劉果 高麗瓊 彭彥 尚秀華 詹妮 吳志華

摘要：【目的】探索南美油藤幼苗的抗冷害機(jī)制，為我國南美油藤幼苗低溫脅迫適應(yīng)性研究提供一定的理論參考和支持?！痉椒ā坷妹撀渌幔ˋBA）和赤霉素（GA3）兩種外源激素作為誘導(dǎo)劑，測定南美油藤幼苗在4 ℃低溫脅迫下不同激素和不同濃度處理下的幼苗葉片膜系統(tǒng)[相對電導(dǎo)率（REC），丙二醛（MDA）含量]、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)[可溶性蛋白（SP），可溶性糖（SS）]和氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）]活性等生理生化指標(biāo)隨處理時(shí)間的變化?！窘Y(jié)果】南美油藤幼苗葉片噴施10 μmol/L ABA后經(jīng)低溫脅迫能顯著降低其膜系統(tǒng)REC和MDA含量（P<0.05，下同），而噴施10 mg/L GA3能有效降低其MDA含量;南美油藤幼苗葉片噴施10 μmol/L ABA后經(jīng)低溫脅迫能顯著增加其SP和SS含量，而噴施GA3南美油藤幼苗葉片SP和SS含量的增加效果不顯著（P>0.05，下同）;噴施10 μmol/L ABA后經(jīng)低溫脅迫均能有效提高幼苗葉片SOD、POD和CAT活性，噴施10 mg/L GA3可適當(dāng)提高其POD活性，5 mg/L GA3能在一定程度上提高其CAT活性，但隨著低溫處理時(shí)間的延長，噴施GA3對南美油藤幼苗葉片中CAT活性增強(qiáng)效果不顯著。對7種生理生化指標(biāo)的Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，SOD、POD和CAT 3種氧化酶活性間存在正相關(guān)關(guān)系，且POD與REC呈負(fù)相關(guān)，CAT與REC和MDA含量呈負(fù)相關(guān)，故增強(qiáng)SOD、POD和CAT的活性，可適當(dāng)降低REC和MDA含量，提高南美油藤幼苗的抗冷害能力。SP和SS均與3種氧化酶活性呈正相關(guān)，且SS與REC和MDA呈負(fù)相關(guān)，因此增加SP和SS含量對南美油藤幼苗抵抗冷害能力有積極的作用?！窘Y(jié)論】噴施適當(dāng)濃度的外源激素ABA（10 μmol/L）和GA3（5～10 mg/L）能有效提高南美油藤幼苗的抗冷害能力。

關(guān)鍵詞： 南美油藤;外源激素;低溫脅迫;氧化酶活性

中圖分類號： S565.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）09-2181-10

Effects of exogenous hormones on physiological and biochemical indexes of Plukenetia volubilis under low temperature stress

LIU Guo， GAO Li-qiong， PENG Yan， SHANG Xiu-hua， ZHAN Ni， WU Zhi-hua*

（Center for Eucalyptus Research and Development， National Forestry and Grassland Administration，

Zhanjiang， Guangdong? 524022， China）

Abstract：【Objective】Mechanism of Plukenetia volubilis seedlings resistance to cold damage was explored to provide reference for adaptation analysis of P. volubilis seedlings responding to low temperature stress. 【Method】In this study， two exogenous hormones， abscisic acid（ABA） and gibberellin（GA3）， were used as inducers to determine the changes of physiological and biochemical indicators such as blade membrane system[relative conductivity（REC）， the content of malonaldehyde（MDA）]， osmotic adjustment substances[soluble protein（SP） and soluble sugar（SS）]， oxidase[activity of superoxide dismutase（SOD）， peroxidase（POD） and catalase（CAT）] in the leaves of P. volubilis seedlings treated with different hormones concentrations and the treatment times under low temperature stress. 【Result】The results showed that 10 μmol/L ABA applied to the leaf membrane system of seedlings after low temperature stress could significantly reduce their REC and MDA content（P<0.05， the same below）， and 10 mg/L GA3 could effectively reduce the content of MDA. 10 μmol/L ABA could significantly increased SP and SS content in P. volubilis seedlings osmotic adjustment substance， but the effect of GA3 was not significant in increasing the content of SP and SS under low temperature stress（P>0.05， the same below）. Additionally， 10 μmol/L ABA could effectively improve SOD， POD and CAT activities of seedlings leaves， 10 mg/L GA3 could properly improve POD activity and 5 mg/L GA3 could improve CAT activity to some extent， but the effect of GA3 on enhancement of CAT activity was not significant with the extension of time. The Pearson correlation analysis was carried out on the seven physiological and biochemical indexes. The results showed that there were positive correlation relationships among SOD， POD and CAT， and POD was negatively correlated to REC， CAT were negatively correlated to REC and MDA. Therefore， the increase of SOD， POD and CAT activities could decrease the REC and the content of MDA which could improve the ability of cold resistant of P. volubilis seedlings. SP and SS were positively correlated with the activities of SOD， POD and CAT， and SS was negatively correlated with REC and MDA， thus increasing the contents of SP and SS could have a positive effect on the cold resistant of P. volubilis seedlings. 【Conclusion】Spraying with appropriate concentration of exogenous hormone ABA（10 μmol/L） and GA3（5-10 mg/L） could effectively enhance the ability of cold resistant of P. volubilis seedlings.

Key words： Plukenetia volubilis; exogenous hormones; cold resistant; the oxidase activity

Foundation item：Basic and Applied Basic Research Project of Guangdong（2019A1515110168）; Forestry Science and Technology Innovation Project of Guangdong（2017KJCX015）

0 引言

【研究意義】南美油藤（Plukenetia volubilis）是大戟科攀援狀多年生木質(zhì)藤本植物，又名印加果、星油藤、美藤果等，原生長在海拔80～1700 m的南美洲安第斯山脈地區(qū)熱帶雨林（de Souza et al.，2013）。南美油藤種子含油量豐富（35%～60%）（Kumar et al.，2017），種子油的不飽和脂肪酸含量高達(dá)90%以上，且不含任何毒素和對健康有害的物質(zhì)，是世界上不飽和脂肪酸含量最高的植物油之一（Chandrase-karan and Liu，2015）;同時(shí)，南美油藤種子油組分優(yōu)良，營養(yǎng)品質(zhì)高，被認(rèn)為是世界上最好的植物油之一（劉果等，2018）。我國自2006年首次引種以來，已在云南南部、貴州、海南和廣東等地區(qū)有少量分布。南美油藤原生長地為熱帶或亞熱帶型氣候，溫度為10～26 ℃，相對濕度70%～80%（Alicia and Isabella，2016）。與原產(chǎn)地相比較發(fā)現(xiàn)，我國目前南美油藤的適生區(qū)普遍存在冬季氣溫低于10 ℃的情況，因此，提高南美油藤植株，特別是幼苗的抗冷害能力對發(fā)展南美油藤產(chǎn)業(yè)具有非常重要的意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】溫度是重要的環(huán)境因子之一，在限制植物遺傳背景的前提下，溫度對植物生長發(fā)育的某些過程起決定性作用（閆紹鵬，2004）。在低溫條件下，植物體內(nèi)會產(chǎn)生各項(xiàng)生理生化的變化，如生物膜的滲透性、結(jié)構(gòu)和組分、細(xì)胞質(zhì)的流動性、酶活性以及呼吸作用和光合作用等的變化，以降低植物受低溫傷害的程度（蘇鵬，2010）。作為抗寒冷基因表達(dá)的啟動因素之一，植物激素在植物適應(yīng)生物和非生物脅迫中起著積極的調(diào)控作用（羅正榮，1989）。研究表明，脫落酸（Abscisic acid，ABA）和赤霉素（Gibberellin，GA3）的含量與植物的抗寒性密切相關(guān)（王連榮等，2016）。已有研究表明，甘蔗（Saccharum officenarum）（黃杏，2012）、杏扁（Prunus armeniace）（王連榮等，2016）、大豆（Glycine max）（魏鑫等，2016）、玉米（Maize）（李馨園等，2017）等外施適宜濃度的ABA后，可在不抑制生長的情況下提高植株抗寒力。GA3是植物生長和發(fā)育過程中必不可少的激素之一，其參與調(diào)控植物種子萌發(fā)、葉片生長及植物開花等生長發(fā)育的各個(gè)方面（Richards et al.，2001）。代勛等（2012）研究表明，噴施10 mg/L GA3可提高低溫脅迫下小桐子（Jatropha curcas）種子的發(fā)芽率，并能顯著提高幼苗對低溫脅迫的抵抗能力。Zhu等（2016）的研究顯示，經(jīng)0.5-mM GA3處理后，能有效抑制番茄（Solanum lycopersicum）果實(shí)冷害指數(shù)的上升?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】南美油藤的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展和應(yīng)用前景廣闊，但目前在我國的分布區(qū)域有限，僅華南和西南部分地區(qū)有少量種植。近年來，關(guān)于南美油藤的研究多集中于脂肪酸生物合成與累積的機(jī)制探析（Chandrasekaran and Liu，2015; Hu et al.，2018; 劉果等，2019），針對低溫脅迫下南美油藤幼苗各項(xiàng)生理生化特性的研究鮮有報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】以當(dāng)年生南美油藤幼苗為試驗(yàn)材料，分別研究外源ABA和GA3對低溫處理后南美油藤幼苗對低溫脅迫的響應(yīng)，以期尋找最優(yōu)的濃度，為我國南美油藤幼苗低溫脅迫適應(yīng)性研究提供一定的理論參考和支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用南美油藤果于2019年2月采自廣東省湛江市遂溪縣南方國家級林木種苗示范基地內(nèi)南美油藤種質(zhì)資源圃。果實(shí)采摘后自然晾干，剝殼獲得的健康種子經(jīng)滅菌消毒后點(diǎn)播在裝滿輕型基質(zhì)（黃心土∶稻殼∶珍珠巖=3∶4∶3）的育苗袋（12 cm×14 cm）中，每個(gè)育苗袋點(diǎn)播1顆種子。種子萌發(fā)后，于2019年4月初選取生長健壯且形態(tài)相對一致的南美油藤幼苗置于南方國家級林木種苗示范基地高新溫室內(nèi)進(jìn)行正常生長培育。

1. 2 試驗(yàn)方法

南美油藤正常生長3個(gè)月后開始進(jìn)行處理。參考羅銀玲等（2014）的方法，分別用500 mL水（對照，CK）及不同濃度的ABA溶液（5、10和50 μmol/L，分別標(biāo)記為ABA-1，ABA-2和ABA-3）和GA3溶液（5、10和50 mg/L，分別標(biāo)記為GA-1，GA-2和GA-3）對南美油藤幼苗進(jìn)行葉面噴施，每處理30株幼苗。早上9：00第1次噴施后，于次日9：00進(jìn)行第2次葉面噴施。第3 d早上9：00將幼苗置于4 ℃光照培養(yǎng)箱（光照強(qiáng)度為800 lx）中進(jìn)行冷害處理，分別于低溫處理24、48和72 h后取6株幼苗的第3對葉子，將所有葉片保存在-20 ℃冰箱中用于測定各種生理生化指標(biāo)。以噴施水但未進(jìn)行低溫處理的幼苗為對照1（CK-1），噴施水且進(jìn)行低溫處理的幼苗記為對照2（CK-2）。

1. 3 測定項(xiàng)目及方法

相對電導(dǎo)率（Relative electric conductivity，REC）采用電導(dǎo)法測定;丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量采用硫代巴比妥酸酸（TBA）法測定;可溶性蛋白（Soluble protein，SP）含量采用考馬斯亮藍(lán)法測定;可溶性糖（Soluble sugar，SS）含量采用蒽酮法測定;超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）活性采用氮藍(lán)四唑（NBT）顯色法測定;過氧化物酶（Peroxidase，POD）活性采用愈創(chuàng)木酚比色法測定。過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性的測定方法為：取0.15 mol/L pH 7.0的磷酸緩沖液200 mL，加入0.309 mL H2O2（原液）搖勻即為反應(yīng)液;3 mL反應(yīng)液中加入0.1 mL上述提取的酶液，以pH 7.0的磷酸緩沖液對照調(diào)零，在240 nm波長下測定吸光度值。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用Excel 2016進(jìn)行作圖分析，并結(jié)合SPSS 19.0進(jìn)行方差分析、Pearson相關(guān)性分析和t檢驗(yàn)的差異分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 外源激素對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片膜系統(tǒng)的影響

2. 1. 1 REC 根據(jù)t檢驗(yàn)結(jié)果（表1）可知，經(jīng)低溫處理后，各處理組的南美油藤幼苗葉片REC與CK-1達(dá)顯著（P<0.05，下同）或極顯著（P<0.01，下同）差異水平，其中ABA-1、GA-1、GA-2和GA-3處理組的幼苗葉片REC與CK-1呈極顯著差異。ABA-2處理組的幼苗葉片REC與除ABA-3處理組外的其他處理組均存在顯著差異，此外其與除CK-2外的其他處理組間差異不顯著（P>0.05，下同），由此表明，ABA-2處理組幼苗葉片REC較其他處理組的變化更小，幼苗葉片的細(xì)胞內(nèi)液更穩(wěn)定。

從圖1可知，經(jīng)低溫處理后，南美油藤幼苗葉片REC顯著升高。未噴施激素的CK-2受低溫傷害明顯，其REC在低溫處理48 h時(shí)達(dá)最大值。4 ℃低溫處理72 h后，進(jìn)行激素噴施的處理中，ABA-2處理組的幼苗葉片REC較其他處理低，且ABA處理組整體REC低于GA3處理組，即幼苗葉片的細(xì)胞內(nèi)液滲出更少，能有效降低低溫對南美油藤幼苗的傷害，說明ABA對降低REC的作用較GA3更好。從圖1還可知，隨著處理時(shí)間的延長，低溫脅迫下的南美油藤幼苗葉片REC以ABA-2處理組變化較為平緩，且與其他處理差異顯著;ABA-1和GA-3處理組的幼苗葉片REC隨著低溫處理的時(shí)間增加而逐漸增加，而其他處理組均在48 h達(dá)最大值，處理72 h的REC值反而降低。由此推斷，噴施適當(dāng)濃度ABA和GA3能在一定程度上提高南美油藤幼苗的低溫適應(yīng)能力，以ABA-2處理組對南美油藤幼苗葉片REC的降低更顯著，即ABA噴施濃度為10 μmol/L時(shí)效果最佳。

2. 1. 2 MDA含量 由圖2可知，4 ℃低溫脅迫下，CK-2的葉片MDA含量隨著處理時(shí)間的延長而逐漸增加，其幼苗葉片受到低溫脅迫的不斷威脅。經(jīng)激素處理的幼苗葉片MDA含量均較CK-2低，且隨著處理時(shí)間的延長，ABA-2處理組的幼苗葉片MDA含量呈下降趨勢，由此說明，噴施ABA濃度為10 μmol/L能有效緩解南美油藤葉片MDA含量的增加。經(jīng)過72 h的低溫處理，ABA-3和GA-2處理組的幼苗葉片MDA含量較低，表明ABA濃度為50 μmol/L或GA3濃度為10 mg/L時(shí)，南美油藤幼苗葉片MDA含量表現(xiàn)較低。根據(jù)MDA含量與ABA濃度的變化可知，噴施一定濃度的ABA和GA3可降低葉片MDA含量，其中，ABA的濃度越高，葉片MDA含量越低，即在適宜的范圍內(nèi)，提高ABA的濃度能有效降低MDA含量，提高南美油藤幼苗的抗冷害能力。

根據(jù)t檢驗(yàn)結(jié)果（表2）可得，ABA-2處理組和CK-2與GA-2處理組的MDA含量均存在顯著差異，而其他各處理組間的幼苗葉片MDA含量均差異不顯著。由此可推斷，噴施濃度為10 mg/L GA3更能有效降低低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片的MDA含量。

2. 2 外源激素對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

2. 2. 1 SP含量 從圖3可知，ABA噴施濃度為10 μmol/L（ABA-2）時(shí)，南美油藤幼苗葉片SP含量在低溫處理48和72 h均為最高，且高于其他處理組;而ABA濃度較低（處理24 h除外）或較高時(shí)，低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SP含量與CK-2差異不顯著。噴施不同濃度GA3的南美油藤幼苗葉片SP含量的變化與CK-2相比，GA-1和GA-2處理組的南美油藤幼苗葉片SP含量在低溫處理48 h時(shí)略高于CK-2，但差異均不顯著。由此表明，噴施適宜濃度的ABA（10 μmol/L）能顯著提高南美油藤幼苗葉片SP含量，增強(qiáng)其抗低溫能力;但噴施GA3對南美油藤幼苗葉片SP含量的影響不大。

從不同處理時(shí)間對南美油藤幼苗葉片SP含量的影響（圖3）還發(fā)現(xiàn)，ABA-2、GA-1和GA-2處理組幼苗在受到低溫脅迫48 h時(shí)，葉片SP含量均有顯著升高，其中以ABA-2處理組幼苗葉片SP含量增加更為顯著。由此可知，噴施10 μmol/L ABA能顯著提高受到低溫脅迫的南美油藤幼苗葉片SP含量，噴施較低濃度（5和10 mg/L）GA3對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SP含量稍有提高，但效果不顯著。結(jié)合差異分析結(jié)果（表3）可得，噴施GA3在提高低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SP含量的效果有限。

2. 2. 2 SS含量 從圖4可知，經(jīng)ABA和GA3處理的南美油藤幼苗葉片SS含量有所增加，其中以噴施10 μmol/L ABA處理組的南美油藤幼苗葉片SS含量最高。隨著低溫處理時(shí)間的延長，GA-1和GA-3處理組幼苗葉片SS含量逐漸降低;GA-2處理組幼苗葉片SS含量在低溫處理48 h時(shí)達(dá)最大值，但在低溫處理72 h后急劇降低。由此可知，GA3對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SS含量的增加有一定的促進(jìn)作用，但隨著低溫時(shí)間的延長，其促進(jìn)作用有限。

從圖4還可知，低溫處理24 h，各激素處理組和CK-2的南美油藤幼苗葉片SS含量均高于CK-1，說明南美油藤幼苗受到了低溫脅迫的危害;而ABA-1、ABA-2、ABA-3和GA-1處理組的幼苗葉片SS含量均高于CK-2，由此說明，4 ℃低溫脅迫下上述4個(gè)處理組的幼苗葉片SS含量增加，抵抗冷害能力增加。低溫處理48 h，各激素處理組的幼苗葉片SS含量均顯著高于CK-2，由此說明噴施ABA和GA3均能在一定程度上增加南美油藤幼苗葉片SS含量，且噴施ABA的效果更顯著。低溫處理72 h，CK-2的幼苗葉片SS含量稍有增加，說明經(jīng)過72 h的低溫脅迫，南美油藤幼苗葉片開始出現(xiàn)低溫適應(yīng)能力的提高，同時(shí)，除ABA-1外各處理組的幼苗葉片SS含量均呈下降趨勢，仍以ABA-2處理組幼苗葉片SS含量最高，而噴施GA3各處理組的幼苗葉片SS含量與CK-2基本一致，由此說明，噴施GA3提高低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SS含量的效果有限，結(jié)合t檢驗(yàn)結(jié)果（表4）可得出，噴施濃度為10 μmol/L ABA能有效增加低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SS含量。

2. 3 外源激素對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片氧化酶活性的影響

2. 3. 1 SOD活性 從圖5可知，未噴施激素且經(jīng)低溫處理（CK-2）的南美油藤幼苗葉片SOD活性在低溫處理24 h后顯著降低，其余各處理組的南美油藤幼苗葉片SOD活性顯著增加。低溫脅迫48 h后，CK-2的幼苗葉片SOD活性急劇增加，而在低溫處理72 h后又急劇降低，由此可推斷，南美油藤幼苗葉片已受到低溫的危害。ABA-3、GA-1、GA-2和GA-3處理組在低溫處理72 h，其幼苗葉片SOD活性降低，且與CK-2的幼苗葉片SOD活性基本一致，由此可知，隨著低溫脅迫時(shí)間的延長，噴施高濃度ABA（ABA-3處理組）和噴施GA3處理的南美油藤幼苗葉片SOD活性與未噴施激素處理的基本一致。ABA-1和ABA-2處理組的幼苗葉片SOD活性較其他處理組顯著增加，由此可知，噴施ABA濃度為5和10 μmol/L時(shí)可顯著提高低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SOD活性。

由圖5還可知，經(jīng)ABA和GA3噴施處理后，南美油藤幼苗葉片SOD活性顯著增強(qiáng)。其中以ABA-1和ABA-2處理組的幼苗葉片SOD活性在不同處理時(shí)間的活性較高。根據(jù)t檢驗(yàn)結(jié)果（表5）可得，ABA-1和ABA-2處理組的南美油藤幼苗葉片SOD活性與CK-2差異顯著，由此可得，噴施ABA濃度為5和10 μmol/L時(shí)能顯著提高南美油藤幼苗在低溫脅迫下葉片SOD活性。噴施GA3的各處理組中，GA-3處理組的幼苗葉片SOD活性較其他兩個(gè)處理組略高，但與CK-2的幼苗葉片SOD活性差異不顯著。由此推斷，噴施GA3能增加低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片SOD活性，但效果不顯著。

2. 3. 2 POD活性 與低溫脅迫下未噴施激素處理的CK-2相比較，經(jīng)ABA和GA3噴施處理后的南美油藤幼苗葉片POD活性變化存在較大差異（圖6）。其中，低溫處理24 h時(shí)，ABA-2處理組的幼苗葉片POD活性最高，CK-2的幼苗葉片POD活性最低;低溫處理48 h時(shí)，ABA-1、ABA-2、GA-1、GA-2和GA-3處理組的幼苗葉片POD活性均明顯升高，以ABA-2處理組的幼苗葉片POD活性最高;低溫處理72 h時(shí)，仍以ABA-2處理組幼苗葉片POD活性最高，且與其他處理組差異顯著，而噴施GA3所有處理組的幼苗葉片POD活性均有所降低。由此可推斷，噴施較低濃度ABA（5和10 μmol/L）或較高濃度GA3（10和50 mg/L）能有效提高低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片POD活性;隨著低溫脅迫時(shí)間的延長，噴施ABA和GA3的南美油藤幼苗葉片POD活性隨之降低。

根據(jù)t檢驗(yàn)結(jié)果（表6）可知，ABA-2處理組與未噴施激素低溫處理CK-2的幼苗葉片POD活性存在顯著差異。由此可知，噴施ABA濃度為10 μmol/L時(shí)，對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片POD活性增強(qiáng)有顯著效果，噴施GA3的各處理組與CK-2的幼苗葉片POD活性均未達(dá)到顯著差異水平，因此，外源噴施GA3對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片POD活性增強(qiáng)效果不顯著。從表6可知，GA-2處理組與CK-2的P=0.074，結(jié)合噴施GA3能在一定程度上增加幼苗葉片POD活性，且GA-2處理組POD活性增加最為顯著，由此可推斷，噴施GA3濃度為10 mg/L時(shí)，可在一定程度上提高低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片POD活性。

2. 3. 3 CAT活性 由圖7可知，不同低溫脅迫時(shí)間下各處理組的南美油藤幼苗葉片CAT活性存在差異，其中，以GA-1處理組南美油藤幼苗葉片CAT活性在處理24 h時(shí)最高，且與其他處理組差異顯著;ABA-2處理組幼苗葉片在低溫脅迫下48和72 h時(shí)CAT活性均最高，且與其他處理組差異顯著。由此可推斷，經(jīng)ABA和GA3噴施處理后，南美油藤幼苗葉片CAT活性增強(qiáng)，可在一定程度上增加南美油藤幼苗抵抗冷害的能力，以ABA-2處理組幼苗葉片CAT活性增強(qiáng)最穩(wěn)定。

由t檢驗(yàn)結(jié)果（表7）可知，ABA-2處理組與CK-2呈極顯著差異，說明在低溫脅迫下，噴施ABA濃度為10 μmol/L時(shí)南美油藤幼苗葉片CAT活性的提高達(dá)到顯著效果。噴施GA3各處理組與CK-2均未達(dá)到顯著差異水平，由此可得，噴施GA3對低溫脅迫下南美油藤幼苗葉片CAT活性值增加效果不顯著。由于噴施GA3在處理24和48 h時(shí)葉片CAT活性變化均與CK-2呈顯著差異（圖7），因此可推斷短時(shí)間低溫脅迫下噴施GA3對幼苗葉片CAT活性的提高有一定的效果，但隨著時(shí)間的延長，對CAT活性的增加效果不明顯。

2. 4 生理生化指標(biāo)間方差分析和相關(guān)性分析結(jié)果

利用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析南美油藤幼苗不同生理生化指標(biāo)間的相關(guān)性，結(jié)果如表8所示。南美油藤幼苗葉片REC與MDA含量呈正相關(guān)關(guān)系，即REC越高，細(xì)胞膜通透性越大，MDA含量越高，細(xì)胞膜功能越弱，南美油藤幼苗抗冷害能力越弱。SS含量與REC、MDA含量間均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，可能是SS在低溫環(huán)境下增加了細(xì)胞的保水能力，降低了細(xì)胞質(zhì)冰點(diǎn)，從而對幼苗起到保護(hù)作用。根據(jù)SS含量與其他指標(biāo)間的相關(guān)系數(shù)可知，SS和SP含量與3個(gè)氧化酶活性指標(biāo)均呈正相關(guān)關(guān)系;SP可提高細(xì)胞持水能力，保護(hù)原生質(zhì)膜結(jié)構(gòu)，提高細(xì)胞液濃度，從而降低冰點(diǎn)，提高植物抗冷害性，本研究中SP含量的變化與SS類似，對南美油藤幼苗抵抗冷害能力有積極的作用。SOD、POD和CAT共同作用能夠清除細(xì)胞內(nèi)自由基活性氧，其中SOD和POD能將有毒的自由基活性氧還原成H2O和O2，CAT能對膜脂和線粒體過氧化產(chǎn)生的活性氧有清除作用（任軍等，2013）。本研究中上述3種保護(hù)性氧化酶間存在正相關(guān)關(guān)系，其活性的增加能提高南美油藤幼苗抵抗冷害的能力。從3種氧化酶活性與其他指標(biāo)間的相關(guān)系數(shù)可知，POD活性與REC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，CAT活性與REC和MDA含量均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，由此可知，3種氧化酶活性的增加可適當(dāng)降低南美油藤幼苗葉片REC和MDA含量，即3種氧化酶的活性增強(qiáng)可適當(dāng)提高南美油藤幼苗葉片的持水能力，增強(qiáng)細(xì)胞膜的功能，提高南美油藤幼苗的抗冷害能力。

參考文獻(xiàn)：

蒼晶，王艷梅，王興，于晶，王軍虹，張達(dá)，張兆猛，樊立華. 2013. 根際澆灌ABA對冬小麥幼苗抗寒性的影響[J]. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，44（4）： 36-42. [Cang J，Wang Y M，Wang X，Yu J，Wang J H，Zhang D，Zhang Z M，F(xiàn)an L H. 2013. Effect of cold resistance on winter wheat seedlings with ABA pouring around root[J]. Journal of Nor-theast Agricultural University，44（4）： 36-42.]

陳奇，袁金海，孫萬倉，劉自剛，趙新旺，方彥，武軍艷，李學(xué)才，曾秀存，米超，蒲媛媛，馬驪，趙艷寧，方園，許耀照. 2017. 低溫脅迫下白菜型冬油菜與春油菜葉片光合特性及內(nèi)源激素變化比較[J]. 中國油料作物學(xué)報(bào)，39（1）： 37-46. [Chen Q，Yuan J H，Sun W C，Liu Z G，Zhao X W，F(xiàn)ang Y，Wu J Y，Li X C，Zeng X C，Mi C，Pu Y Y，Ma L，Zhao Y N，F(xiàn)ang Y，Xu Y Z. 2017. Leaf photosynthetics and endogenous hormons of spring and winter rapa（Brassica rapa L.） under low temperature[J]. Chinese Journal of Oil Crop Sciences，39（1）： 37-46.]

代勛，李忠光，龔明. 2012. 赤霉素、鈣和甜菜堿對小桐子種子萌發(fā)及幼苗抗低溫和干旱的影響[J]. 植物科學(xué)學(xué)報(bào)，30（2）： 204-212. [Dai X，Li Z G，Gong M. 2012. Effect of gibberellin，calcium，and betaine on seed germination and resistance of Jatropha curcas L. seedling to low temperature and drought stress[J]. Plant Science Journal，30（2）： 204-212.]

黃杏. 2012. 外源ABA提高甘蔗抗寒性的生理及分子機(jī)制研究[D]. 南寧：廣西大學(xué). [Huang X. 2012. Study on physio-logical and molecular mechanism of cold resistance enhanced by exogenous ABA application in sugarcane[D]. Nanning： Guangxi University.]

李學(xué)玲，龐海穎，牛東偉，任士福，李彥慧. 2017. 不同外源激素對李花抗寒性及相關(guān)生理指標(biāo)的影響[J]. 北方園藝，（11）： 17-22. [Li X L，Pang H Y，Niu D W，Ren S F，Li Y H. 2017. Effect of different exogenous hormones on cold-resistant ability and related physiological indicators of Plum flower[J]. Northern Horticulture，（11）： 17-22.]

李馨園，楊曄，張麗芳，左師宇，李麗杰，焦健，李晶. 2017. 外源ABA 對低溫脅迫下玉米幼苗內(nèi)源激素含量及Asr1基因表達(dá)的調(diào)節(jié)[J]. 作物學(xué)報(bào)，43（1）： 141-148. [Li X Y，Yang Y，Zhang L F，Zuo S Y，Li L J，Jiao J，Li J. 2017. Regulation on contents of endogenous hormones and Asr1 gene expression of maize seedling by exogenous ABA under low-temperature stress[J]. Acta Agronomica Sinica，43（1）： 141-148.]

劉果，陳鴻鵬，彭彥，謝耀堅(jiān)，陳少雄. 2018. 印加果種子生長發(fā)育過程中脂肪酸組成的變化分析[J]. 中國油脂，43（8）： 57-62. [Liu G，Chen H P，Peng Y，Xie Y J，Chen S X. 2018. Variations in fatty acid compasition of Sacha inchi seeds during growth and development[J]. China Oils and Fats，43（8）： 57-62.]

劉果，陳鴻鵬，吳志華，彭彥，謝耀堅(jiān). 2019. 南美油藤種子發(fā)育過程的代謝組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)聯(lián)合分析[J]. 林業(yè)科學(xué)，55（5）： 169-179. [Liu G，Chen H P，Wu Z H，Peng Y，Xie Y J. 2019. Analyses of seed development of Plukenetia volubilis by joint metabolomics and transcriptomics approaches[J]. Scientia Silvae Sinicae，55（5）： 169-179.]

羅銀玲，蘇志龍，崔現(xiàn)亮，李孫洋，蘭芹英. 2014. 外源ABA提高星油藤幼苗抗冷害能力的探討[J]. 云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），36（6）： 936-941. [Luo Y L，Su Z L，Cui X L，Li S Y，Lan Q Y. 2014. An investigation of exogenous abscisic acid on improving chilling tolerance of the seedlings of sacha inchi（Plukenetia volubilis）[J]. Journal of Yunnan University（Natural Sciences Edition），36（6）： 936-941.]

羅正榮. 1989. 植物激素與抗寒力的關(guān)系[J]. 植物生理學(xué)通訊，（3）： 1-5. [Luo Z R. 1989. Relationship between plant hormones and cold resistance[J]. Plant Physiology Journal，（3）： 1-5.]

聶慶娟，孟朝，梁海永，孟慶瑞，李彥慧. 2007. 低溫脅迫對4種常綠闊葉植物膜脂過氧化及保護(hù)酶活性的影響[J]. 植物研究，27（5）： 578-581. [Nie Q J，Meng C，Liang H Y，Meng Q R，Li Y H. 2007. Effect on low temperature stress on lipid peroxidation and activity of cell defense enzymes of four evergreen broadleaved tree species[J]. Bulletin of Botanical Research，27（5）： 578-581.]

任軍，黃志霖，曾立雄，施征. 2013. 低溫脅迫下植物生理反應(yīng)機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 世界林業(yè)研究，26（6）： 15-20. [Ren J，Huang Z L，Zeng L X，Shi Z. 2013. A review of physio-logical reaction mechanism of plants exposed to low temperature stress[J]. World Forestry Research，26（6）： 15-20.]

蘇鵬. 2010. 不同草坪草的溫度脅迫抗性差異及其機(jī)理研究[D]. 長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué). [Su P. 2010. Studies on the differences of temperature stressed tolerance and mechanism in diverse turfgrass species[D]. Changsha： Hunan Agricultural University.]

王翠花，劉沙，張瑞富，畢文波，郭志富. 2014. 植物抗寒分子生物學(xué)研究概況及展望[J]. 遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，（1）： 45-48. [Wang C H，Liu S，Zhang R F，Bi W B，Guo Z F. 2014. Overview and prospect of plant cold resistance molecular biology research[J]. Liaoning Agricultural Sciences，（1）： 45-48.]

王連榮，薛擁志，常美花，王莉. 2016. 外源激素對杏扁抗寒生理指標(biāo)的影響[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)，30（2）： 396-403. [Wang L R，Xue Y Z，Chang M H，Wang L. 2016. Effects of exo-genous hormones on cold resistant physiological index of Kernel Apricot[J]. Journal of Nuclear Agricultural Scien-ces，30（2）： 396-403.]

魏鑫，倪虹，張會慧，王晶英. 2016. 外源脫落酸和油菜素內(nèi)酯對干旱脅迫下大豆幼苗抗旱性的影響[J]. 中國油料作物學(xué)報(bào)，38（5）： 605-610. [Wei X，Ni H，Zhang H H，Wang J Y. 2016. Effects of exogenous abscisic acid and brassinolide on drought resistance of soybean seedlings[J]. Chinese Journal of Oil Crop Sciences，38（5）： 605-610.]

閆紹鵬. 2004. 歐美山楊雜種無性系低溫脅迫下幾種生理指標(biāo)的遺傳變異[D]. 哈爾濱：東北林業(yè)大學(xué). [Yan S P. 2004. Genetic variation among the hybrid clones of P. tremula×P. tremuloides in several physiological characteri-stics under low temperature stress[D]. Harbin： Northeast Forestry University.]

Achard P，Renou J P，Berthomé R，Harberd N P，Genschik P. 2008. Plant DELLAs restrain growth and promote survi-val of adversity by reducing the levels of reactive oxygen species[J]. Current Biology，18（9）： 656-660.

Alicia A N，Isabella E J. 2016. Sacha Inchi（Plukenetia volubilis Linneo）： A wasted ancestral experience？ Clinical evidence related to its consumption[J]. Revista Chilena de Nutrición，43（2）： 167-171.

Chandrasekaran U，Liu A Z. 2015. Stage-specific metabolization of triacylglycerols during seed germination of Sacha Inchi（Plukenetia volubilis L.）[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture，95（8）： 1764-1766.

de Souza A H P，Gohara A K，Rodrigues A C，de Souza N E，Visentainer J V and Matsushita M. 2013. Sacha inchi as potential source of essential fatty acids and tocopherols： Multivariate study of nut and shell[J]. Acta Scientiarum，35（4）： 757-763.

Hu X D，Pan B Z，F(xiàn)u Q T，Niu L J，Chen M S，Xu Z F. 2018. De novo transcriptome assembly of the eight major organs of Sacha Inchi（Plukenetia volubilis） and the identification of genes involved in α-linolenic acid metabolism[J]. BMC Genomics. doi：10.1186/s12864-018-4774-y.

Jones R L. 1973. Gibberellins： Their physiological role[J]. Annual Review of Plant Physiology，24： 571-598.

Kumar B，Smita K，Cumbal L，Debut A. 2017. Sacha inchi（Plukenetia volubilis L.） shell biomass for synthesis of silver nanocatalyst[J]. Journal of Saudi Chemical Society. doi：10.1016/j.jscs.2014.03.005.

Rakei A，Maali-Amiri R，Zeinali H，Ranjbar M. 2016. DNA methylation and physio-biochemical analysis of chickpea in response to cold stress[J]. Protoplasma，253： 61-76.

Richards D E，King K E，Ait-Ali T，Harberd N P. 2001. How gibberellin regulates plant growth and development： A molecular genetic analysis of gibberellin signaling[J]. Annual Review of Plant Biology. doi：10.1146/annurev.arplant.52.1.67.

Uzilday B，Turkan I，Sekmen A H，Ozgur R，Karakaya H C，2012. Comparison of ROS formation and antioxidant enzymes in Cleome gynandra（C4） and Cleome spinosa（C3） under drought stress[J]. Plant Science，182： 59-70.

Wang F，Liang D Y，Pei X N，Zhang Q H，Zhang P，Zhang J Q，Lu Z M，Yang Y C，Liu G F，Zhao X Y. 2019. Study on the physiological indices of Pinus sibirica and Pinus koraiensis seedlings under cold stress[J]. Journal of Fo-restry Research. doi：10.1007/s11676-018-0833-0.

Zhu Z，Ding Y，Zhao J H，Nie Y，Zhang Y，Liu C，Tang X M. 2016. Effects of postharvest gibberellic acid treatment on chilling tolerance in cold-stored tomato（Solanum lycopersicum L.） fruit[J]. Food and Bioprocess Technology. doi：10.1007/s11947-016-1712-3.

（責(zé)任編輯 鄧慧靈）