高天歌 馬翠敏 王鎖民

摘要 液泡是細(xì)胞內(nèi)一種可以儲(chǔ)存多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及代謝產(chǎn)物的細(xì)胞器。為了抵御高鹽、干旱和重金屬毒害等非生物脅迫，植物可以通過將細(xì)胞質(zhì)中過量積累的Na+、K+、Ca2+和其他金屬陽(yáng)離子區(qū)域化至液泡中，以此來維持正常的細(xì)胞膨壓并提高植物的抗逆性。液泡膜陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白種類豐富，能夠調(diào)控細(xì)胞中不同無機(jī)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)和區(qū)域化。鑒于此，對(duì)定位于液泡膜的不同陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在植物響應(yīng)逆境脅迫中的作用進(jìn)行了簡(jiǎn)要概述。

關(guān)鍵詞 液泡膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白;陽(yáng)離子;抗逆性;功能

中圖分類號(hào) Q945 ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A ?文章編號(hào) 0517-6611（2020）21-0001-05

Abstract Vacuole is a kind of organelles that can store a variety of nutrients and metabolites in cells.In order to resist the harsh environments such as salinization， drought and heavy metal pollution， plants can change the turgor and improve its stress resistance by compartmentalizing the excess ions， such as Na+， K+， Ca2+ and other metal cations， in the cytoplasm into vacuoles.There are many tonoplastcation transporters regulated the transport and compartmentalization of different ions.In view of this， we mainly summarized the roles of different tonoplast cation transporters in plants responding to stresses in this review.

Key words Tonoplast transporters;Cation;Stress tolerance;Function

逆境脅迫是對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育造成不利影響的各種環(huán)境因素的總稱，可分為生物脅迫和非生物脅迫[1]。其中，非生物脅迫是限制農(nóng)作物產(chǎn)量和野生植物物種分布的主要因素，包括干旱、土壤鹽漬化、低溫、高溫以及重金屬毒害等[2]。在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中，植物形成了各種響應(yīng)機(jī)制來抵御非生物脅迫，其中一種有效的應(yīng)對(duì)策略是植物細(xì)胞通過將細(xì)胞質(zhì)中過量的離子區(qū)域化至液泡中來維持其正常的膨壓，從而提高植物的抗逆性[3-4]。在此過程中，定位于液泡膜上的負(fù)責(zé)調(diào)控胞內(nèi)物質(zhì)特異性識(shí)別和運(yùn)輸?shù)霓D(zhuǎn)運(yùn)蛋白發(fā)揮了重要的作用[5-6]。根據(jù)結(jié)構(gòu)與作用機(jī)制的不同，大致將其分為3類：質(zhì)子泵、通道蛋白以及共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[7]。近年來，有關(guān)定位于液泡膜的各類陽(yáng)離子共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的研究受到了眾多學(xué)者的廣泛關(guān)注，且研究多集中于調(diào)控Na+、K+區(qū)域化的液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（tonoplast Na+/H+antiporter，NHX）、調(diào)控Ca2+區(qū)域化的液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Ca2+/H+ exchanger，CAX）以及部分負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)Cd2+、Zn2+、Mn2+和Fe2+等金屬陽(yáng)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。鑒于此，筆者重點(diǎn)對(duì)上述幾類液泡膜陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)構(gòu)及其在植物抗逆過程中的作用進(jìn)行概述，以期為進(jìn)一步研究植物的抗逆機(jī)理以及提高農(nóng)作物和優(yōu)良牧草的抗逆性提供借鑒。

1 植物液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（NHX）

鈉（Na）是地殼中含量排名第六的元素，約占其總量的2.8%，同時(shí)也是海水中含量?jī)H次于氯（Cl）的第二大元素[8]。Na在植物的生命活動(dòng)過程中起到了重要作用，作為一種有益元素，其主要以Na+形式被吸收[9]。對(duì)于大多數(shù)植物而言，低濃度的Na+可以促進(jìn)其生長(zhǎng)，減輕植物由于營(yíng)養(yǎng)不良而產(chǎn)生的癥狀，甚至適量的Na+還可以改善作物的品質(zhì)與口感[10-11]。然而，在高鹽條件下，土壤中過量的Na+則會(huì)導(dǎo)致大多數(shù)陸生植物的生命活動(dòng)受到抑制，表現(xiàn)出中度甚至重度的Na+毒害癥狀[12]。而NHX作為一種重要的耐鹽決定因子，可以介導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)中過多的Na+、K+區(qū)域化至液泡作為廉價(jià)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，同時(shí)減少過量的Na+對(duì)細(xì)胞質(zhì)中的代謝活動(dòng)產(chǎn)生毒害作用[13]，從而在調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透勢(shì)與維持膨壓，促進(jìn)植株吸水以及提高植物耐鹽、抗旱性等方面發(fā)揮十分重要的作用[14]。

1.1 NHX的結(jié)構(gòu)

在高等植物中，最早是在紅甜菜（Beta vulgaris）貯藏組織的液泡膜上檢測(cè)到了Na+/H+轉(zhuǎn)運(yùn)活性[15]。之后，Gaxiola等[16]首次從擬南芥（Arabidopsis thaliana）中克隆出了液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因AtNHX1。自此，人們對(duì)于高等植物NHXs的研究也逐漸展開。目前，研究者分別從小麥（Triticum aestivum）、玉米（Zea mays）、冰葉日中花（Mesembryanthemum crystallinum）、鹽地堿蓬（Suaeda salsa）和霸王（Zygophyllum xanthoxylum）等植物中克隆得到NHX基因[17-21]。

研究表明，NHX是一種分子量為35 000～70 000 kDa的蛋白，一般其C末端由300多個(gè)氨基酸組成，且含有多個(gè)蛋白激酶作用位點(diǎn)，而N端則是由550多個(gè)氨基酸構(gòu)成的10～12個(gè)跨膜區(qū)域（transmembrane domain，TM）[22]。通過分析AtNHX1的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)，研究者發(fā)現(xiàn)AtNHX1共包含有12個(gè)跨膜域以及1個(gè)具有親水性的C末端，且基本上都位于液泡腔中;而N末端則朝向胞質(zhì)，同時(shí)在其第3個(gè)跨膜域上包含一個(gè)高度保守的氨氯吡嗪脒（amiloride）結(jié)合位點(diǎn)[23]。根據(jù)序列類型，NHX可分為兩類，即Class-I NHX與Class-Ⅱ NHX;Class-Ⅱ NHX是在裸子、被子和苔蘚植物中發(fā)現(xiàn)的，經(jīng)證實(shí)其位于核內(nèi)體上;而Class-I NHX則普遍存在于陸生植物的液泡膜上并具有特定的功能，擬南芥AtNHX1-AtNHX4就屬于該亞型[24]。

1.2 NHX在植物抗逆過程中的作用

與野生型相比，過表達(dá)擬南芥AtNHX1的轉(zhuǎn)基因番茄（Solanum lycopersicum）[25]和轉(zhuǎn)基因油菜（Brassica napus）[26]的生長(zhǎng)均未受到200 mmol/L NaCl處理的明顯抑制。Zeng等[27]研究顯示在水稻中過表達(dá)菊芋（Helianthus tuberosus）HtNHX1和HtNHX2能夠提高轉(zhuǎn)基因植株的抗鹽能力。在鹽處理下，與野生型相比，共表達(dá)霸王ZxNHX和ZxVP1-1（液泡膜H+-焦磷酸酶編碼基因）的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿（Medicago sativa）能夠在葉片中積累更多的Na+、K+和Ca2+，以此來緩解鹽脅迫對(duì)植物產(chǎn)生的不利影響[28]。以上研究表明，NHX1在植物響應(yīng)鹽脅迫的過程中起到了不可替代的作用，過表達(dá)NHX1可以在一定程度上提高植物的耐鹽性[28-30]。除NHX1外，定位于液泡膜上的NHX2在植物抗逆過程中也發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。在200 mmol/L NaCl的鹽脅迫下，過表達(dá)小麥TaNHX2的轉(zhuǎn)基因茄子（Solanum melongena）葉片的生長(zhǎng)明顯優(yōu)于野生型，且其Na+、K+含量均較野生型顯著增加，表明TaNHX2在轉(zhuǎn)基因茄子耐鹽性的響應(yīng)過程中起著重要的調(diào)控作用，因此TaNHX2也可以作為改善作物耐鹽性的候選基因之一[30]。杜梨（Pyrusbetulaefolia）PbrNHX2的表達(dá)水平受鹽脅迫和脫水的誘導(dǎo)，但不受冷害的影響;在煙草（Nicotiana tabacum）中過表達(dá)PbrNHX2，發(fā)現(xiàn)其可通過調(diào)節(jié)活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平來增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因煙草抵御鹽脅迫的能力[31]。此外，在正常條件下，定位于液泡膜的NHX3和NHX4對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的影響雖然較NHX1和NHX2小，但是二者在離子轉(zhuǎn)運(yùn)方面仍具有自身的獨(dú)特性，如AtNHX4對(duì)Na+、K+都具有轉(zhuǎn)運(yùn)能力且更偏向于轉(zhuǎn)運(yùn)K+，而AtNHX3則只轉(zhuǎn)運(yùn)Na+、不參與轉(zhuǎn)運(yùn)K+[32]。

除鹽脅迫外，干旱也是嚴(yán)重影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的非生物脅迫之一[33]。霸王主要分布于我國(guó)西北荒漠地區(qū)，具有超強(qiáng)的抗旱性[34]。在干旱脅迫下，ZxNHX能夠?qū)⒓?xì)胞質(zhì)中的Na+區(qū)域化至液泡，以降低細(xì)胞滲透勢(shì)，從而使植物適應(yīng)干旱環(huán)境[20]。研究表明，干旱處理下，共轉(zhuǎn)化ZxNHX和ZxVP1-1的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的株高、根長(zhǎng)和干重分別較野生型顯著增加28.7%、67.7%和47.5%，且其葉片中的Na+、K+和Ca2+含量分別較野生型上升130.8%、81.7%和100.0%，表明共轉(zhuǎn)化ZxNHX和ZxVP1-1可以顯著提高植物的抗旱性[35]。在甜菜中過表達(dá)ZxNHX和ZxVP1-1可以使轉(zhuǎn)基因植株地上部的Na+含量增加1.2～1.5倍，貯藏根中的蔗糖含量增加6%～16%，從而增加轉(zhuǎn)基因甜菜對(duì)干旱的抵御能力[36]。除霸王外，有研究表明，在大麥（Hordeum vulgare）中過表達(dá)鹽生草（Halogeton glomeratus）HgNHX1，不僅可以顯著提高轉(zhuǎn)基因大麥的耐鹽性，還可以使其維持較高的水分代謝能力，具有更強(qiáng)的抗旱性[37]。

2 植物液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CAX）

鈣（Ca）是維持植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的大量元素之一，在植物生命進(jìn)程中具有不可或缺的作用[38]。Ca2+不僅是細(xì)胞結(jié)構(gòu)的組成成分和多種酶的輔助因子，而且還是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使[39]。Ca2+可參與調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育，在其抗病和適應(yīng)逆境的過程中具有重要作用，不僅如此，Ca2+還可以與鈣調(diào)素（calmodulin，CaM）結(jié)合形成活化的Ca2+-CaM復(fù)合體，參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[40-42]。植物體內(nèi)的Ca2+通常處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，Ca2+缺乏會(huì)導(dǎo)致葉片壞死，甚至引起植株的死亡;而Ca2+濃度過高則會(huì)造成離子毒害[43]。植物能夠通過Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)調(diào)節(jié)其體內(nèi)Ca2+的穩(wěn)態(tài)平衡，其中液泡膜Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CAX）能夠?qū)|(zhì)中的Ca2+區(qū)域化至液泡內(nèi)，從而對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度起到調(diào)控作用[44]。

2.1 CAX的結(jié)構(gòu)

CAX是由11個(gè)跨膜域組成的跨膜蛋白，其N末端位于胞質(zhì)內(nèi)，C末端則位于液泡中，并且N末端的親水性區(qū)域可能會(huì)與激酶等信號(hào)蛋白相互作用以調(diào)節(jié)CAX發(fā)揮功能[44-45]。CAX的11個(gè)跨膜域可分為TM1、TM2-6和TM7-11共3個(gè)部分，其中TM1與陽(yáng)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)[46]。CAX具有4個(gè)功能域，分別為參與調(diào)控Ca2+/H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)活性的N-末端自抑制區(qū)域（N-terminal regulatory region，NRR）[47-49]、決定Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)能力的Ca功能域（Ca2+ domain，CaD）[50]、與Mn2+的專一性相關(guān)的C功能域[51]、與細(xì)胞質(zhì)pH調(diào)節(jié)相關(guān)的D功能域[52]。研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥AtCAX1～AtCAX4均定位于細(xì)胞的液泡膜上[39]。

2.2 CAX在植物抗逆過程中的作用

許多研究表明，CAX在植物抵御非生物脅迫特別是鹽脅迫的過程中發(fā)揮了重要的作用，CAX活性的改變會(huì)影響植物中由鹽脅迫誘導(dǎo)的Ca2+信號(hào)的變化，進(jìn)而影響植物對(duì)鹽脅迫的耐受能力[53]。鹽脅迫對(duì)CAX3的表達(dá)具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)作用，但對(duì)CAX1表達(dá)的誘導(dǎo)則很微弱[39]。Zhao等[54]將擬南芥cax1和cax3單突株系以及cax1/cax3雙突株系分別在含有50和100 mmol/L NaCl的介質(zhì)中進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)cax3和cax1/cax3對(duì)鹽具有較強(qiáng)的敏感性，而cax1則對(duì)鹽的敏感性不明顯;進(jìn)一步的生化分析顯示，cax3對(duì)鹽的敏感性與鹽脅迫下液泡膜Ca2+/H+轉(zhuǎn)運(yùn)活性以及質(zhì)膜H+-ATPase活性密切相關(guān)，表明CAX3在植物響應(yīng)鹽脅迫的過程中發(fā)揮了重要的作用。此外，AtCAX1和AtCAX3可以協(xié)同發(fā)揮作用，二者的共表達(dá)能夠顯著提高Ca2+敏感型酵母K667的耐鹽性[55]。除了AtCAXs，鹽地堿蓬等其他植物的CAXs對(duì)于抵御鹽脅迫也具有一定的作用，例如在擬南芥中超表達(dá)鹽地堿蓬SsCAX1同樣能夠增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因植株對(duì)鹽脅迫的耐受性[56]。此外，擬南芥AtCAX2、AtCAX4以及一些其他植物的CAXs還能參與調(diào)控除Ca2+外的其他金屬陽(yáng)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)。

CAX在植物響應(yīng)冷脅迫的過程中也發(fā)揮了重要的作用。cax1-1、cax1-2、cax1-3和cax1-4分別是4個(gè)AtCAX1的T-DNA插入突變株系，其中cax1-3和cax1-4在經(jīng)過低溫馴化后，其在不同低溫處理下的存活率均顯著高于野生型，表明AtCAX1能夠參與調(diào)控?cái)M南芥對(duì)低溫的響應(yīng)[57]。

3 其他陽(yáng)離子液泡膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

錳（Mn）、鋅（Zn）、鐵（Fe）是植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的3種微量元素，然而當(dāng)細(xì)胞內(nèi)這些金屬離子的含量超過一定范圍后也會(huì)對(duì)植物造成不可避免的傷害[58]。另外，鎘（Cd）作為最常見的重金屬之一，具有易被植物吸收的特點(diǎn)，并且過高濃度的Cd2+會(huì)對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育造成損傷[59]。有研究表明，液泡膜上存在多種能夠參與金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)和區(qū)域化的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，均可以起到緩解上述金屬離子毒害以及維持植物生長(zhǎng)發(fā)育的作用[60]，主要包括CAX家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、陽(yáng)離子擴(kuò)散輔助蛋白（cation diffusion facilitator，CDF）、自然抵抗相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白（natural resistance-associated macrophage protein，NRAMP）以及植物鋅鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（zinc-regulated transporters，iron regulated transporter-like proteins，ZIP）等[61-62]。

3.1 轉(zhuǎn)運(yùn)其他金屬離子的CAX

CAX不僅在植物Ca2+的轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮重要作用，而且對(duì)植物抵御Cd2+、Zn2+、Mn2+、Ni2+和Ba2+等金屬離子毒害來說也是必不可少的。Shigaki等[52]研究發(fā)現(xiàn)擬南芥CAX1的一種突變體CAXcd，其可以將Cd2+區(qū)域化在酵母液泡內(nèi)。Wu等[63]將CAXcd在矮牽牛（Petunia hybrida）中進(jìn)行超表達(dá)，在50和100 μmol/L CdCl2處理36 d后，表達(dá)CAXcd的矮牽牛植株的長(zhǎng)勢(shì)明顯好于野生型，且其能夠在體內(nèi)積累更多的Cd2+;同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)過表達(dá)CAXcd的矮牽牛植株從開花到種子成熟，植株的形態(tài)和生長(zhǎng)發(fā)育并未受到其體內(nèi)大量積累的Cd2+的明顯影響。而在煙草（Nicotiana tabacum）中超表達(dá)AtCAX2還可以增加Mn2+在液泡中的積累[64]。Koren′kov等[65-66]研究發(fā)現(xiàn)AtCAX2和AtCAX4均可以將轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞質(zhì)中的Cd2+、Zn2+和Mn2+區(qū)域化到液泡中，以緩解上述金屬離子對(duì)植物造成的毒害。此外，研究發(fā)現(xiàn)CAX還可以參與細(xì)胞質(zhì)中Ni2+和Ba2+的轉(zhuǎn)運(yùn)。庭薺屬植物Alyssum lesbiacum的AlCAX 定位于液泡膜上，可參與Ni2+的轉(zhuǎn)運(yùn)與區(qū)域化，進(jìn)而改變A. lesbiacum對(duì)Ni2+的耐受性[67]。而Liu等[68]將小花堿茅（Puccinellia tenuiflora）的PutCAX1在Ca2+敏感型酵母K667中進(jìn)行超表達(dá)，可使酵母對(duì)Ba2+有一定的耐受能力。

3.2 CDF家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

CDF轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要負(fù)責(zé)調(diào)控金屬陽(yáng)離子從胞質(zhì)到胞外或細(xì)胞器的轉(zhuǎn)運(yùn)[62]，該家族蛋白按照系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系可以分為3類，即Zn-CDFs、Fe/Zn-CDFs和Mn-CDFs轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[6]。目前，研究者已鑒定出許多CDF家族蛋白，通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，該家族蛋白普遍具有6個(gè)跨膜域，在N端的第1和第2個(gè)跨膜域之間存在一個(gè)高度保守的特征序列，在C末端則存在一個(gè)特殊的陽(yáng)離子外排結(jié)構(gòu)域[69]。金屬耐受性蛋白（metal tolerance proteins，MTP）是CDFs家族成員之一，研究表明，擬南芥AtMTP定位在液泡膜上，主要調(diào)控胞質(zhì)中的Zn2+向液泡的區(qū)域化[70-71]。此外，水稻的OsMTP8.1和OsMTP8.2都是定位于液泡膜的陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在高M(jìn)n2+條件下，OsMTP8.1缺失會(huì)導(dǎo)致水稻葉綠素含量下降，生長(zhǎng)受限，證明OsMTP8.1是Mn2+特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白;而且OsMTP8.1還可以與OsMTP8.2協(xié)同發(fā)揮作用，將過量Mn2+區(qū)域化在水稻根系和幼苗的液泡中，以減少高M(jìn)n2+脅迫對(duì)水稻產(chǎn)生的毒害[72-73]。

3.3 NRAMP家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

NRAMP同樣是一類重要的金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能夠參與多種二價(jià)金屬離子的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)[6]。生物信息學(xué)分析顯示，NRAMP蛋白普遍由12個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域組成，其中第1～10個(gè)跨膜域具有疏水性，并且在第8和第9個(gè)跨膜域上還存在一個(gè)高度保守的“共有轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)簽”序列基元，推測(cè)這段高度保守的序列可能與NRAMP蛋白的功能密切相關(guān)[74]。目前已在擬南芥和東南景天（Sedum alfredii）等植物中鑒定出了NRAMP轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，研究發(fā)現(xiàn)SaNRAMP3定位于液泡膜上，對(duì)Cd2+、Mn2+、Fe2+等都具有轉(zhuǎn)運(yùn)功能[75]。在擬南芥中，AtNRAMP3和AtNRAMP4同樣定位于液泡膜，主要調(diào)控Mn2+和Fe2+的轉(zhuǎn)運(yùn);AtNRAMP3和AtNRAMP4可以將液泡中的Mn2+運(yùn)輸至葉肉細(xì)胞的葉綠體中，且二者之間存在功能冗余[76];此外，AtNramp3 AtNramp4缺失突變株系還會(huì)因Fe2+缺乏而表現(xiàn)出白化以及種子不能萌發(fā)等現(xiàn)象[77]。

3.4 ZIP家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

ZIP是一類多次跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，能夠吸收和運(yùn)輸二價(jià)金屬離子，在維持植物體內(nèi)Zn2+、Fe2+平衡的過程中起重要作用[78]。ZIP家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白由326～425個(gè)氨基酸組成，普遍含有6～9個(gè)跨膜域：其中N末端位于細(xì)胞內(nèi)側(cè)，包含3～4個(gè)跨膜域，而C末端則位于細(xì)胞外側(cè)，包含3～5個(gè)跨膜域;此外，在第3和第4個(gè)跨膜域之間還存在一個(gè)富含組氨酸殘基的可變區(qū)，推測(cè)該區(qū)域可能與其能夠參與調(diào)控金屬離子的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[79]。ZIP蛋白具有較多的疏水基團(tuán)，有利于其與膜的結(jié)合，而這些結(jié)合在膜上的蛋白可以參與調(diào)控Zn2+、Fe2+的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[80]。有研究發(fā)現(xiàn)，擬南芥AtZIP1定位于液泡膜，主要負(fù)責(zé)調(diào)控液泡Zn2+的外排，也可能參與根中Zn2+從液泡釋放到細(xì)胞質(zhì)的再活化過程[81]。在木薯（Manihot esculenta）中共表達(dá)擬南芥AtMTP1和AtZIP1能夠顯著提高貯藏根可食用部分的Zn2+含量，但是Zn2+的過量積累也會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因植株矮小和葉片失綠等不良表型[82]。

4 總結(jié)與展望

干旱、土壤鹽漬化以及金屬離子毒害等非生物脅迫嚴(yán)重影響了我國(guó)農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)。植物細(xì)胞中定位于液泡膜上的陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以將細(xì)胞質(zhì)中過量的Na+、K+、Ca2+和一些其他金屬陽(yáng)離子區(qū)域化至液泡中，一方面能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的滲透勢(shì)、促進(jìn)水分的吸收，維持植物的正常生長(zhǎng);另一方面還可以緩解植物受外界環(huán)境影響所產(chǎn)生的離子毒害。因此，闡明液泡膜陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在植物抗逆中的作用，挖掘更多可利用的關(guān)鍵基因，對(duì)培育耐鹽、抗旱作物新品種以及生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)治理都具有十分重要的意義。目前，關(guān)于液泡膜陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究多集中于能夠區(qū)域化Na+、K+的NHXs以及轉(zhuǎn)運(yùn)Ca2+的CAXs，并且對(duì)二者響應(yīng)逆境脅迫的機(jī)制也有了一定的進(jìn)展。但是，對(duì)定位于液泡膜上的其他陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能的研究相對(duì)還不夠深入?；谝陨犀F(xiàn)狀，今后的研究可從以下3個(gè)方面入手：①除一些常見的Na+/H+和Ca2+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白外，有關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)Cd2+、Zn2+、Mn2+和Fe2+等金屬陽(yáng)離子的液泡膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的挖掘及其作用機(jī)制的研究還需進(jìn)一步完善;②加強(qiáng)對(duì)各類陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白之間協(xié)同作用的研究，以期建立相對(duì)完善的細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體系;③可以通過比較不同物種間的某個(gè)特定液泡膜陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白與其抗逆性的關(guān)系，篩選可能導(dǎo)致這種差異的天然變異位點(diǎn)，為今后農(nóng)作物及牧草的改良提供優(yōu)異基因資源。

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