沈瑤，陳玲

目前全球結(jié)核病形勢(shì)日益嚴(yán)峻。結(jié)核病是由單一致病菌——結(jié)核分枝桿菌（Mtb）感染所致死亡人數(shù)最多的一種傳染性疾病，也是全球十大疾病死因之一。潛伏結(jié)核感染（LTBI）通常是指體內(nèi)存在Mtb，但無(wú)活動(dòng)性結(jié)核?。ˋTB）表現(xiàn)如結(jié)核病癥狀、組織器官損傷及病原學(xué)依據(jù)等，而機(jī)體對(duì)Mtb刺激產(chǎn)生持續(xù)性免疫應(yīng)答的一種狀態(tài)［1］。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球約有25%的人口感染Mtb，其中多數(shù)患者處于LTBI狀態(tài)，如不進(jìn)行相關(guān)治療，則有5%～10%會(huì)進(jìn)展為ATB［2］，若宿主免疫力降低，則這一風(fēng)險(xiǎn)更高，如HIV陽(yáng)性的LTBI者發(fā)展為ATB的可能性是HIV陰性LTBI者的30倍［3］。對(duì)LTBI高風(fēng)險(xiǎn)人群進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和早期干預(yù)能有效降低LTBI發(fā)生率，減少傳染源［2］。由于LTBI者體內(nèi)的Mtb處于半休眠或休眠狀態(tài)，且這種狀態(tài)下的Mtb基本不繁殖、數(shù)量也較少，因此臨床主要根據(jù)機(jī)體對(duì)Mtb抗原的免疫反應(yīng)進(jìn)行診斷［4］。目前，臨床主要采用結(jié)核菌素試驗(yàn)（TST）、體外γ-干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）檢測(cè)宿主免疫反應(yīng)，但其并非是LTBI的特異性診斷方法，無(wú)法區(qū)分ATB與LTBI［5］。因此尋找LTBI相關(guān)蛋白抗原成為目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。但目前關(guān)于LTBI診斷性抗原的研究結(jié)果差異較大，可能與研究人群、環(huán)境、遺傳等因素有關(guān)。且目前針對(duì)嬰幼兒、HIV陽(yáng)性、使用免疫抑制劑等免疫狀態(tài)異常人群LTBI的檢測(cè)研究較少。Mtb可在機(jī)體免疫系統(tǒng)功能下降時(shí)由半休眠或休眠狀態(tài)重新復(fù)蘇并再次繁殖，進(jìn)而進(jìn)展成為ATB［6］，因此，對(duì)于上述特殊人群LTBI的檢測(cè)尤為重要。本文針對(duì)具有潛在診斷價(jià)值的LTBI相關(guān)蛋白抗原的研究進(jìn)展做一綜述，以為L(zhǎng)TBI的診斷提供參考。

1 LTBI的發(fā)生發(fā)展

Mtb屬于胞內(nèi)寄生菌，侵入人體后可被巨噬細(xì)胞吞噬，引起固有免疫反應(yīng)，活化的巨噬細(xì)胞雖可在一定條件下清除Mtb［7］，但僅依賴固有免疫反應(yīng)無(wú)法徹底清除Mtb，而被感染的巨噬細(xì)胞可釋放大量抗原，其經(jīng)樹(shù)突細(xì)胞加工后呈遞給特異性T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而引發(fā)獲得性免疫應(yīng)答反應(yīng)，其中巨噬細(xì)胞被T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子激活，進(jìn)而發(fā)揮殺傷或清除Mtb的作用［8］；另外，Mtb可通過(guò)一系列免疫逃逸機(jī)制在巨噬細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期存活［9］。肉芽腫形成被認(rèn)為是宿主針對(duì)早期LTBI免疫反應(yīng)的主要特征，肉芽腫組織存在缺氧、饑餓、低pH值的微環(huán)境，可為機(jī)體對(duì)峙病原體創(chuàng)造一個(gè)相對(duì)封閉的環(huán)境，并誘導(dǎo)Mtb進(jìn)入半休眠或休眠狀態(tài)［10］，使Mtb處于低代謝狀態(tài)，基本不繁殖，進(jìn)而逃避或抵抗宿主免疫攻擊，最終形成LTBI狀態(tài)［11］。但當(dāng)宿主免疫力下降時(shí)，休眠的Mtb可復(fù)蘇、繁殖、播散，最終導(dǎo)致ATB［12-15］。綜上，人體感染Mtb后有3種情況：一是宿主免疫系統(tǒng)徹底清除Mtb；二是Mtb快速增殖，發(fā)展為ATB；三是宿主免疫系統(tǒng)對(duì)Mtb的清除作用與Mtb的抗清除作用處于動(dòng)態(tài)平衡，形成LTBI狀態(tài)，當(dāng)宿主免疫力降低或細(xì)菌毒力增加時(shí)則導(dǎo)致ATB［16］。

2 LTBI的診斷方法

目前針對(duì)LTBI的診斷缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，臨床主要通過(guò)免疫學(xué)檢測(cè)間接診斷［4］，包括基于細(xì)胞免疫的TST和IGRA，及基于體液免疫的血清學(xué)檢測(cè)，其中TST使用的是多種分枝桿菌粗制抗原的混合物，包含牛分枝桿菌（BCG）、Mtb及非Mtb（NTM）的抗原，因此該方法對(duì)BCG疫苗接種和NTM感染存在交叉反應(yīng)，鑒于我國(guó)普遍進(jìn)行BCG疫苗接種、存在一定比例的NTM感染，導(dǎo)致TST檢測(cè)Mtb的特異度并不高。而IGRA使用的是Mtb特有而B(niǎo)CG缺失的差異區(qū)域（RD）上由Rv3874基因編碼的培養(yǎng)濾液蛋白10（CFP-10）和Rv3875基因編碼的早期分泌靶向抗原6（ESAT-6），與TST相比，IGRA能夠排除BCG疫苗感染，對(duì)檢測(cè)Mtb的特異度較高［17-18］，但因該方法無(wú)法區(qū)分ATB與LTBI，極大限制了其診斷LTBI的臨床指導(dǎo)意義和應(yīng)用價(jià)值［5］。除了細(xì)胞免疫學(xué)方法，基于檢測(cè)抗體的血清學(xué)檢測(cè)也是有望成為檢測(cè)LTBI的重要方法，其具有特異度高、耗時(shí)短和易于批量檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，特別適用于高結(jié)核病負(fù)擔(dān)和資源有限的國(guó)家［5］。但目前血清學(xué)檢測(cè)診斷LTBI的效果并不理想，不同的研究結(jié)果差異較大［19-21］，可能與使用抗原的特異性和免疫原性有關(guān)。由于目前針對(duì)LTBI的診斷方法存在上述問(wèn)題與不足，因此尋找具有更高診斷價(jià)值的生物標(biāo)志物仍是LTBI診斷困境的突破點(diǎn)。

3 LTBI相關(guān)蛋白抗原

研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核病不同感染狀態(tài)均具有特異性的抗原特征譜，通過(guò)免疫分析可以區(qū)分不同感染狀態(tài)［22-23］。一些模擬LTBI環(huán)境的低氧或饑餓模型研究發(fā)現(xiàn)，Mtb可通過(guò)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄或蛋白表達(dá)而適應(yīng)不同的外界環(huán)境，使用體外LTBI模型與全基因組、轉(zhuǎn)錄組分析相結(jié)合，鑒定出在LTBI期間表達(dá)上調(diào)的基因，稱為L(zhǎng)TBI相關(guān)蛋白抗原，其編碼蛋白為潛伏期相關(guān)蛋白抗原［24-26］，主要包括休眠相關(guān)蛋白抗原、復(fù)蘇促進(jìn)因子（Rpf）、饑餓刺激因子和毒素-抗毒素系統(tǒng)（TAS）。

3.1 休眠相關(guān)蛋白抗原 細(xì)菌由復(fù)制狀態(tài)進(jìn)入持續(xù)性非復(fù)制狀態(tài)稱為“休眠”，Mtb處于休眠狀態(tài)時(shí)會(huì)產(chǎn)生潛伏感染相關(guān)基因的特異性表達(dá)，主要包括休眠調(diào)節(jié)單元（DosR）、持久性缺氧反應(yīng)（EHR）基因組、LuxR轉(zhuǎn)錄子家族和Lsr2相關(guān)基因四大類基因，這些基因的表達(dá)產(chǎn)物稱為休眠相關(guān)蛋白抗原。ALBRETHSEN等［26］通過(guò)構(gòu)建低氧、高一氧化氮模型模擬肉芽腫微環(huán)境，利用基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)了48個(gè)在休眠狀態(tài)下表達(dá)明顯上調(diào)的基因，命名為DosR，而Mtb應(yīng)對(duì)肉芽腫微環(huán)境壓力的第一反應(yīng)是由DosR完成，DosR是Mtb由復(fù)制狀態(tài)過(guò)渡到休眠狀態(tài)的關(guān)鍵調(diào)控子，可增加Mtb的適應(yīng)性［27-29］。但缺氧期間DosR基因的表達(dá)是短暫的，大多數(shù)DosR基因在表達(dá)上調(diào)24 h后恢復(fù)到基線水平。調(diào)控DosR基因后，Mtb通過(guò)EHR調(diào)控相關(guān)調(diào)節(jié)因子和酶促反應(yīng)使其能夠長(zhǎng)期處于休眠狀態(tài)，這種EHR約由230個(gè)基因參與，其表達(dá)獨(dú)立于DosR基因介導(dǎo)的初始缺氧反應(yīng)［25］。LuxR轉(zhuǎn)錄子家族基因是一類在革蘭陰性菌群體感應(yīng)LuxR/LuxI環(huán)路中起重要調(diào)控作用的蛋白。FANG等［30］在體外低氧模型中發(fā)現(xiàn)，敲除LuxR轉(zhuǎn)錄子家族成員Rv0195可降低細(xì)胞存活率和Mtb從休眠狀態(tài)中快速恢復(fù)的能力，證實(shí)了Rv0195與細(xì)菌致病性相關(guān)，具有休眠調(diào)節(jié)功能。Lsr2相關(guān)基因是一類組蛋白樣DNA結(jié)合蛋白，具有抑制基因表達(dá)的作用［31-32］，還可參與Mtb休眠狀態(tài)的建立。BARTEK等［33］證明了Lsr2相關(guān)基因是Mtb適應(yīng)氧含量變化所必需的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其可使Mtb不斷地適應(yīng)微環(huán)境中的氧含量變化，特別是維持Mtb在低含氧量的肉芽腫中長(zhǎng)期存活，是造成宿主持續(xù)感染的重要因素。研究表明，休眠相關(guān)蛋白抗原具有診斷LTBI的潛在價(jià)值，目前應(yīng)用前景較高的主要有HspX（Rv2031c）、Rv1733c、NarK2（Rv1737c）、PfkB（Rv2029c）、Hrp1（Rv2626c）、Rv2628、NrdZ（Rv0570）、Rv1813c、Rv1996、Rv2004c、Rv2028c 和 DevR（Rv3133c）［28，34-40］。休眠相關(guān)蛋白抗原具有較高免疫原性，且數(shù)量較多，未來(lái)可用于LTBI的診斷及ATB新型疫苗的研究。

3.2 Rpf 休眠菌復(fù)蘇是LTBI進(jìn)展為ATB的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，Rpf在其中起到了重要作用［36，39］。1998年 MUKAMOLOVA 等［41］首次從藤黃微球菌的培養(yǎng)液中分離出1個(gè)大小約16 KD的蛋白質(zhì)，其可促進(jìn)高G+C含量的革蘭陽(yáng)性菌（如藤黃微球菌、BCG和Mtb）的復(fù)蘇和生長(zhǎng)，被命名為Rpf。Mtb可編碼5種具有與Rpf相似特征和特性的蛋白，如RpfA（Rv0867c）、RpfB（Rv1009）、RpfC（Rv1884c）、RpfD（Rv2389c） 和RpfE（Rv2450c）。Rpf含有溶菌酶結(jié)構(gòu)域，有利于休眠菌細(xì)胞壁的溶解、重構(gòu)，釋放胞內(nèi)小分子物質(zhì)來(lái)參與細(xì)菌復(fù)蘇，對(duì)包括Mtb在內(nèi)的休眠放線菌復(fù)蘇具有關(guān)鍵作用［42-43］。體外研究表明，在Mtb基因組中敲除單個(gè)Rpf基因，并不能完全抑制休眠菌復(fù)蘇［44］，這可能是因?yàn)镸tb Rpf基因的表達(dá)動(dòng)力學(xué)以不同程度重疊的獨(dú)特形式出現(xiàn)。另有研究表明，RpfA與RpfD在LTBI人群中表現(xiàn)出了良好的免疫原性，且可特異性誘導(dǎo)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞增殖，提高細(xì)胞因子表達(dá)能力［36，45］。SERRA-VIDAL等［46］研究也發(fā)現(xiàn)，RpfD刺激潛伏感染組產(chǎn)生的γ-干擾素（IFN-γ）水平高于ATB組，提示RpfD抗原有助于鑒別LTBI與ATB?？梢?jiàn)Rpf在LTBI進(jìn)展為ATB的過(guò)程中發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用，故其具有潛在的基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用價(jià)值。

3.3 饑餓刺激因子 饑餓刺激因子是由細(xì)菌適應(yīng)饑餓條件而表達(dá)上調(diào)的一組編碼基因。 BETTS等［47］通過(guò)基因組微陣列和蛋白組學(xué)分析，觀察休眠狀態(tài)的Mtb在饑餓狀態(tài)下基因及蛋白質(zhì)表達(dá)情況，篩選出與LTBI相關(guān)的特異性蛋白抗原，并將其命名為饑餓刺激因子。饑餓刺激因子對(duì)抑制細(xì)菌在休眠狀態(tài)的轉(zhuǎn)錄過(guò)程、能量代謝、脂質(zhì)合成和細(xì)胞分裂有一定作用。饑餓刺激因子是與LTBI相關(guān)的特異性蛋白抗原，其中Rv2653c、Rv2654c、Rv2659c和Rv2660c均表現(xiàn)出較好抗原性，且更易被LTBI人群識(shí)別，具有潛在的診斷價(jià)值［48-50］。李邦印等［49］研究發(fā)現(xiàn)，Rv2659c和Rv2660c在LTBI中較ATB能使宿主產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞因子，并且使分泌IFN-γ/腫瘤壞死因子α（TNF-α）/白介素（IL）-2的多功能CD4+T淋巴細(xì)胞分?jǐn)?shù)增加。綜上，饑餓刺激因子有較好的抗原性，可用于LTBI診斷標(biāo)志物的研究及臨床應(yīng)用。

3.4 TAS TAS通常由2個(gè)基因的操縱子組成，其中一個(gè)具有毒性效應(yīng)，可促使細(xì)胞進(jìn)入休眠狀態(tài)，另一個(gè)則是抗毒素，可抵消毒性效應(yīng)以允許細(xì)胞生長(zhǎng)［51］。TAS可以抑制細(xì)菌在生長(zhǎng)表型和非生長(zhǎng)表型（休眠狀態(tài)）之間的轉(zhuǎn)換。Mtb在應(yīng)激條件下能夠降解抗毒素，釋放毒素干擾或改變細(xì)菌DNA復(fù)制、三磷酸腺苷（ATP）和細(xì)胞壁合成，促進(jìn)細(xì)菌快速適應(yīng)環(huán)境變化，進(jìn)而發(fā)揮毒素-抗毒素活性，使其進(jìn)入休眠狀態(tài)［52-53］。生物信息學(xué)分析顯示，Mtb基因組中TAS至少有88個(gè)，包括同源的62個(gè)基因?qū)Γ?7個(gè)VapC家族、9個(gè)MazEF家族、3個(gè)relE家族、2個(gè)ParD家族和1個(gè)HigB家族）以及另外26個(gè)新型TAS，其中已發(fā)現(xiàn)VapC-MT（Rv0596c-Rv0595c）、VapBC-MT3（Rv0301-Rv0300）、MazF-MT6與RNA結(jié)合后可啟動(dòng)毒性，從而抑制蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)停滯，進(jìn)入LTBI［54-56］，因此，推測(cè)TAS對(duì)LTBI具有潛在的診斷價(jià)值，但目前關(guān)于TAS免疫原性的報(bào)道較少，有待進(jìn)一步研究。

4 單個(gè)蛋白抗原在LTBI檢測(cè)中的應(yīng)用

4.1 PfkB 6-磷酸果糖激酶PfkB屬于DosR家族成員之一，對(duì)維持休眠狀態(tài)Mtb的長(zhǎng)期生存有重要作用［57］。有研究表明，PfkB能誘導(dǎo)較強(qiáng)的T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)［58］。近年多項(xiàng)研究已證實(shí)，不同人群的LTBI對(duì)PfkB的免疫反應(yīng)均強(qiáng)于ATB，提示了 PfkB 在免疫學(xué)診斷 LTBI中的重要性［28，34-35，59-61］。ARROYO 等［36］比 較 DosR（NarK2，PfkB 和 Rv2628）、RpfA、RpfD、重組融合蛋白ESAT-6-CFP10（E6-C10）和結(jié)核菌素（PPD）抗原刺激潛伏感染組和ATB組的外周血單核淋巴細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞上清液IFN-γ水平，發(fā)現(xiàn)PfkB是區(qū)分潛伏感染組和ATB組的最優(yōu)單一抗原，其特異度和靈敏度分別為76.2%、90.0%，診斷潛伏感染和ATB的準(zhǔn)確率分別為78.3%、88.9%。一項(xiàng)針對(duì)中國(guó)人群的研究顯示，PfkB抗原鑒別潛伏感染和ATB的靈敏度和特異度分別為84.3%、80.0%［35］，推測(cè)PfkB抗原有望成為鑒別LTBI和ATB的診斷標(biāo)志物。

4.2 Rv2028c Rv2028c屬于休眠調(diào)節(jié)單元，編碼一種假想蛋白，而假想蛋白是一類目前功能未知但又真實(shí)存在的蛋白。趙慧敏等［62］招募了三組不同Mtb感染狀態(tài)的人群：LTBI組、ATB組和健康人群組，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)Rv2028c和6-kDa早期分泌抗原靶標(biāo)（ESAT-6）特異性IFN-γ水平，結(jié)果顯示，LTBI組中Rv2028c特異性IFN-γ水平最高，ROC曲線下面積高達(dá)0.938 8，因此推測(cè)Rv2028c具有作為L(zhǎng)TBI免疫學(xué)診斷候選抗原的潛力。

4.3 HspX α-晶狀體蛋白HspX屬于DosR蛋白之一，對(duì)維持Mtb在宿主體內(nèi)的持續(xù)感染具有重要作用［63］。BAUMANN等［64］研究發(fā)現(xiàn)，HspX具有較強(qiáng)的B細(xì)胞免疫原性，這種免疫反應(yīng)在ATB患者中較弱，而在疑似LTBI人群中檢測(cè)到HspX抗體滴度卻很高［65-66］。ZHANG等［67］認(rèn)為，Mtb的分泌蛋白Ag85B、HspX和ESAT6可作為鑒別ATB和LTBI的優(yōu)勢(shì)初步篩選抗原，并用ELISA檢測(cè)了針對(duì)這3種分泌蛋白的免疫球蛋白（Ig）G血清抗體，結(jié)果表明診斷LTBI的最佳抗原組合是HspX/ESAT6，其特異度和靈敏度分別為75.0%、76.7%。CASTRO-GARZA等［68］研究表明，與ATB患者相比，LTBI患者具有更高的抗HspX IgM水平（P=0.003）；并且參考RABAHI等［69］的分類標(biāo)準(zhǔn)將受試人群分為健康組、ATB組、既往LTBI組以及新近LTBI組（1年內(nèi)PPD試驗(yàn)轉(zhuǎn)陽(yáng)性），研究發(fā)現(xiàn)，新近LTBI組與其他組間HspX特異性IgG和IgM水平有明顯差異，基于OD492值的ROC曲線分析結(jié)果顯示其靈敏度和特異度均為100.0%，其中用于識(shí)別新近LTBI患者的IgG截?cái)嘀禐?.7，IgM截?cái)嘀禐?.2。以上結(jié)果支持了將HspX作為診斷LTBI的血清標(biāo)志物這一觀點(diǎn)。

4.4 Rv2004c Rv2004c是休眠狀態(tài)的Mtb適應(yīng)缺氧環(huán)境相關(guān)的蛋白之一，具有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞表位，有望成為結(jié)核病診斷和疫苗研發(fā)的候選物［70］。在結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家印度，DODDAM等［71］研究發(fā)現(xiàn)，LTBI組的Rv2004c特異性IgG抗體滴度明顯高于健康對(duì)照組和ATB組（P＜0.000 1），健康人群組、LTBI組和ATB組的中位數(shù)抗體滴度分別為0.3、0.9和0.6，推測(cè)與ATB和健康人群相比，Rv2004c在LTBI中可引起更為強(qiáng)烈的體液免疫反應(yīng)，提示Rv2004c可作為血清標(biāo)志物診斷LTBI。

5 聯(lián)合蛋白抗原在LTBI診斷中的應(yīng)用

不同人群以及不同個(gè)體間存在遺傳背景和免疫水平的差異，另外Mtb蛋白抗原在LTBI的不同階段表達(dá)量、宿主和病原等因素使得采用任何單一蛋白抗原作為L(zhǎng)TBI的診斷標(biāo)志物均會(huì)產(chǎn)生30%～40%的假陽(yáng)性率［72］，因此，為了增加診斷LTBI的特異度，減少不同人群或個(gè)人免疫差異的影響，采用多個(gè)蛋白抗原聯(lián)合診斷LTBI以彌補(bǔ)單個(gè)蛋白抗原診斷LTBI的不足，是更有應(yīng)用前景的方案。

5.1 PfkB、HspX、Acg、Rv2627c、DevR和Rv3716c 6種蛋白抗原組合 有研究表明，Mtb蛋白抗原與LTBI和ATB均相關(guān)，因此基于Mtb蛋白抗原的免疫色譜方法診斷LTBI的靈敏度欠佳［73］。有研究者進(jìn)一步從DosR家族中選擇PfkB、HspX、Acg（Rv2032）、Rv2627c、DevR（Rv3133c） 和 Rv3716c用作診斷蛋白抗原，將受試者分為L(zhǎng)TBI組、ATB組、健康人群組和非ATB組，檢測(cè)其血清中特異性抗體，結(jié)果顯示，該聯(lián)合蛋白抗原診斷LTBI患者的靈敏度為75.0%，特異度為88.1%，其陽(yáng)性預(yù)測(cè)值與陰性預(yù)測(cè)值分別為77.4%和86.7%［74］，提示這6種蛋白抗原組合可提高現(xiàn)有LTBI試紙的診斷效能。

5.2 Apa、HspX、PE_PGRS26、Rv0494、PhoY1、GrpE、SecA2和PPE3 8種蛋白抗原組合 賀仁忠等［75］利用商品化的MtbprotTM結(jié)核分枝桿菌蛋白芯片（廣州博翀生物科技有限公司生產(chǎn)）與健康人群組、LTBI組和ATB組臨床血清標(biāo)本雜交，篩選組間IgG/IgM抗體差異響應(yīng)蛋白，用差異較大的100個(gè)Mtb蛋白定制蛋白芯片，通過(guò)大樣本臨床血清標(biāo)本檢測(cè)進(jìn)一步篩選出LTBI新型診斷候選標(biāo)志物8個(gè)，包括Apa（Rv1860）、HspX（Rv2031c）、PE_PGRS26（Rv1441c）、Rv0494、PhoY1（Rv3301c）、GrpE（Rv0351）、SecA2（Rv1821）和PPE3（Rv0280），采用204份臨床血清標(biāo)本進(jìn)行臨床驗(yàn)證，結(jié)果顯示，該組合診斷LTBI的靈敏度及特異度分別為83.10%和90.90%，ROC曲線下面積為0.941，顯示其具體較高的LTBI診斷價(jià)值。由于LTBI人群個(gè)體差異較大，多個(gè)抗原的組合可提高LTBI診斷的靈敏度及特異度。

5.3 Rv0569、Rv1996、Rv2030、HspX、Hrp1、Rv2628、Rv3129、Rv3131和DevR 9種蛋白抗原組合 SHI等［76］將Mtb休眠狀態(tài)下表達(dá)量最高的25個(gè)DosR蛋白抗原［77］定制成膜陣列，檢測(cè)健康對(duì)照組、LTBI組以及ATB組的抗體水平，通過(guò)線性判別分析鑒定出一組包含9種DosR蛋白抗原的最優(yōu)組合，這9種蛋白抗原分別為Rv0569、Rv1996、Rv2030、HspX（Rv2031c）、Hrp1（Rv2626c）、Rv2628、Rv3129、Rv3131和DevR（Rv3133c），進(jìn)一步用獨(dú)立臨床血清樣本（健康對(duì)照組14例、ATB組10例、LTBI組10例）評(píng)估上述9種蛋白抗原組合預(yù)測(cè)ATB和LTBI的準(zhǔn)確性，測(cè)試結(jié)果顯示，其預(yù)測(cè)ATB和LTBI的靈敏度分別為100%（10/10）和90%（9/10），特異度均為100%（14/14），整體檢測(cè)正確率為97.1%，證實(shí)該蛋白抗原組合對(duì)于區(qū)分Mtb感染的不同狀態(tài)有較高的靈敏度和特異度。

6 小結(jié)

全球結(jié)核病形勢(shì)日益嚴(yán)峻，LTBI者是結(jié)核病的主要人群，因此早期診斷LTBI并對(duì)高危人群進(jìn)行預(yù)防性治療對(duì)結(jié)核病的防控具有重要意義。LTBI相關(guān)蛋白抗原主要包括休眠相關(guān)蛋白抗原、Rpf、饑餓刺激因子、TAS等，這些LTBI相關(guān)蛋白抗原在未來(lái)結(jié)核病新型疫苗與LTBI診斷試劑的研發(fā)中具有較好的應(yīng)用前景。

作者貢獻(xiàn)：沈瑤進(jìn)行文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)、文獻(xiàn)/資料的收集與整理，撰寫論文；陳玲進(jìn)行文章的可行性分析，進(jìn)行論文及英文的修訂，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，并對(duì)文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無(wú)利益沖突。