陳英鑾

廣東省陽春市中醫(yī)院，廣東 陽春 528467

三七，別名田七、參三七、血山草等，為五加科植物三七的干燥根及根莖，分布于云、桂、川、贛一帶，其中以云南文山為著名道地藥材，三七歸心、肝、胃、小腸經，味甘、微苦、性溫，生品具有活血化瘀、消腫定痛的功效[1]。中醫(yī)自古就有生熟功效各異且用法不同之說[2]，而熟品三七主治失血過多、生血乏源、久病虧虛、腎精虧損等造成的血虛證，以及產后暈血、氣血不足、身體虛弱，有四肢無力、頭昏眼花、腰膝酸軟、食欲不振、面色蒼白等癥狀[3]。傳統(tǒng)記載三七炮制方法有“油炸”“蒸法”兩種熟制方法，通過查閱相關文獻[4]，本實驗增加“砂燙”“烘焙”兩種熟制方法。三七總皂苷皂苷作為三七有效成分之一，有活血化瘀、活絡通脈之功效，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，三七總皂苷具有增加腦血容量及抑制血小板聚集之效，對造血組細胞的增值作用[5]?！吨袊幍洹穂6](2015版第一部)對于三七的皂苷記載僅有人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb、三七皂苷R1含量測定的標準，本實驗利用HPLC法對三七不同炮制品皂苷成分(Rg1、R1、Rd、Rb1、Re)，在油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制方法下含量的變化進行測定。

1 材料準備

1.1 藥品選取 選取三七生品(于文山高田三七種植產業(yè)基地采挖)，按照《中國藥典》要求對藥品進行油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制加工。

1.2 試劑選取 選取三七總皂苷標準品(購于國家藥品生物制品檢定所)，采用哇哈哈公司生產的純化水，使用乙腈(色譜純，購至國藥集團化學試劑有限公司)、甲醇(色譜純，購至國藥集團化學試劑有限公司)。

1.3 儀器及輔料選取 選擇安捷倫高效液相色譜儀(型號：Agilent 1260 II代)；色譜柱(Hypersi 1 BDS-C18,250 mm×4.6 mm，5 μm)；十萬分之一電子分析天平(AE-204，METTLER TOLEDO)；四兩裝高速萬能粉碎機(型號XS-D4A，浙江屹立工貿有限公司)；藥典篩(篩號：4，孔徑：0.25 mm，浙江上虞市道墟張興紗篩廠)；水浴鍋(HH-6，邦西儀器科技有限公司)；電熱真空干燥箱(型號：ZK-820，上海陽光實驗儀器有限公司)；沙子(河沙)；微波爐(MQ-L213B型美的微波爐)；食用油(福臨門植物調和油)。

2 制備樣品及對照品溶液

2.1 制備對照品溶液 參照《中國藥典》(2015版第一部)中對當歸皂苷含量要求，Rg1、Rb1及R1要有不小于5.0%的總含量，且其制得對照品溶液分別要有0.4 mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL的濃度，以此為標準，取三七總皂苷對照品干燥至恒重，采用十萬分之一電子分析天平進行精密稱量，取0.1430 g移至容量瓶，最終加甲醇制得對照品濃度均為：三七總皂苷1.430 g/mL；人參皂苷Re 0.061 g；人參皂苷Rd 0.099 mg/mL；人參皂苷Rg10.403 mg/mL；人參皂苷Rb10.419 mg/mL；三七皂苷R10.101 mg/mL。

2.2 制備樣品溶液 將油炸、蒸制、砂燙、烘焙過的炮制三七樣品及生品三七樣品進行粉碎；過四號篩，對其進行精密稱量，取0.6 g置于回流瓶中(規(guī)格為250 mL)，用胖度移液管精密量取甲醇50 mL加入回流瓶中，用封口膜封存靜置過夜，第二天置于水浴鍋上于溫度80℃的情況下回流2 h，放冷，回流前后進行對回流瓶及其內容物重量進行稱量，并用甲醇進行補重，搖勻后對其進行過濾(采用F型0.45 μm聚偏氟乙烯微孔有機濾膜，上海興亞凈化材料廠生產)，取續(xù)濾液。

3 三七不同炮制品的制備

砂燙：取適當干凈河沙置于鐵鍋內，進行翻炒攪拌，待其砂熱并具有流動性時，將三七倒入，并進行翻炒攪拌，待三七表面燙至呈金黃色時，立即取出，放冷，并進行敲碎，打粉。過四號藥典篩；蒸制：用水對三七進行浸潤，時間為1～2 h，對其進行6 h清水蒸制，后取出干燥，放冷，敲碎，打粉，過四號藥典篩；烘焙：用微波爐對三七進行中檔烘焙10 min左右，取出，放冷，敲碎，打粉，過四號藥典篩；油炸：使用植物調和油對三七進行文火煎炸，至其表面呈金黃色，取出，放冷，打粉，過四號藥典篩。另取生品三七進行干燥打粉，過四號藥典篩[7]。

4 HPLC法分析

4.1 HPLC分析 準備采用Hypersi 1 BDS-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，柱溫設置20℃；流動相條件：以乙腈-水進行梯度洗脫，流速為1 mL/min，檢測波長設置203 mm，進樣量設置為10 μL，塔板數(shù)按三七皂苷R1計算，應不低于4000。洗脫步驟見表1。

表1 流動相洗脫梯度表

4.2 對照品線性關系 對三七總皂苷對照品進行梯度量?。壕芪?、5、7、9、11、13 μL的對照品溶液，按上述方法進行準備工作后，對峰面積進行測定。以峰面積為Y軸，以進樣量為X軸(單位為μg)，線性方程公式為y=mx+b，以m表斜率，b表截距，R2為相關系數(shù)，線性范圍單位為mg，分析進樣量與峰面積的關系，結果顯示，正線性相關性較好，因此，其可以較好地應用于評價各炮制加工情況下的三七皂苷含量。

4.3 生品三七及其不同炮制品含量 精密稱取生三七粉0.6 g，按上述方法進行樣品溶液制備，對生三七三種皂苷：人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1進行含量探究，測定其峰面積進行計算，總含量為7.98%，符合藥典要求。另取四種炮制品粉末0.6 g，按上述方法進行樣品溶液制備，對其進行HPLC法含量測定，峰面積見表2。

4.4 生品三七及其不同炮制品含量圖譜比較 結果如圖1～5所示。圖1為三七生品HPLC圖譜以及41～44 min放大圖，可以看到在40 min左右時出現(xiàn)了較大的波動。圖2為蒸制三七HPLC圖譜變化情況其中HPLC圖譜在25 min時有一定波動，40 min時波動達到頂峰。圖3為油炸三七，同樣是在40 min之前達到頂峰，而且還出現(xiàn)兩個巔峰，只有一個組分含量出現(xiàn)明顯的增加情況。圖4、圖5分別是砂燙三七與烘焙三七的檢測結果，都是在40 min左右達到峰值，但是具體峰值的數(shù)值存在差異。

表2 生品三七及其不同炮制品峰面積對比

5 討論

目前炮制加工三七多以油炸三七與蒸三七為研究對象，通過查閱相關文獻[8-9]，本實驗相應增加砂燙法與烘焙法兩種新方法。砂燙法具有溫度高，傳熱快且均勻的特點；而烘焙法為微波烘焙，具有受熱均勻，溫度相對較低的特點。炮制品與生三七外觀有不同之處，油炸三七與砂燙三七呈金黃色，而蒸制三七與烘焙三七的顏色較深。

本次研究中，除烘焙情況下，蒸制保留皂苷最多，其次是油炸，最后是砂燙，而烘焙炮制加工，除人參皂苷Rb1類成分，其它皂苷類成分均有增加。初步推測可能是由于烘焙破壞了促使皂苷類成分分解的成分，對抗處理樣品時回流加熱對其皂苷類成分的破壞。而查閱文獻可知[10]，進行樣品處理時，超聲情況下的三七皂苷類成分與回流情況下的三七皂苷類成分有出入，且前者保留皂苷能力大于后者。而本次實驗的溫度大小為砂燙最大，油炸次之，然后是蒸制，最后是烘焙，而三七皂苷類成分與其大小關系相反，由此得出，炮制溫度與三七皂苷類成分有負相關關系。

綜上所述，不同炮制情況下的三七，其皂苷含量會有所不同，不同炮制情況下三七皂苷含量大小順序為烘焙>蒸制>油炸>砂燙，初步推測為溫度越高，三七皂苷含量變化越大。而值得注意的是，本次實驗結果還顯示了三七其它成分的增減情況，而隨著炮制溫度的增高(烘焙至砂燙)，三七所含其它含量有增加情況，即其除三七皂苷外其它含量的峰面積有增高情況，且在分析過程中，筆者還發(fā)現(xiàn)在R1與Rd的峰面積圖之間，其原有含量的變化及新成分的增加較為突出，值得進一步探究。