劉釗君，彭 震，朱 里，彭小列，劉世彪

(1.海南大學(xué)生命科學(xué)與藥學(xué)院,海南 ?？?570228;2.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000)

假奓包葉(Discocleidionrufescens)又名艾桐、老虎麻、小泡葉、金沙葉，為大戟科假奓包葉屬落葉灌木或小喬木，在國(guó)內(nèi)分布廣泛。假奓包葉的葉有毒，羊、豬等牲畜食用會(huì)導(dǎo)致肝臟和腎臟的實(shí)質(zhì)性病變，引起尿血病甚至死亡[1].民間以假奓包葉的根皮入藥，具有清熱解毒、逐水消積的功效，用于治療水腫、食積、毒瘡等病癥[2].目前，關(guān)于假奓包葉的研究主要集中在化學(xué)成分鑒定[3-5]及成分的抑菌活性方面[6-8].賈曉妮等[9]對(duì)假奓包葉的葉揮發(fā)油成分進(jìn)行了測(cè)定，共鑒定出37個(gè)組分，主要成分為葉綠醇和n-十六酸；田棣等[10]對(duì)假奓包葉的根皮、莖皮、果殼和種子的揮發(fā)油成分進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二乙酯為各部位共同的成分.大戟科植物種子通常富含油脂，是產(chǎn)油大科植物，但目前對(duì)大戟科的假奓包葉種子油的研究報(bào)道還極少.假奓包葉在湘西地區(qū)分布廣泛，資源豐富.筆者對(duì)吉首市郊區(qū)德夯苗寨、乾州高架橋、峒河園、鴉溪村4個(gè)采樣點(diǎn)假奓包葉的種子油進(jìn)行提取，并對(duì)種子油中的脂肪酸成分進(jìn)行分析鑒定，以期為本地區(qū)假奓包葉種子油的開發(fā)利用提供參考.

1 實(shí)驗(yàn)材料

成熟的假奓包葉果實(shí)于2017年11月采自湖南省湘西土家族苗族自治州吉首市郊區(qū)的德夯苗寨、乾州高架橋、峒河園、鴉溪村4個(gè)地點(diǎn)，各采樣點(diǎn)間相距約10 km.果實(shí)采集后及時(shí)置于烘箱中，在60 ℃下烘干48 h，搓去果皮，留下種子.種子用植物粉碎機(jī)粉碎成粉末，置于干燥器中備用.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 超聲波輔助萃取假奓包葉種子油

分別稱取粉碎后的假奓包葉種子原料10 g，置于150 mL廣口瓶中，加入70 mL石油醚(沸程30～60 ℃)浸泡12 h，再將廣口瓶置于溫度50 ℃、功率250 W的超聲波清洗槽(KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器)中提取油脂，提取時(shí)間40 min.將混合抽提液及原料渣轉(zhuǎn)入離心管，3 000 r·min-1離心5 min.取上清液轉(zhuǎn)移到RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，蒸餾回收石油醚.蒸餾瓶中的油脂產(chǎn)品在60 ℃下干燥4 h，冷卻至室溫.電子天平稱量所得油脂質(zhì)量，計(jì)算種子油提取率.各采樣點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)材料重復(fù)提取3次，取平均值.提取物保存于冰箱內(nèi)備用.

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)分析種子油成分

將種子油樣品置于恒溫培養(yǎng)箱中，參照文獻(xiàn)[11]得到的氫氧化鉀-甲醇皂化優(yōu)化方法進(jìn)行甲酯化.按V(石油醚)∶V(苯)=1∶1的比例，用2 mL石油醚-苯混合液為溶劑，將0.2 g種子油溶解，加入5 mL濃度為0.2 mol·L-1的KOH-CH3OH溶液作催化劑.混勻后于50 ℃水浴中酯化，反應(yīng)30 min，冷卻，加入2 mL飽和NaCl.靜置分層后取上層清液加入無水Na2SO4干燥過夜.設(shè)置氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS-QP2010，日本島津公司)色譜條件和質(zhì)譜條件，分流進(jìn)樣.分流比為20%.將萃取物加入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口，進(jìn)行GC-MS分析.

參照文獻(xiàn)[12]設(shè)置分析條件：氣化室溫度260.00 ℃；柱初始溫度150.00 ℃，保留2.00 min；以8.00 ℃·min-1上升到260.00 ℃，保留2.00 min；壓力92.40 kPa；總流量25.00 mL·min-1，柱流量1.00 mL·min-1；離子源溫度200.00 ℃，接口溫度230.00 ℃；溶劑切除時(shí)間2.50 min.

3 結(jié)果分析

3.1 假奓包葉種子的含油量

本實(shí)驗(yàn)使用石油醚作為溶劑，提取物色澤黃色透明.各采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油提取率從高到低依次為乾州高架橋、峒河園、德夯苗寨、鴉溪村，提取率分別為27.83%，21.36%，20.90%，20.75%.各樣品出油率均超過20%，平均出油率22.71%.

3.2 假奓包葉種子油脂肪酸成分

4個(gè)采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油甲酯化后，采用GC-MS分析得到各采樣點(diǎn)種子油油脂的總離子流圖譜，結(jié)果如圖1～4所示.

圖1 德夯苗寨采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油GC-MS總離子流圖譜Fig. 1 GC-MS TIC Diagram of D. rufescens Seed Oil from Dehang Village Sampling Sites

圖2 乾州高架橋采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油GC-MS總離子流圖譜Fig. 2 GC-MS TIC Diagram of D. rufescens Seed Oil from Qianzhou Viaduct Sampling Sites

圖3 峒河園采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油GC-MS總離子流圖譜Fig. 3 GC-MS TIC Diagram of D. rufescens Seed Oil from Donghe Garden Sampling Sites

圖4 鴉溪村采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油GC-MS總離子流圖譜Fig. 4 GC-MS TIC Diagram of D. rufescens Seed Oil from Yaxi Village Sampling Sites

利用NIST 05質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，將所得的質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖對(duì)照，以確定的假奓包葉種子油成分.表1列出了所得到的對(duì)照結(jié)果.

表1 4個(gè)采樣點(diǎn)假奓包葉樣品種子油脂肪酸組成

由表1可知：從德夯苗寨采樣點(diǎn)的假奓包葉種子油中共檢測(cè)出8個(gè)峰，分別代表8種脂肪酸，所對(duì)應(yīng)的酯化物質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的為9,12,15-十八碳三烯酸甲酯(51.02%)、9,12-十八碳二烯酸甲酯(27.52%)、十八酸甲酯(14.59%)和十六酸甲酯(5.95%)，其余質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低.

從乾州高架橋采樣點(diǎn)假奓包葉種子油中也檢測(cè)出8個(gè)峰，鑒定出7種脂肪酸成分(其中質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.20%的6號(hào)峰未能確定)，所對(duì)應(yīng)的酯化物質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的為9,12,15-十八碳三烯酸甲酯(49.16%)、9,12-十八碳二烯酸甲酯(31.69%)、十八酸甲酯(13.87%)和十六酸甲酯(4.22%)，其余成分所對(duì)應(yīng)的酯化物質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低.

峒河園采樣點(diǎn)假奓包葉種子油中只顯示了5個(gè)峰，包含5種脂肪酸成分，所對(duì)應(yīng)的酯化物質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的有9,12,15-十八碳三烯酸甲酯(53.88%)、9,12-十八碳二烯酸甲酯(27.44%)、十八酸甲酯(12.68%)和十六酸甲酯(5.66%)，9-十六碳烯酸甲酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低(0.33%).

鴉溪村采樣點(diǎn)假奓包葉種子油中僅顯示了4個(gè)峰，包含4種脂肪酸成分，對(duì)應(yīng)的酯化物分別為9,12,15-十八碳三烯酸甲酯(55.47%)、9,12-十八碳二烯酸甲酯(26.05%)、十八酸甲酯(12.40%)和十六酸甲酯(6.08%).

吉首市郊區(qū)4個(gè)采樣點(diǎn)假奓包葉種子油成分不盡相同.德夯苗寨假奓包葉種子油含脂肪酸最多，共8種；鴉溪村假奓包葉種子油含脂肪酸最少，共4種.種子油中共有且含量較高的成分有：亞麻酸9,12,15-十八碳三烯酸，對(duì)應(yīng)的酯化物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)52.38%；亞油酸9,12-十八碳二烯酸，對(duì)應(yīng)的酯化物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28.18%；硬脂酸十八酸，對(duì)應(yīng)的酯化物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13.30%；棕櫚酸十六酸，對(duì)應(yīng)的酯化物平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.78%.以對(duì)應(yīng)的酯化物計(jì)，其中不飽和脂肪酸(亞麻酸和亞油酸)平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)80.61%，飽和脂肪酸(硬脂酸和棕櫚酸)平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19.08%.4個(gè)采樣點(diǎn)中，鴉溪村假奓包葉種子油不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸占比達(dá)100%，峒河園的占比99.66%，德夯苗寨的占比99.08%，乾州高架橋的占比99.14%，平均占比99.47%.

4 討論

超聲波輔助萃取是一個(gè)物理過程，在整個(gè)浸提過程中無化學(xué)反應(yīng)發(fā)生，浸提得到的生物活性物質(zhì)在短時(shí)間內(nèi)保持不變.超聲波輔助可以提高破碎速度，縮短萃取時(shí)間，能極大提高萃取效率，已被廣泛應(yīng)用于植物有效成分的提取工藝中[13].大戟科植物種子多數(shù)富含油脂，如油桐、烏桕、蓖麻、麻風(fēng)樹等.目前對(duì)假奓包葉種子油的研究極少，田棣等報(bào)道過假奓包葉種子中的揮發(fā)油收率為1.16%，主要成分為鄰苯二甲酸二乙酯(41.94%)、苯乙醛(12.79%)和正二十烷(5.83%)[10].筆者使用超聲波輔助提取法萃取吉首市郊區(qū)4個(gè)鄰近點(diǎn)的假奓包葉種子油，提取率20.75%～27.83%，平均提取率22.71%，高于大戟科白背葉種子油提取率(16.40%～20.27%)[12].4個(gè)采樣點(diǎn)的假奓包葉種子油成分及其含量并不相同，這可能與土質(zhì)和小氣候等環(huán)境條件的差異有關(guān).各采樣點(diǎn)的假奓包葉種子油脂肪酸的種類均不多，最多為8種，最少為4種，共有且含量較高的成分均為亞麻酸、亞油酸、硬脂酸和棕櫚酸.與白背葉相比，假奓包葉的不飽和脂肪酸含量高，飽和脂肪酸含量低.目前，尚未見關(guān)于假奓包葉種子油開發(fā)利用的報(bào)道，本研究結(jié)果可為假奓包葉種子的工業(yè)油甚至食用油開發(fā)利用提供參考.