章斐然，謝澳斯，張金海，蔡曉敏，陳君填，李 威

(汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 1.胃腸外科，2.中醫(yī)科，廣東 汕頭 515041)

大腸癌為我國常見腫瘤，居我國癌癥發(fā)病及死亡的第4位[1]，嚴(yán)重威脅人民健康。大腸癌患者行外科手術(shù)是獲得治愈機(jī)會的必要選擇。大腸癌手術(shù)對腸道造成不同程度損傷，干擾腸道微生態(tài)，且手術(shù)作為應(yīng)激源，可進(jìn)一步破壞腸道屏障，導(dǎo)致腸道微生態(tài)變化[2]。術(shù)后輔以化療成為大多數(shù)大腸癌患者的必經(jīng)途徑。術(shù)后化療會進(jìn)一步導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)[3]。化療細(xì)胞毒性藥物直接或間接殺死免疫效應(yīng)細(xì)胞，可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能低下或免疫無能[4]。四君子湯為祖國醫(yī)學(xué)經(jīng)典藥方，出自宋代《太平惠民合劑局方》，由白術(shù)、茯苓、人參、炙甘草等組成，具有健脾益氣功效，臨床主要用于脾虛證治療[5]。臨床上惡性腫瘤患者化療后往往存在脾虛證[6]。動物研究[7-8]顯示健脾益氣類方藥能通過調(diào)節(jié)腸道菌群，改善患者免疫功能。然而對四君子湯對大腸癌術(shù)后化療患者作用研究的報(bào)道較少。本研究采用健脾益氣方藥配合化療，觀察四君子湯加減對大腸癌術(shù)后化療患者腸道菌群及機(jī)體免疫功能的影響，探討該方對化療患者的腸道菌群調(diào)節(jié)及免疫作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年10月—2018年10月在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胃腸外科行大腸癌根治手術(shù)患者60例，其中男性32例，女性28例，平均年齡(56.4±10.2)歲。采用病例隨機(jī)對照研究方法，將入選患者分成中藥加化療組(30例)和單獨(dú)化療組(30例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理結(jié)果確診大腸癌，腫瘤分期Ⅰ～Ⅲ期，術(shù)后恢復(fù)良好，術(shù)后1個(gè)月內(nèi)行mFOLFOX6方案化療；年齡在18～60歲之間；無重大基礎(chǔ)疾病，化療用藥前后2周無使用相關(guān)抗生素。排除標(biāo)準(zhǔn)：腸造口患者；有嚴(yán)重內(nèi)分泌、心血管、血液、肝、腎等系統(tǒng)疾病以及骨髓抑制患者；孕婦及哺乳期婦女；明確表示拒絕中醫(yī)藥相關(guān)治療患者。本研究經(jīng)汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 治療組口服健脾益氣方藥(四君子湯制劑加減)聯(lián)合大腸癌一線標(biāo)準(zhǔn)化療mFOLFOX6方案(奧沙利鉑135 mg/m2，靜滴3 h；亞葉酸鈣200 mg/m2，靜滴2 h，5-氟尿嘧啶400 mg/m2，靜脈注射；5-氟尿嘧啶3 000 mg/m2，持續(xù)泵注48 h，在推注5-氟尿嘧啶后執(zhí)行)，2周為1個(gè)周期，術(shù)后第1次化療；對照組單純化療，方案同治療組。四君子湯制劑組方：黃芪30 g，當(dāng)歸6 g，西洋參5 g，白術(shù)12 g，敗醬草30 g，白花蛇舌草30 g，茯苓30 g，山藥30 g，薏苡仁30 g，甘草6 g。100 mL/次，2次/d，10 d為1個(gè)療程，化療前10 d開始服用，連續(xù)服用10 d。

1.2.2 腸道菌群檢測 取新鮮糞便3～5 g于無菌瓶內(nèi)并0.5 h內(nèi)送檢。取0.5 g糞便，加入無菌稀釋液稀釋，根據(jù)不同菌種要求，選擇不同稀釋度，分別接種于相應(yīng)培養(yǎng)基上。需氧菌(腸桿菌、腸球菌)置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。厭氧菌(雙歧桿菌、乳桿菌)采用Gas Pak厭氧培養(yǎng)，48～72 h后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果以每克糞便中菌落形成單位(colony forming unit，CFU)的常用對數(shù)值(lg CFU/g)表示。

1.2.3 其他觀察指標(biāo) 免疫功能：分別于化療前10 d及化療后4 d抽取靜脈血1 mL，用流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD4/CD8)和NK細(xì)胞百分比。生活質(zhì)量：采用卡氏功能狀態(tài)(Karnofsky performance status，KPS)評分評估患者的生活質(zhì)量，治療前后KPS評分提高≥10分為改善；減少≥10分為降低；增加或減少＜10分為穩(wěn)定。骨髓抑制程度評價(jià)：采用世界衛(wèi)生組織抗癌藥物急性及亞急性毒性反應(yīng)分度標(biāo)準(zhǔn)，0～Ⅰ度為輕微，Ⅱ度為中等，Ⅲ～Ⅳ度為嚴(yán)重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

2組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)。見表1。

表1 2組一般資料比較 (n=30)

2.2 2組治療前后腸道菌群變化比較

大腸癌術(shù)后化療患者的腸道菌群失衡，中藥加化療組雙歧桿菌及乳桿菌較單純化療組增多(均P＜0.05)，腸桿菌及腸球菌無明顯變化(P＞0.05)，說明四君子湯可促進(jìn)益生菌生長，見表2。

2.3 2組治療前后免疫功能比較

中藥加化療組CD3、CD4、CD4/CD8水平較單獨(dú)化療組高(均P＜0.05)，兩組NK細(xì)胞百分比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表2 2組治療前后腸道菌群變化比較 (n=30，±s，lg CFU/g)

表2 2組治療前后腸道菌群變化比較 (n=30，±s，lg CFU/g)

1)：與單純化療組相比，P＜0.05。

治療后5.94±0.30 5.84±0.25組別中藥加化療組單純化療組雙歧桿菌治療前6.18±0.26 6.02±0.25治療后8.12±0.311)5.83±0.36乳桿菌治療前7.52±0.29 7.22±0.41治療后8.62±0.361)6.94±0.21腸桿菌治療前7.02±0.23 6.82±0.34治療后7.01±0.15 6.92±0.21腸球菌治療前5.82±0.27 5.62±0.36

表3 2組治療前后免疫功能比較 (n=30，±s，%)

表3 2組治療前后免疫功能比較 (n=30，±s，%)

1)：與單純化療組相比，P＜0.05。

組別中藥加化療組單純化療組CD3治療前60.28±10.06 59.42±10.35治療后66.02±11.311)58.23±11.26 CD4治療前32.12±8.29 30.22±8.41治療后37.68±9.361)29.96±0.31 CD8治療前24.02±7.23 23.82±8.04治療后23.31±8.15 22.92±7.81 CD4/CD8治療前1.52±0.57 1.44±0.66治療后1.90±0.601)1.31±0.75 NK細(xì)胞治療前23.45±10.87 20.16±9.97治療后22.96±11.87 20.86±11.07

2.4 2組治療后KPS評分及骨髓抑制程度比較

中藥加化療組患者治療后KPS評分高于單純化療組(P＜0.05)，見表4；2組患者骨髓抑制程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表5。

表4 2組治療后KPS評分對比 (n=30)

表5 2組治療后骨髓抑制程度對比 (n=30)

3 討論

越來越多的臨床及實(shí)驗(yàn)證實(shí)中醫(yī)藥與腸道微生態(tài)關(guān)系密切，中草藥作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑，對人體的生理代謝功能發(fā)揮重要作用[9-10]。馬祥雪等[10]假定中醫(yī)的“證”或“癥”就是人體腸道微生態(tài)變化產(chǎn)生的某些繼發(fā)反應(yīng)導(dǎo)致的“表觀現(xiàn)象”，通過藥物調(diào)理腸內(nèi)菌群的平衡，對“證”施以影響，對證下藥，達(dá)到治療疾病的目的，因此腸道微生態(tài)的微小變化都可以對“證”產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。本研究結(jié)果顯示，中藥加化療組患者在服用四君子湯后，腸道內(nèi)雙歧桿菌及乳桿菌較單純化療組增多，說明四君子湯可促進(jìn)腸道正常菌群生長。免疫功能指標(biāo)CD3、CD4、CD4/CD8水平較單純化療組高，提示四君子湯能增強(qiáng)大腸癌術(shù)后化療患者的免疫功能，其具體機(jī)制是單獨(dú)作用還是通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)來協(xié)同作用，尚需進(jìn)一步研究。

綜上所述，以四君子湯為代表的健脾益氣方藥能調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)，減少腸道菌群紊亂，并能增強(qiáng)患者機(jī)體免疫力，給腫瘤患者的綜合治療提供了有利條件，值得臨床推廣應(yīng)用。本研究拓寬了中醫(yī)方藥在腫瘤化療領(lǐng)域的有效應(yīng)用。