賀新生 王茂輝 王 玨 王一璞 李小勇 王亞洲 朱曉琴 趙 苗

羊肚菌菌種規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)

賀新生1王茂輝2王 玨2王一璞2李小勇1王亞洲1朱曉琴1趙 苗1

（1. 西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 綿陽 621010；2. 綿陽佐伊精耕科技有限公司，四川 綿陽 621039）

羊肚菌菌種生產(chǎn)是羊肚菌栽培的第一步。使用優(yōu)質(zhì)的菌種，栽培種培養(yǎng)料和營養(yǎng)料袋以小麥為主要原料，使用足夠數(shù)量的的栽培種和營養(yǎng)料袋是羊肚菌栽培成功的關(guān)鍵。從原始菌種選擇、母種生產(chǎn)、原種生產(chǎn)、栽培種生產(chǎn)和營養(yǎng)料袋制作等方面介紹羊肚菌菌種的規(guī)模化生產(chǎn)技術(shù)和流程，并列出具體的數(shù)量參數(shù)和各項(xiàng)注意事項(xiàng)。

羊肚菌；菌種選擇；栽培種；生產(chǎn)技術(shù)；注意事項(xiàng)

羊肚菌系羊肚菌科（Morchellaceae）羊肚菌屬[Dill. ex Pers., Neues Mag. Bot. 1: 116 (1794)]內(nèi)所有種類的統(tǒng)稱，而不是指具體的某個物種。因其菌蓋表面凹凸不平、狀如羊肚而得名。羊肚菌是一種食藥兼用的珍稀菌類，不僅味道鮮美、營養(yǎng)價值高，而且還是一類天然的保健食品，深受廣大消費(fèi)者喜愛。

羊肚菌栽培的基礎(chǔ)是優(yōu)質(zhì)的各級菌種，原始菌種來源必須非常可靠，生產(chǎn)時接種要嚴(yán)格執(zhí)行環(huán)境滅菌和無菌操作，要創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件；栽培種原料配方中要有足夠比例的小麥，栽培種和營養(yǎng)料袋的數(shù)量要足夠。菌種必須在最優(yōu)的播種時節(jié)集中供應(yīng)，從多方面保證栽培的成功和效益。

目前國內(nèi)商業(yè)化栽培羊肚菌的面積已經(jīng)達(dá)到13萬～15萬畝（1畝≈667 m2，下同），對栽培種和營養(yǎng)料袋的需求量大。羊肚菌菌種規(guī)?；a(chǎn)廠家的生產(chǎn)規(guī)模一般為1 000～20 000畝；栽培種生產(chǎn)量為20萬～500萬袋，營養(yǎng)料袋的生產(chǎn)量是其10倍以上。栽培種和營養(yǎng)料袋的生產(chǎn)時間一般只有30～50天，生產(chǎn)期非常集中，每天必須生產(chǎn)20萬～300萬袋甚至更多，菌種生產(chǎn)廠家的生產(chǎn)壓力之大可想而知。廠家為了趕進(jìn)度、提高生產(chǎn)效率，時有不留意細(xì)節(jié)，違反操作規(guī)程的情況，往往使栽培種和營養(yǎng)料袋的質(zhì)量得不到保障，而導(dǎo)致大田栽培大面積的減產(chǎn)以至絕收。為避免此種情況，特鄭重介紹羊肚菌菌種的規(guī)?；a(chǎn)技術(shù)和流程，供廣大生產(chǎn)者參考。

1 原始菌種的選擇

1.1 菌種來源

羊肚菌菌種的分離方法包括鮮菇組織分離、干菇組織分離、多孢分離、單孢分離、單菌核分離、多菌核分離、組孢混合分離等，很多方法得到的菌種可能會不出菇、出菇率很低，或產(chǎn)量、品質(zhì)不佳。因此，生產(chǎn)者自行分離的菌種最好先通過出菇試驗(yàn)，能夠大量形成原基后再進(jìn)行推廣，應(yīng)用于生產(chǎn)。一般來說，購自可靠機(jī)構(gòu)經(jīng)過出菇試驗(yàn)和大面積種植獲得高產(chǎn)的原始菌株母種，較為放心。對自行采集本地野生或栽培的新鮮成熟子實(shí)體，并用可靠的方法純化得到的純菌種，又經(jīng)出菇試驗(yàn)的也可使用。

1.2 羊肚菌栽培物種的主要種類

常見的羊肚菌商業(yè)化栽培物種有：六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等。其他黑色物種，如Mel-21、Mel-20等產(chǎn)量很低，不適合商業(yè)化栽培。

1.3 注意事項(xiàng)

建議采用當(dāng)年的野生或栽培子實(shí)體通過單孢分離得到的純菌種；不建議使用保藏多年的菌種，多次、無限轉(zhuǎn)擴(kuò)的母種，技術(shù)信譽(yù)度不高的機(jī)構(gòu)的菌種，以及所謂多孢菌種、組孢混合、組織分離的菌種，或是分離方法不詳、無法說清原理的菌種。也不建議使用未經(jīng)鑒定的野生物種進(jìn)行分離和大面積栽培，特別是黃色的物種。

2 一級菌種（母種）的生產(chǎn)技術(shù)

2.1 培養(yǎng)基配方

土壤、麩皮、米糠、小麥粒、黃豆粉、木屑、松針、馬鈴薯、干麥芽、鮮麥芽等中的一種或是多種組合（下同）50～200 g，葡萄糖（蔗糖或紅糖）20～25 g，蛋白胨或酵母粉1～2 g，瓊脂20～22 g，pH自然。

2.2 培養(yǎng)基制作

土壤或其他天然原料加1 200～1 300 mL清水，煮沸20 min，過濾后在濾液中加入其他成分和瓊脂，加熱至全部溶解后，分裝在試管中。清理試管口處的殘留培養(yǎng)基，用新的白色乳膠塞封口。采用手提式高壓鍋滅菌，0.1 MPa、121.6°C下保持20 min后自然冷卻，壓力表降到0后，取出擺放成斜面或柱狀。常溫下培養(yǎng)10～15天，培養(yǎng)基表面無明水，備用。

建議使用15′150（mm）的試管，便于在顯微鏡下用2倍、4倍、10倍的物鏡直接原位觀察，18～25′200～250（mm）的大試管，無法在顯微鏡下直接觀察。

2.3 接種與培養(yǎng)

在超凈工作臺上進(jìn)行無菌接種操作，每支原始菌種轉(zhuǎn)接30～50支。采用懸掛接種法，把接種塊懸掛粘貼在斜面上方5～8 mm的試管壁上，不要把接種塊直接放在新試管的斜面上。接種后的試管置于22～24°C恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)5～7天，使斜面長滿菌絲。每天用顯微鏡原位觀察菌絲的生長情況，及時淘汰污染、菌絲生長異常的試管。

2.4 顯微鏡檢測

活力強(qiáng)的母種，試管顯微鏡下原位觀察，單根菌絲粗壯，菌落邊緣的菌絲肉眼可識別，菌落表面淡黃色或黃褐色，試管壁上有氣生菌絲，瓊脂培養(yǎng)基表面有絨毛狀氣生菌絲。絨毛狀氣生菌絲和培養(yǎng)基內(nèi)菌絲粗壯，分枝發(fā)達(dá)，培養(yǎng)基表面及上方氣生菌絲上有大量菌核，有菌絲自融合網(wǎng)絡(luò)，無雜菌，無波浪狀菌絲、纏繞菌絲、細(xì)胞壁破裂菌絲、原生質(zhì)濃縮菌絲及巨大液泡菌絲。

將剛剛長滿試管斜面的菌種，立即轉(zhuǎn)接栽培種。

2.5 注意事項(xiàng)

建議使用復(fù)合配方制備瓊脂培養(yǎng)基，而不使用簡單的PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的配方不可固化，可經(jīng)常改變。低海拔地區(qū)，瓊脂培養(yǎng)基的滅菌不建議采用0.15 MPa、60～90 min的“高壓超級滅菌法”（一種不科學(xué)的方法）。不建議在滅菌后的培養(yǎng)基表面尚有明顯水珠時接種。培養(yǎng)好的母種不宜長時間存放在冰箱中。

3 二級菌種（原種）的生產(chǎn)技術(shù)

3.1 培養(yǎng)基配方

小麥70%～75%，稻殼3%～5%，闊葉樹木屑或玉米芯18%～23%，碳酸鈣1%，石膏1%，含水量60%～62%，pH自然。

3.2 原料預(yù)處理

小麥用清水浸泡24～48 h或煮沸20 min，撈起、瀝干，干/濕為1/1.8～2.0；稻殼浸泡24 h，撈起、瀝干；木屑、玉米芯加水拌勻，堆制發(fā)酵2周后使用。堆制方法：玉米芯、木屑、稻殼混合，加1.2倍水?dāng)嚢杈鶆颍?～1.2 m高的堆，蓋厚膜發(fā)酵，第6～7天翻堆1次，發(fā)酵5天后再次翻堆，4天后攤開晾曬1～2天即可使用。

3.3 拌料、裝瓶、滅菌

將各種輔料與小麥按比例混合均勻，水分含量以用手?jǐn)D壓有水跡而不下滴為度。裝料采用新的體積為750～2 000 mL的帶通氣蓋聚丙烯菌種瓶，不能使用舊的菌種瓶、玻璃瓶和通氣蓋。將培養(yǎng)料裝入菌種瓶中，用清水清洗瓶口、底部和外表面，透氣蓋封口。采用高壓滅菌鍋滅菌，121～125°C下保持2～3 h，自然冷卻。

3.4 接種、培養(yǎng)

接種方法：在超凈工作臺上，用75%乙醇噴灑工作臺，放入待接菌種瓶，點(diǎn)燃酒精燈，在無菌條件下接入一級斜面菌種，斜面長度5～10 mm，每支試管斜面菌種接5～6瓶原種。

接種后置于20～23°C培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)15～25天，菌絲滿瓶后立即使用。

3.6 注意事項(xiàng)

小麥的處理，浸泡和蒸煮擇一即可，不同時進(jìn)行，因?yàn)樾←湹母?濕比達(dá)到1/3時，其含水量會超過70%，滅菌后易發(fā)生表皮破裂而黏連，菌絲無法長滿全部培養(yǎng)料。宜選用厚皮的小麥，如常見的紅皮小麥；而薄皮的小麥表皮容易在蒸煮、滅菌過程中破裂，影響菌種質(zhì)量。經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員一般會采用純麥粒生產(chǎn)原種。不宜使用長期存放的木屑、玉米芯等原料。長滿的原種須盡快使用。

4 三級菌種（栽培種）生產(chǎn)技術(shù)

4.1 培養(yǎng)料配方

小麥70%～75%，木屑或玉米芯一種或兩種的混合物18%～23%，稻殼5%，碳酸鈣1%，石膏1%，輔料含水量60%～62%，pH 6～7。小麥和輔料的預(yù)處理方法與原種相同。

4.2 拌料、裝袋

預(yù)處理后的原料攪拌均勻，水分以手指擠壓有水跡而不成水滴為度。裝袋后套上口圈和封口膜或用報(bào)紙封口。將料袋立放于滅菌框中，每框裝12袋或16袋。當(dāng)天拌料當(dāng)天裝袋、滅菌。

常壓滅菌使用聚乙烯料袋，高壓滅菌采用聚丙烯料袋，大小為17～24′40～50（cm），每袋裝濕料量為0.8～2.0 kg。

4.3 滅菌、接種

可采用高壓滅菌和常壓滅菌兩種方法，將裝滿料袋的滅菌框水平擺放在滅菌架上，單層擺放。高壓滅菌在121～125 °C下保持3～4 h；常壓滅菌在100～105 °C下保持12～16 h。待自然冷卻到60 °C以下時打開滅菌鍋，推出滅菌架，直接推入與滅菌鍋連接的冷卻室，開制冷機(jī)冷卻到25°C以下。接種在無菌條件下進(jìn)行，于料袋一端接入原種后用薄膜或報(bào)紙封口。每瓶原種接30～50袋栽培種，具體根據(jù)原種的容量確定。

4.4 培養(yǎng)及檢測

接種后的菌袋先在22～24°C避光條件下培養(yǎng)10天，后在18～20°C下避光培養(yǎng)7～10天，使菌絲長滿袋，表面形成菌核。

培養(yǎng)料長滿菌絲后，表面呈黃褐色、褐色、紫褐色，較堅(jiān)實(shí)、不松散，敲擊聲音清脆，表面分布不均勻、大小不等的黃褐色斑塊狀菌核。掰開菌種培養(yǎng)料有明顯的羊肚菌菌絲香氣，無霉味、酸味、氨味、土腥味等異味，無霉斑、雜色斑、菌絲斑、石灰粉白斑及紅色菌斑。

4.5 運(yùn)送與存放

運(yùn)送菌種的車輛經(jīng)消毒劑消毒處理后再裝入放有菌袋的周轉(zhuǎn)框，菌袋要在框中分層碼放，不得直接堆碼在車內(nèi)。須在低溫時段將菌種運(yùn)送到栽培現(xiàn)場，長途運(yùn)輸必須使用冷藏車。

尚未運(yùn)送的菌袋暫時存放在經(jīng)過消毒的潔凈室內(nèi)，不堆碼存放，不可放在日光下或被雨水淋。

4.6 播種

羊肚菌栽培種應(yīng)在長滿菌袋后7～10天內(nèi)播種，不使用老化、陳放的菌種。

4.7 注意事項(xiàng)

栽培種生產(chǎn)前要先做好場地的消毒殺菌工作，特別是連續(xù)生產(chǎn)3年以上的老廠房、舊培養(yǎng)室。否則在菌種培養(yǎng)過程中極易出現(xiàn)鏈孢霉、青霉、木霉等雜菌污染，造成慘重?fù)p失。

不宜在栽培種原料配方中加入土壤、河沙、腐殖土、樹葉、食用菌廢料、牛糞粉及彩色金屬片等物料。盡量多用小麥，少用石灰、磷肥、麩皮、玉米粉、黃豆粉、蔗糖等輔料。宜使用北方的玉米芯粉碎料，不使用南方地區(qū)生產(chǎn)的被雨水淋濕、易霉變的玉米芯。輔料使用發(fā)酵料，不要用生料直接拌料裝袋。禁止使用多菌靈、百菌清、硫酸銅、激素、各種殺蟲劑或防蟲劑等。

菌種培養(yǎng)過程中要注意防止高溫?zé)㈦s菌污染、害蟲滋生及菌絲老化等問題。檢測菌袋溫度時，要把溫度計(jì)插在2個貼緊的菌袋之間，不要懸掛在墻上或培養(yǎng)架上檢測。培養(yǎng)料溫度如超過24 ℃，應(yīng)及時采取加大通風(fēng)量、延長通風(fēng)換氣時間、拉大菌袋間距等措施降溫。培養(yǎng)室放入新接種的菌袋前，須經(jīng)消毒劑、殺蟲劑處理，密閉1～2天后打開通風(fēng)1天，再放入菌袋，之后每5～7天進(jìn)行一次消毒和殺蟲。

盡量使用大的菌袋或容器制作栽培種，不用玻璃瓶和小菌種袋。菌袋封口不用透氣蓋、棉塞、泡沫等。菌袋通氣口太小、裝料過于緊實(shí)、培養(yǎng)料水分含量過高，都會導(dǎo)致袋內(nèi)通氣不足，菌絲體無法長滿袋，有的還容易在袋內(nèi)形成厚菌皮，消耗大量營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致菌種活力減弱，影響產(chǎn)量。用報(bào)紙、薄膜封口，菌袋內(nèi)通氣良好，菌絲生長速度快，易在菌袋表面形成大量肉眼可見的菌核。

高壓滅菌達(dá)到規(guī)定時間后，自然冷卻至80°C以下后開鍋；常壓滅菌必須自然冷卻到60°C以下開鍋，切不可剛到滅菌時間就強(qiáng)行開門排氣、冷卻。

5 營養(yǎng)料袋的制作

5.1 配方及用量

麥粒60%～75%，木屑或玉米芯一種或兩種的混合物18%～23%，谷殼5%，石膏1%，碳酸鈣1%，含水量62%～64%，pH自然。原料預(yù)處理方法同原種和栽培種。

一般每畝擺放2 400～3 000袋，擺放前1～2天制備。制作時將原料拌勻后裝入大小為12～14′24～35（cm）的聚乙烯或聚丙烯料袋中，用橡皮筋、細(xì)繩或扎口機(jī)扎緊袋口，平鋪裝入大的滅菌網(wǎng)袋或蛇皮袋中，扎口。每個大滅菌網(wǎng)袋中裝營養(yǎng)料袋80～100袋。

5.2 滅菌與大田培養(yǎng)

大滅菌網(wǎng)袋單層或2層水平錯位擺放在滅菌架上滅菌。高壓滅菌121～125 °C保持3～4 h，常壓滅菌100～105 °C保持12～16 h。自然冷卻后，將整個滅菌網(wǎng)袋裝車，立即運(yùn)送至羊肚菌栽培大田，在1～2天內(nèi)將全部營養(yǎng)料袋打孔或切口后孔口、切口緊貼菌床擺放在菌床上，不得長期存放。

5.3 注意事項(xiàng)

輔料宜使用發(fā)酵料，不使用生料或長期存放的舊料拌料裝袋；切不要用堆碼式、無層架的“蒙古包”式進(jìn)行滅菌；每畝栽培種、營養(yǎng)料袋使用的小麥數(shù)量宜在400 kg以上。

營養(yǎng)料袋內(nèi)不接入任何菌種，是無菌培養(yǎng)料。羊肚菌菌絲可以從土壤中竄到已經(jīng)打孔或有切口的營養(yǎng)料袋內(nèi)，能夠長滿全部的營養(yǎng)料袋，形成肉眼可見的菌核。羊肚菌菌絲吸收料袋內(nèi)部小麥中的營養(yǎng)物質(zhì)，供土壤內(nèi)菌絲體生長，儲存營養(yǎng)物質(zhì)，滿足生長大量子實(shí)體對營養(yǎng)物質(zhì)的需求，保證產(chǎn)量。理論上，羊肚菌子實(shí)體產(chǎn)量在一定范圍內(nèi)與營養(yǎng)料袋數(shù)量呈正相關(guān)關(guān)系。羊肚菌大田栽培要求必須使用營養(yǎng)料袋，無營養(yǎng)料袋也可能會出菇，但形不成產(chǎn)量。營養(yǎng)料袋的擺放時間不能太遲，以在播種后0～15天為宜，超過30天或更久，會導(dǎo)致嚴(yán)重減產(chǎn)或絕收。規(guī)?；脑耘嗾咦詈枚鄿?zhǔn)備一些常壓滅菌鍋，多地點(diǎn)、集中時間生產(chǎn)出營養(yǎng)料袋，及時擺放入田。

用營養(yǎng)液替代固體營養(yǎng)料袋，也可以出菇，但由于目前營養(yǎng)液的配方、施用量、施用時間等技術(shù)參數(shù)還不夠準(zhǔn)確，不適宜大面積推廣。用煮熟的土豆、番薯、小麥、玉米等的顆粒直接放在羊肚菌菌床的土壤表面，也能夠出菇并獲得一定產(chǎn)量，但蒸煮工作量過大，無法滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求，也不適宜推廣。

中國發(fā)明授權(quán)專利ZL201610334688.6公開了一種無營養(yǎng)料袋的栽培方法，實(shí)質(zhì)是把栽培種直接放在土壤表面培養(yǎng)羊肚菌子實(shí)體，其栽培種的用量為常規(guī)用種量的5～10倍或更多，菌種生產(chǎn)壓力巨大，生產(chǎn)成本很高，規(guī)模化生產(chǎn)的新鮮子實(shí)體每畝產(chǎn)量已達(dá)到500～1 000 kg，生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益顯著，已經(jīng)有許多機(jī)構(gòu)在推廣應(yīng)用。

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The large-scale production technology of Morel spawn

He Xinsheng Wang Maohui Wang Jue Wang Yipu Li Xiaoyong Wang Yazhou Zhu Xiaoqin Zhao Miao

(1. Southwest University of Science and Technology, School of Life Science and Engineering, Mianyang, Sichuan, 621010, China; 2. Mianyang Zoe Precision Technology Co., Ltd. Youxian District, Mianyang, Sichuan 621039, China)

The production of morel spawn is the first step in morel cultivation. The key to the success of morel production is to use high-quality strains of all levels and a sufficient number of spawn and nutrient bags with wheat as the main raw material. This article introduces the large-scale production technology and production process ofspawn from the aspects of original spawn selection, mother spawn production, original spawn production, cultivated spawn production and nutrient bag production, and lists the specific quantity parameters and various precautions.

Morel; spawn selection; cultivated spawn; production technology; matters needing attention

S646

B

2095-0934（2020）05-346-05