林文云，段桂華，萬蘋,

昆明理工大學醫(yī)學院，昆明650500；2 云南省第一人民醫(yī)院

類固醇受體共激活因子家族(SRCs)為一類相對分子質(zhì)量約為160 kDa的輔激活因子，家族成員包括SRC-1、SRC-2、SRC-3，主要與核受體結(jié)合并輔助其激活靶基因的轉(zhuǎn)錄[1]。SRCs可與多種細胞核激素受體(NRs)結(jié)合，如雌激素受體(ER)、雄激素受體(AR)、糖皮質(zhì)類固醇激素受體(GR)、鹽皮質(zhì)類固醇激素受體(MR)、孕激素受體(PR)、維生素D受體(VDR)、類維生素A受體(RXR)、維甲酸受體(RAR)、甲狀腺激素受體(TR)及過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)等。SRCs與核受體及其他轉(zhuǎn)錄因子共同組成了復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，直接或間接參與多條信號通路的調(diào)控，進而參與多種細胞的生理生化過程。在SRCs中，SRC-1和SRC-3均被證實為促癌基因，在多種癌組織中異常表達；SRC-3被定義為一種新的癌基因，可作為評估和預(yù)測部分腫瘤預(yù)后的指標[2]。SRCs在許多信號通路中都是關(guān)鍵共激活因子，能激活信號通路及其下游效應(yīng)因子，從而調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄，促進癌細胞的增殖、遷移、侵襲和化學治療耐受等[3]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了復(fù)雜多樣的作用。因此，SRCs靶向藥物研究對惡性腫瘤的治療有著非常重要的意義和價值。本文將SRCs及其抑制劑、激動劑在惡性腫瘤發(fā)生與治療中的研究進展綜述如下。

1 SRCs在惡性腫瘤發(fā)生中的作用

最先發(fā)現(xiàn)，SRCs在激素依賴性腫瘤，尤其是與雌激素相關(guān)腫瘤中異常表達。SRC-3在人乳腺癌中可變擴增頻率為4.8%～9.5%，其mRNA在31%～64%的乳腺癌中呈現(xiàn)高表達，而蛋白水平在10%的乳腺癌中升高[4]。同時也有研究發(fā)現(xiàn)，SRC-3過度表達本身不但可以增強雌激素依賴性腫瘤細胞如T-47D、MDA-MB-361的增殖，還可以消除他莫昔芬和純化抗雌激素藥物引起的細胞周期阻滯效應(yīng)[5]。

隨著研究的深入，SRCs還被發(fā)現(xiàn)于生殖系統(tǒng)腫瘤(如卵巢腫瘤[6，7]、前列腺腫瘤[8]、子宮內(nèi)膜異位癥[9])、骨腫瘤(如成骨性骨腫瘤、成軟骨性骨腫瘤、骨巨細胞瘤、造血源性腫瘤)、消化道腫瘤(如肝癌[10]、胃癌[11]、大腸癌[12]、食管癌)等多種惡性腫瘤中均存在異常表達。Jin等[13]對骨髓瘤細胞RPMI-8266研究發(fā)現(xiàn)，SRC-3通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)途徑調(diào)節(jié)Cx-43表達，促進骨髓瘤細胞增殖和遷移；共同培養(yǎng)RPMI-8266細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)增加Cx43表達，敲除BMSCs中SRC3的細胞則下調(diào)Cx43表達。羅磊[14]研究表明，SRC-3在肝癌組織中陽性表達率(55.3%)遠高于相應(yīng)的癌旁組織(10.6%)，肝癌組織中SRC-3基因轉(zhuǎn)錄水平亦高于其相應(yīng)的癌旁組織；Anzick等[10]發(fā)現(xiàn)，肝癌細胞株中存在SRC-3基因的高水平擴增，說明SRC-3表達水平與肝癌發(fā)生存在密切關(guān)系。張琪[15]采用免疫組化法檢測SRC-3在胃癌、不典型增生組織及正常黏膜組織中的表達情況，發(fā)現(xiàn)在三種組織中SRC-3陽性表達率呈逐漸降低的趨勢(48%、32%、10%)，胃癌組織中的表達明顯高于正常黏膜組織。這與包括Hance等[11]在內(nèi)的多數(shù)研究結(jié)論相一致，說明SRC-3在胃癌中過度表達與胃黏膜增生甚至癌變相關(guān)，并與胃癌不良預(yù)后相關(guān)。Rohira等[16]研究表明，在甲狀腺癌細胞系中，SRC的高表達與達沙替尼耐藥性相關(guān)；進一步分析達沙替尼耐藥的細胞系，發(fā)現(xiàn)PI3K途徑和AKT途徑的下游效應(yīng)蛋白富集，并證明了蛋白富集與達沙替尼耐藥性增加呈正相關(guān)。因此，SRC高表達可以激活PI3K途徑，而PI3K途徑激活導致了達沙替尼耐藥性增加。

2 SRCs抑制劑在惡性腫瘤治療中的作用

由于SRCs主要通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用與類固醇激素受體結(jié)合，缺乏高親和力的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所以SRCs的靶向藥物開發(fā)一直困難重重。

早期，一些研究小組通過化合物篩選，發(fā)現(xiàn)了一些干擾SRCs與ER和PPARG等NRs結(jié)合的化合物[17，18]。后續(xù)的研究確定了更多的SRCs-NR干擾化合物，并獲得了這些小分子化合物的構(gòu)效關(guān)系信息[19]。但令人遺憾的是，研究結(jié)果顯示這些化合物效果不明顯，未能進入臨床試驗階段。

Wang等[20]確定了棉酚為SRC-1和SRC-3的小分子抑制劑(SMI)，這是首次確定小分子抑制劑可以直接作用于SRCs蛋白。相較于之前的小分子干擾化合物，小分子抑制劑能特異性地作用于SRCs，使治療更具有目的性；但其半數(shù)抑制濃度太高，限制了進一步的應(yīng)用。隨后，該課題組發(fā)現(xiàn)蟾毒靈可作為潛在的SRC-3抑制劑。蟾毒靈是一個強心苷類藥物，能依賴蛋白酶體促進SRC-1和SRC-3的降解，在體內(nèi)和體外實驗中都能有效阻斷癌細胞生長。其水溶性衍生物3-磷酸蟾毒靈，不但解決了蟾毒靈難以溶解的問題，并在原位乳腺癌模型中有效抑制了腫瘤生長，效果與蟾毒靈相當[21，22]。但是，蟾毒靈無法克服的心臟毒性限制了其臨床應(yīng)用。

近年來，高通量篩選與藥物化學優(yōu)化技術(shù)的結(jié)合使擁有更強效力的SRCs小分子抑制劑被鑒定出來，其中最具有的代表性的是SI-2。SI-2可通過與SRC-3的直接物理相互作用，選擇性地降低SRC-3在細胞中的轉(zhuǎn)錄活性和蛋白濃度；SI-2能選擇性地誘導乳腺癌細胞凋亡，半數(shù)抑制濃度為3～20 nmol/L，在乳腺癌小鼠模型中有效地抑制原發(fā)性腫瘤生長；同時，SI-2還能抑制乳腺癌細胞的遷移。毒理學研究也發(fā)現(xiàn)，SI-2對心臟和其他主要器官均無明顯毒性[23]。腫瘤干細胞(CSC)是指具有干細胞特性的腫瘤細胞，它們在腫瘤組織中極少量存在，具有自我復(fù)制和多向分化潛能。Rohira等[24]研究表明，CSC與腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)，而SRC-1/SRC-3在體內(nèi)外均能靶向CSC，增強該細胞群的作用。SI-2在體內(nèi)體外均能抑制SRC-1/SRC-3對CSC的作用，表明SI-2有望成為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的靶向藥物。以上研究表明，在腫瘤治療中SI-2是非常有潛力的SRC-3靶向藥物[25，26]。

3 SRCs激動劑在惡性腫瘤治療中的作用

Wang等[25]在尋找SRCs小分子抑制劑進行高通量篩選中，偶然發(fā)現(xiàn)4-乙基-2,6-二吡啶-3-甲基環(huán)己酮(MCB-613)是一種有效的SRCs小分子激動劑(SMS)，能有效作用于SRCs的3個成員。在體外實驗中，MCB-613可強效刺激SRCs的轉(zhuǎn)錄活性，增加SRCs與其他共激活因子的相互作用，并顯著誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激以及活性氧(ROS)產(chǎn)生。MCB-613選擇性且可逆地結(jié)合SRC-3的RID結(jié)構(gòu)域，選擇性殺死乳腺、前列腺、肺、肝臟的惡性腫瘤細胞，而未對小鼠原代肝細胞和小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)產(chǎn)生明顯毒性。在小鼠乳腺癌MCF-7細胞異種移植模型中，MCB-613能有效抑制腫瘤生長，且不引起如小鼠體質(zhì)量減輕等不良反應(yīng)。

腫瘤分子靶向治療的目標是設(shè)計針對特定靶點的藥物，選擇性殺死腫瘤細胞，傳統(tǒng)思路是抑制關(guān)鍵癌基因的活性?？紤]到SRC的致癌作用，使用SRC SMS治療癌癥似乎是違反常識的。然而，與正常細胞相比，由于癌細胞快速增殖的特點，癌細胞蛋白質(zhì)合成/折疊和代謝的增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)已經(jīng)處于高水平的壓力之下。在激動劑如MCB-613的作用下，癌細胞的蛋白產(chǎn)量大大超出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的運行能力，造成大量未折疊蛋白積累，引起未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)。UPR引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可介導細胞凋亡反應(yīng)，以清除受損過度的細胞。相對的，正常細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力較小，同等濃度的激動劑并不足以引起UPR。因此，在一定濃度范圍內(nèi)，MCB-613能選擇性地殺死癌細胞，而對正常細胞毒性較小。MCB-613的發(fā)現(xiàn)表明使癌基因過度表達也是癌癥治療的一個可行策略，為新藥開發(fā)提供了新思路和廣闊空間。MCB-613的出現(xiàn)打破了一種固有模式，為腫瘤分子靶向治療開辟了一條新路。

4 展望

目前為止，大多數(shù)的靶向治療方案都是通過抑制一條促進細胞生長的關(guān)鍵信號通路來達到治療目的,而腫瘤細胞通常轉(zhuǎn)換其他的生長因子通路發(fā)生耐藥[26]。SRCs作為多種信號通路傳入的樞紐，具有整合各種轉(zhuǎn)錄信息的作用，并且SRCs能與多種轉(zhuǎn)錄因子或蛋白復(fù)合形成復(fù)合體，進而使自身發(fā)生磷酸化、泛素化、甲基化或乙?；刃揎梉27]，高度特異地調(diào)節(jié)靶向基因轉(zhuǎn)錄，激活相應(yīng)信號通路，使相應(yīng)的腫瘤產(chǎn)生高度抗藥性，藥物反應(yīng)、治療效果和預(yù)后都相對較差。這也使得SRC-3能作為評估和預(yù)測部分腫瘤預(yù)后的一個指標。

SRCs在腫瘤中的作用機制尚未明確，多數(shù)研究結(jié)論建立在實驗觀察的基礎(chǔ)上，其深層的分子機制研究并未得到全面揭示。由于SRCs的獨特結(jié)構(gòu)，使得其非常難以被小分子抑制劑靶向，進而在小分子抑制劑的尋找和鑒定上困難重重。高通量篩選技術(shù)的廣泛應(yīng)用雖然在這方面起到了非常重要的作用，也發(fā)現(xiàn)了部分能有效作用于SRCs的小分子抑制劑，但尚未有進入臨床試驗階段的靶向藥物的報道。SRCs激動劑MCB-613是個非常有價值的發(fā)現(xiàn)，它突破了傳統(tǒng)的抑制促癌基因表達從而抑制腫瘤生長的治療思路，通過使癌基因過表達，進而引發(fā)癌細胞的過度應(yīng)激反應(yīng)，有害物質(zhì)在癌細胞內(nèi)大量積累，造成癌細胞凋亡，而對正常細胞的影響較小，不良反應(yīng)相對較少。MCB-613代表了一種腫瘤治療的新思路，在抑制劑研發(fā)非常困難的情況下，為靶向治療提供了更多的可能性，在其他促癌基因中也非常值得嘗試。

目前較多的研究表明，SRCs在多條細胞生長促進信號通路中都發(fā)揮著關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)作用，是一個非常有潛力的抗腫瘤作用靶點。SRCs在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中作用機制研究的深入，有助于更好地了解腫瘤發(fā)生的分子機制，為腫瘤分子靶向治療藥物的研究指明方向；其抑制劑和激動劑也能在多種腫瘤治療中發(fā)揮重要作用，進而為臨床治療服務(wù)，給患者帶來治療的希望。