耿寧　劉易偉　卿云光

摘要：建立一種操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠、測(cè)定成本較低的檢測(cè)刺梨原汁中總黃酮含量的方法。通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，方法定量限為7.00mg/100g，在常見樣品濃度和檢出最高限的測(cè)試結(jié)果變異系數(shù)（CV值）分別為2.3%、1.9%，4個(gè)刺梨原汁樣品中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/g，平均回收率為100.3%。

關(guān)鍵詞：刺梨原汁;總黃酮;含量測(cè)定

刺梨是貴州的特色食品資源[1]，含有豐富的活性成分黃酮類物質(zhì)，貴州省生產(chǎn)的刺梨鮮果，加工產(chǎn)品主要以刺梨原汁為主，然后再利用刺梨原汁加工成濃縮汁、飲料等多種營養(yǎng)食品和保健品[2]，刺梨原汁中含有豐富的活性成分總黃酮，是一種很強(qiáng)的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻止癌癥的發(fā)生，改善心腦血管疾病的癥狀[3] [4]。建立一種適合刺梨原汁中總黃酮含量的測(cè)定方法，為檢測(cè)機(jī)構(gòu)和相關(guān)企業(yè)提供更適合的檢測(cè)方法，提高檢測(cè)效率，也對(duì)于規(guī)范刺梨產(chǎn)品加工企業(yè)質(zhì)量管理、強(qiáng)化市場(chǎng)監(jiān)管、促進(jìn)貴州刺梨產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義和作用。

一、儀器、試劑及材料

1.儀器

TU-1901紫外可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

2.對(duì)照品

蘆丁對(duì)照品（供UV法測(cè)定，含量為92.4%），中國食品藥品檢定研究院。

3.試劑

無水乙醇、甲醇，均為分析純。

4.樣品

“刺梨原汁”（貴州天瀧集團(tuán)投資開發(fā)有限公司，樣品1）;“刺梨原汁”（貴州貴定敏子食品有限公司，樣品2）;“刺梨原汁”（貴州山果王健康實(shí)業(yè)有限公司，樣品3）;“刺梨汁”（貴州綠視野綠色開發(fā)有限公司，樣品4）。

二、方法與結(jié)果

1.試樣制備

稱取1g（精確至0.01g）的試樣至25ml容量瓶中，用乙醇定容，搖勻后，超聲提取20min，室溫靜置30min，取上清液1mL于25mL比色管中，用甲醇定容后待測(cè)。

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

以蘆丁為對(duì)照品，精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品109.7mg（含量為92.4%）于100mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇定容至刻度，得1.014mg/mL蘆丁儲(chǔ)備溶液。依次稀釋至濃度為1.01μg/mL、2.03μg/mL、3.04μg/mL、4.06μg/mL、5.07μg/mL、6.08μg/mL蘆丁對(duì)照品溶液，以甲醇溶液為零點(diǎn)，于360nm處測(cè)量吸光度。以蘆丁對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線，線性方程為y=0.0299x-0.0003，R2=0.9999，表明蘆丁含量在0～6.08μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，經(jīng)計(jì)算，該方法在0～380mg/100g范圍內(nèi)，樣品中總黃酮濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

3. 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）實(shí)驗(yàn)

樣品空白獨(dú)立測(cè)試20次實(shí)驗(yàn)，計(jì)算結(jié)果為0.63 mg/100g，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差（s）為2.278×10-16。

根據(jù)LOD=樣品空白平均值+3s，即LOD=0.63+3×2.278×10-16，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位，LOD=0.63 mg/100g。

為增加數(shù)據(jù)可信度，且檢測(cè)樣品的結(jié)果范圍為55～90 mg/100g，取LOQ值=10×LOD值，即LOQ=6.30 mg/100g，最終取值LOQ=7.00mg/100g。

4.精密度實(shí)驗(yàn)

精確稱取1號(hào)樣品12份，其中6份分別加入3mg蘆丁對(duì)照品，按照“1.試樣制備”方法處理并測(cè)定，結(jié)果如表1所示。結(jié)果顯示本方法在常見樣品濃度和檢出最高限的測(cè)試結(jié)果變異系數(shù)（CV值）分別為2.3%、1.9%，均符合GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》中相關(guān)規(guī)定，表明方法精密度良好。

5. 樣品檢測(cè)及回收率實(shí)驗(yàn)

分別取樣品1、2、3、4號(hào)樣品做加標(biāo)回收試驗(yàn)，然后按照“1.試樣制備”處理，結(jié)果如表2所示，樣品1、2、3、4中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/mL，且平均回收率為100.3%，表明方法準(zhǔn)確性好。

三、結(jié)語

綜上所述，本文以蘆丁為對(duì)照品，通過紫外分光光度法測(cè)定總黃酮含量，操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠、測(cè)定成本較低，在總黃酮含量為7～380mg/100g范圍內(nèi)，精密度良好，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確，適用于刺梨原汁中總黃酮的測(cè)定。測(cè)試樣品1、2、3、4中總黃酮含量分別為80.24、72.34、86.69、74.39mg/100g，而相關(guān)報(bào)道中提到刺梨鮮果中總黃酮含量高達(dá)0.89%[4]，說明在加工過程中，刺梨鮮果中的大部分黃酮類化合物殘留在刺梨果渣內(nèi)，如何將總黃酮類化合物更有效地提取到刺梨原汁中，本方法可以為下一步研究奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 貴州省刺梨發(fā)展現(xiàn)狀分析[J]. 劉易偉，楊舒清.? 食品安全導(dǎo)刊（下旬刊），2020，（第2期）

[2].黔南州刺梨產(chǎn)業(yè)鏈分析[J]. 羅桃，王玉奇，陳文本.? 中國林副特產(chǎn)，2020，（第5期）：106-107

[3] 刺梨中活性物質(zhì)的提取與性能探討[J].陳代秀，夏偉麗，胡思前，郭艷華，張玉敏.? 化肥設(shè)計(jì)，2020，58（02）：13-17

[4] 刺梨黃酮的精制及其抗氧化活性比較[J].張匯慧，吳彩娥，范龔健，等. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，39 （3）：101-105

[5] 刺梨總黃酮的含量測(cè)定及資源利用[J].杜薇，劉國文. 食品科學(xué)，2003（01）：112-114.

作者簡(jiǎn)介：耿寧 ，貴州省黔南州都勻人，食品安全檢測(cè)員，工程碩士。