陶秀林,范 夫,姜 明
(平湖市農業(yè)綜合行政執(zhí)法隊,浙江 平湖 314200)
BALB/c Nude 小鼠是進行腫瘤學新療法研究的最常用品種。它是一種無被毛,胸腺和T細胞缺失,B細胞和NK細胞正常,可以結合補體的近交系免疫缺陷鼠,由Charles River Japan公司用BALB/cABom-nu和BALB/cAnNCrj-nu進行交配和回交獲得,由于是免疫系統(tǒng)的不完善和近交系的先天生育能力較低,飼養(yǎng)和繁殖的營養(yǎng)條件顯得尤為嚴格,不僅飼料的營養(yǎng)配方要全面,面對不同周齡的小鼠飼養(yǎng)方式也需要進行相應改變,濕飼料、粉飼料和顆粒飼料對其純合子(nu/nu)乳鼠存活率和體重增長會有較大的影響。因此針對不同周齡的乳鼠用不同性狀的飼料,以提高仔鼠的生存率和體重。
1.1實驗動物與飼料
1.1.1實驗動物 SPF/ELITE級BALB/c Nude妊娠20日的雜合子孕鼠,240只,由浙江維通利華實驗動物技術有限公司提供,生產許可證號:SCXK(浙)2018-0001。
1.1.2顆粒飼料 由北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產的顆粒飼料,選擇SPF大小鼠生長繁殖飼料,飼料配方為:玉米、豆粕、魚粉、面粉、麩皮、食鹽、磷酸氫鈣、石粉;其中蛋白質24.02%、脂肪12.95%、碳水化合物63.03%;顆粒直徑為12 mm,長度為200~400 mm,放入飼料盒中自由攝取。
1.1.3濕飼料 采用以上固體顆粒飼料,以固體飼料(kg):水(L)比1∶1方式配置浸泡20 min后使用,放入飼料盒中自由攝取。
1.1.4粉飼料 采用以上固體顆粒飼料,用打粉機打碎,過3號50目篩,濾除顆粒飼料,放入飼料盒中自由攝取。
1.1.5固、濕飼料搭配飼養(yǎng) 采用以上固體顆粒飼料和濕飼料質量比為1:1配置,放入飼料盒中,固、濕飼料用隔板隔開,自由攝取。
1.2分組和實驗方法
1.2.1分組 將240只SPF/ELITE級BALB/c Nude妊娠20日的雜合子孕鼠進行飼養(yǎng)1 d,選取21日分娩的初生乳鼠,選取帶乳鼠的母鼠120只,雌雄各半,分為4組,雌雄均勻,分別為顆粒飼料組、濕飼料組、粉飼料組、固濕飼料搭配組。
1.2.2方法 在乳鼠出生3 d后鑒別出純合子(nu/nu)和雜合子(nu/-),僅保留純合子(nu/nu),21 d精確離乳后對其首次稱重,以后每周稱重一次,直至第70 d,共8次稱重。
1.2.3乳鼠存活率 剔除全部雜合乳鼠的最佳時間應該在新生乳鼠出生24 h內,超過3 d則會極大地影響純合裸小鼠的正常生長發(fā)育[1],由于24 h內很難分辨出純合子,所以在第3 d進行。分出的純合子(nu/nu)乳鼠每日記錄存活情況。
1.2.4飼養(yǎng)環(huán)境 動物飼養(yǎng)于SPF隔離器環(huán)境中,溫度控制在20~24℃,相對濕度40%~70%,明暗交替12 h,換氣次數(shù)20~50次/h。墊料和飼料均經過鈷60輻射滅菌。采用自動飲水系統(tǒng),飲水自由,飼料營養(yǎng)成分符合國家標準[2];飼料置于開放式飼料盒內,自由覓食。
2.1體重生長 BALB/c Nude乳鼠離乳后,每組雄性和雌性乳鼠在3周齡至10周齡體重變化見表1和表2。
表1 不同飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)雄性BALB/c nude乳鼠在各周齡的體重(g)
表2 不同飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)雌性BALB/c nude乳鼠在各周齡的體重(g)
根據(jù)表1顯示,雄性BALB/c nude乳鼠顆粒飼料組與濕飼料組在6周齡時體重有比較顯著性差異(P<0.05),與固、濕飼料搭配組在3周齡、4周齡和6周齡,體重比較上均有顯著性差異(P<0.05)。
根據(jù)表2顯示,雌性BALB/c nude乳鼠顆粒飼料組與濕飼料組3周齡、4周齡、5周齡、9周齡體重比較上有顯著性差異(P<0.05),與粉飼料組3周齡、4周齡、7周齡、9周齡,與固、濕飼料搭配組3周齡、4周齡、5周齡、7周齡、9周齡的體重比較亦存在顯著性差異(P<0.05)。
2.2存活率 BALB/c Nude乳鼠分娩后第3天,從乳鼠中分出純合子(nu/nu)的乳鼠每日記錄存活情況,結果見表3,未見明顯差異。
表3 不同飼養(yǎng)方式的仔鼠存活率
BALB/c Nude鼠屬于嚙齒類動物,門牙生長較快,需經??幸杂参锲纺パ?,故飼料經常做成顆粒狀,軟硬適度,以符合啃咬特性[3]。市場上的實驗動物飼料大體分為繁殖飼料和維持飼料,BALB/c Nude鼠的離乳周期為3周,對于這一階段的動物進行特殊的飼養(yǎng)方式,會對后期的體重和存活率產生一些影響。
從結果上看,對于BALB/c Nude雄性鼠,用固濕飼料混合飼養(yǎng)對3周齡至4周齡的體重增加相對于顆粒飼料飼養(yǎng)有顯著性差異(P<0.05);對于BALB/c Nude雌性鼠,用濕飼料和粉飼料飼養(yǎng),在3周齡至4周齡的體重增加上與顆粒飼料組比較有顯著性差異(P<0.05),用固濕飼料搭配對3周齡至5周齡的體重增加相對于顆粒飼料組有顯著性差異(P<0.05),7周齡和9周齡也有統(tǒng)計學差異(P<0.05);而在存活率上,雖然固濕飼料混合飼養(yǎng)在存活率上有一定上升趨勢,但未有統(tǒng)計學意義。通過以上結論,可以判斷在BALB/c Nude母鼠妊娠期,通過固濕飼料混合飼養(yǎng)方式,可以有效提高3周齡-5周齡內的小鼠體重。
BALB/c Nude鼠銷售最佳時間是4周齡至6周齡,往往客戶對于這一階段周齡的動物體重要求也很高,通過固濕飼料搭配飼養(yǎng)方式可以有效提高這一階段動物的體重,也有提升動物存活率的趨勢,降低了BALB/c Nude鼠淘汰率,從而增加企業(yè)的利潤空間。