安妮

偽中間型葡萄球菌是由Devriese等人于2005年報(bào)道并命名的一種新的凝固酶陽性葡萄球菌。此菌是寄生于貓、狗皮膚和黏膜上最常見的一種凝固酶陽性菌之一，是一種機(jī)會(huì)致病菌，可引起皮膚和軟組織等感染。

由于抗生素的廣泛使用，葡萄球菌的耐藥性逐漸增加。目前，國內(nèi)對于金黃色葡萄球菌的耐藥性調(diào)查研究已經(jīng)較為廣泛，但對于偽中間型葡萄球菌的研究還較為少見。本研究擬用瓊脂稀釋法對寵物源偽中間型葡萄球菌的藥物敏感性進(jìn)行了檢測，為指導(dǎo)寵物臨床合理使用抗菌藥物提供依據(jù)，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

1.1……藥物原液的制備

受試藥物配制方法如表1。配制的藥液用質(zhì)控菌株進(jìn)行測定，最小抑菌濃度質(zhì)控范圍內(nèi)合格后分裝，于-20℃或冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2……菌液制備

將已純化的偽中間型葡萄球菌在哥倫比亞血瓊脂平板上劃線培養(yǎng)后，取單個(gè)菌落接種于2毫升的MH肉湯中，37℃恒溫振蕩培養(yǎng)4～8小時(shí)，用MH肉湯稀釋菌液，使稀釋菌液達(dá)到0.5麥比濁度，再按1∶100稀釋菌液至含菌量約為1×106CFU/毫升，備用。同時(shí)制備質(zhì)控菌葡萄球菌。

1.3……抗菌藥稀釋

將保存于-20℃的抗菌藥物解凍，然后把抗菌藥物原液按二倍稀釋法在試管中稀釋到需要的濃度，取2毫升藥液放進(jìn)做好標(biāo)記的平皿中。

1.4……藥物瓊脂平板的制備

用25毫升滅菌移液管吸取18毫升冷卻至50～60℃MH瓊脂，加入已有2毫升抗菌藥物的平皿中，混勻。同時(shí)每種藥物設(shè)有兩個(gè)空白瓊脂平板。在超凈工作臺中風(fēng)干冷卻后，立即使用。

1.5……細(xì)菌接種

將稀釋好的菌液加入到無菌的96孔板中，然后用多點(diǎn)接種儀蘸取適量菌液，按照藥物濃度從低到高的順序，接種到瓊脂平板表面。將接種好菌液的瓊脂平板放置在超凈工作臺內(nèi)，直到菌液被瓊脂完全吸干。再將平板放入培養(yǎng)箱，37℃恒溫培養(yǎng)18～24小時(shí)。同樣接種質(zhì)控菌株作為整個(gè)試驗(yàn)過程的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

1.6……結(jié)果判定

當(dāng)接種MH平板上的所有接種點(diǎn)的菌生長良好，而無接種細(xì)菌的平皿均無菌落生長，試驗(yàn)組完全不見細(xì)菌生長的最低藥物濃度為該藥物對細(xì)菌的最小抑菌濃度。以最小抑菌濃度規(guī)定的敏感、中介、耐藥折點(diǎn)值范圍判斷結(jié)果。受試藥物的敏感折點(diǎn)值判斷標(biāo)準(zhǔn)見表2。

試驗(yàn)中144株偽中間型葡萄球菌對8種藥物的敏感性見表3。

環(huán)丙沙星屬于氟喹諾酮類抗生素，此類抗生素具有抗菌譜廣、殺菌力強(qiáng)、體內(nèi)分布廣泛等優(yōu)點(diǎn)，近年來在寵物臨床上逐漸成為常用的藥物。本研究中，環(huán)丙沙星的耐藥率在50%以上，可能是由于臨床上使用頻率增加所致。

青霉素和氨芐西林同屬青霉素類β-內(nèi)酰胺抗生素，頭孢唑啉、頭孢曲松和頭孢噻肟則屬于頭孢菌素類β-內(nèi)酰胺抗生素。青霉素類β-內(nèi)酰胺抗生素與頭孢菌素類β-內(nèi)酰胺抗生素對不同的PBPs具有不同的親和力，這可能是本研究中偽中間型葡萄球菌對兩類藥物耐藥率不同的原因之一。而且青霉素和氨芐西林在臨床上使用也較頭孢唑林、頭孢曲松和頭孢噻肟早，這可能也是前兩者的耐藥率較后兩者高的原因之一。

阿米卡星、慶大霉素屬于氨基糖苷類抗生素。本研究中，慶大霉素的耐藥率達(dá)到24.3%，雖然此藥已在臨床廣泛應(yīng)用，但是其耐藥性維持時(shí)間短，停藥一段時(shí)間后易恢復(fù)敏感性，因此分析這是慶大霉素的耐藥率依然能維持較低值的原因。阿米卡星較慶大霉素耐藥率更低，只有4.9%，這可能是由于其臨床應(yīng)用較后者少。

試驗(yàn)表明，寵物源偽中間型葡萄球菌的耐藥率極高。為了達(dá)到最佳的治療效果并最大限度地減少偽中間型葡萄球菌耐藥的蔓延，需要合理地使用抗生素，有針對性地選擇用藥，加強(qiáng)對寵物源細(xì)菌耐藥性的監(jiān)測和監(jiān)管，避免寵物源耐藥菌向人類的傳播。