。如圖3所示，河流漫游菌表達(dá)的蛋白主要參與的生物學(xué)過(guò)程包括：轉(zhuǎn)錄調(diào)控、碳水化合物代謝、細(xì)胞分裂、細(xì)胞周期、DNA復(fù)制和修復(fù)、細(xì)胞形態(tài)調(diào)節(jié)、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)、磷脂酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等；主要的分子功能包括：ATP結(jié)合、DNA結(jié)合、金屬離子結(jié)合(包括鋅離子、鎂離子結(jié)合)、ATP酶活性、rRNA和RNA結(jié)合、核糖體的結(jié)構(gòu)成分、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性等分子功能；蛋白質(zhì)的細(xì)胞組分組成主要包括：細(xì)胞質(zhì)、染色體、核糖體、核糖體亞基、質(zhì)膜和其他膜組分等。

圖3 河流漫游菌蛋白質(zhì)GO功能注釋分布圖Fig.3 GO annotation distributions of proteins identified in Vagococcus fluvialis

2.4河流漫游球菌蛋白質(zhì)通路富集分析 同樣基于UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)中的注釋，對(duì)河流漫游菌鑒定的蛋白質(zhì)進(jìn)行KEGG富集通路分析。如圖4所示，河流漫游菌表達(dá)的蛋白主要參與生物合成和代謝兩大類通路，以及核糖體、細(xì)菌分泌系統(tǒng)等相關(guān)通路。生物合成相關(guān)通路主要包括：氨基酸的生物合成、氨酰tRNA生物合成、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，抗生素的生物合成、次生代謝產(chǎn)物的生物合成、脂肪酸生物合成、賴氨酸生物合成等；代謝相關(guān)通路主要包括：甘油酯代謝、嘧啶代謝、脂肪酸代謝、丙酸鹽代謝、甘油磷脂代謝、煙酸和煙酰胺代謝等。

圖4 河流漫游菌蛋白質(zhì)通路富集分布圖Fig.4 Pathways enrichment diagram of proteins identified in Vagococcus fluvialis

3 討 論

國(guó)內(nèi)外對(duì)河流漫游球菌屬引起人感染的相關(guān)報(bào)道較少，我們基于臨床骨科患者左股骨中下段深部組織穿刺液分離獲得并鑒定一株河流漫游球菌，在此部位發(fā)現(xiàn)在世界范圍內(nèi)尚屬首次[15]。進(jìn)一步結(jié)合無(wú)標(biāo)定量蛋白質(zhì)組技術(shù)，構(gòu)建了目前河流漫游球菌最全面的蛋白質(zhì)組組分表達(dá)譜，共定性和定量鑒定了1 372個(gè)蛋白質(zhì)。通過(guò)GO功能注釋和KEGG通路富集分析，發(fā)現(xiàn)河流漫游球菌大部分蛋白質(zhì)主要參與維持細(xì)菌生存的轉(zhuǎn)錄翻譯、代謝以及物質(zhì)的生物合成等生物過(guò)程。

通過(guò)質(zhì)譜鑒定到河流漫游球菌表達(dá)蛋白質(zhì)中豐度最高的主要為酶和核糖體蛋白，核糖體蛋白主要參與轉(zhuǎn)運(yùn)生物學(xué)過(guò)程，而酶主要參與葡萄糖代謝過(guò)程和糖酵解過(guò)程。糖酵解過(guò)程(Glycolytic process)是生物代謝的重要部分，是細(xì)菌分解葡萄糖的幾種途徑之一，通常與細(xì)菌的厭氧或者發(fā)酵代謝相關(guān)，是細(xì)菌獲得自身生長(zhǎng)、代謝所需能量的重要方式。最近有研究發(fā)現(xiàn)參與糖酵解過(guò)程的很多酶類定位于鏈球菌或其它細(xì)菌表面并且與細(xì)菌毒力相關(guān)，如豬鏈球菌表面的α-烯醇化酶能夠結(jié)合并活化人的血纖溶酶原，有助于細(xì)菌在感染宿主過(guò)程中穿越組織屏障,進(jìn)而在宿主體內(nèi)擴(kuò)散[23]；α-烯醇化酶還可以作為革蘭氏陽(yáng)性病原體的毒力因子，如金黃色葡萄球菌和鏈球菌[24]；以及作為纖溶酶原和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白、層黏連蛋白來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)菌黏附和侵襲作用[25]。而磷酸甘油酸激酶存在于肺炎鏈球菌及無(wú)乳鏈球菌表面，能與宿主纖維蛋白溶酶原結(jié)合，在細(xì)菌黏附中發(fā)揮重要作[26-27]。

本研究產(chǎn)出的流漫游球菌蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)集中鑒定到糖酵解過(guò)程中多個(gè)關(guān)鍵酶，包括烯醇化酶(Enolase)和磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase)，以及果糖1,6-二磷酸醛縮酶(Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，F(xiàn)DA)、三聚磷酸異構(gòu)酶(Triosephosphate isomerase)、葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(Glucose-6-phosphate isomerase)、2,3-雙磷酸甘油酸依賴性磷酸甘油酸變位酶(2,3-bisphosphoglycerate-dependent phosphoglycerate mutase)乳酸脫氫酶(L-lactate dehydrogenase)、葡萄糖激酶(Glucokinase)和蘋果酸脫氫酶(Malate dehydrogenase，NAD)。雖然目前河流漫游球菌致病極為罕見(jiàn)，但有研究報(bào)道如果臨床不及時(shí)給與抗感染治療或治療不合理，可引發(fā)血流感染，重者可危及生命[10]；國(guó)內(nèi)至今尚無(wú)任何河流漫游球菌感染及致病機(jī)理方面研究，本研究首次通過(guò)蛋白質(zhì)組技術(shù)鑒定到河流漫游球菌表達(dá)了大量已知革蘭氏陽(yáng)性菌(如金黃色葡萄球菌)致病及毒力因子相關(guān)的蛋白質(zhì)，其中，烯醇化酶和磷酸甘油酸激酶表達(dá)豐度極高，在所有鑒定蛋白質(zhì)中排名第4和第6，這提示我們以后的研究工作可以從糖酵解生物學(xué)過(guò)程入手，特別關(guān)注烯醇化酶和磷酸甘油酸激酶這兩個(gè)酶，進(jìn)一步闡釋河流漫游球菌的致病機(jī)制。

利益沖突：無(wú)