沙麗華，劉華蘭，周小龍

（惠陽三和醫(yī)院，廣東 惠州）

0 引言

育齡期女性的陰道內(nèi)存有各種微生物，例如：雙歧桿菌、腸球菌、鏈球菌、乳桿菌、大腸桿菌、支原體、白假絲酵母菌、原蟲等，均寄生于陰道內(nèi)與宿主、周圍環(huán)境之間互相制衡，使陰道內(nèi)微生態(tài)體系維持在動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。大量研究也證實(shí)[1]，在臨床上無論是病因明確的陰道炎還是原因不明的陰道炎均存有不同程度陰道微生態(tài)失衡問題。因此，陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)體系在陰道感染性疾病診治中的應(yīng)用越來越廣泛?，F(xiàn)為進(jìn)一步明確陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)在女性下生殖道感染診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值，特作如下研究。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選擇2018 年1 月至2020 年1 月在我院就診的200 例下生殖道感染女性患者為研究對(duì)象，均為女性，年齡在20～35 歲之間，平均（25.5±3.6）歲，病程1～13 個(gè)月，平均（6.09±4.66）個(gè)月，所有患者均伴不同程度白帶增多、外陰瘙癢、異味等癥狀，且在納入研究前2 周內(nèi)未曾使用抗菌藥物，排除妊娠、哺乳期使用陰道藥物，或伴有子宮器質(zhì)性病變，或檢測(cè)前3d 有性生活，處于月經(jīng)期的患者。

1.2 診斷方法

1.2.1 儀器和試劑

PREVITMColor Gram 全自動(dòng)革蘭氏染色儀（購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司）；Conmet-400 多功能高倍鏡檢分析系統(tǒng)（購(gòu)自山東仕達(dá)思生物公司）；陰道微生態(tài)檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自青島市三凱醫(yī)學(xué)科技有限公司），其包括β-葡萄糖醛酸苷酶、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶、過氧化氫、酸堿度（PH 值）、凝固酶。

1.2.2 樣本采集

婦科醫(yī)師在患者的陰道側(cè)穹隆取適量陰道分泌物置于無菌試管，以0.9%氯化鈉溶液稀釋，2h 內(nèi)完成檢驗(yàn)。對(duì)于無性生活史的患者，用棉簽在陰道側(cè)壁1/3 取樣本即可。

1.2.3 樣本檢測(cè)

將試劑盒從（2～8）℃ 取出，平衡到常溫（10～30）℃開始使用。撕掉鋁箔包裝，取出反應(yīng)裝置并輕輕揭掉鋁箔條，將反應(yīng)裝置避光放置。用棉簽采集樣品，放入軟試管中，加400μL 稀釋液，反復(fù)擠壓棉簽，使樣品溢出。在反應(yīng)裝置的五個(gè)孔中每孔滴加一滴稀釋后的樣品，每滴約35μL，之后在“唾液酸苷酶”反應(yīng)孔中滴加一滴顯色液A。在37℃環(huán)境中反應(yīng)7 分鐘后在“凝固酶”反應(yīng)孔中滴加一滴顯色液B，讓其繼續(xù)反應(yīng)3 分鐘，然后在10 分鐘內(nèi)判讀結(jié)果。過氧化氫（反應(yīng)裝置第一個(gè)反應(yīng)孔）：顯紅色、紫色或藍(lán)紫色為陰性，顯藍(lán)色陽性。唾液酸苷酶（反應(yīng)裝置第二個(gè)反應(yīng)孔）：不顯色為陰性，顯紫色為陽性，強(qiáng)陽性時(shí)顯藍(lán)色。白細(xì)胞酯酶（反應(yīng)裝置第三個(gè)反應(yīng)孔）：不顯色為陰性，顯藍(lán)色或綠色為陽性。β-葡萄糖醛酸苷酶（反應(yīng)裝置第四個(gè)反應(yīng)孔）不顯色為陰性，顯藍(lán)色或綠色為陽性。凝固酶（反應(yīng)裝置第五個(gè)反應(yīng)孔）：不顯色或黃色為陰性，紫色為陽性。同時(shí)應(yīng)用pH 試紙測(cè)到陰道樣本pH值。此外，對(duì)樣本制作涂片在顯微鏡檢測(cè)陰道微生態(tài)情況。

1.2.4 鏡檢操作

①菌群多樣性：Ⅰ級(jí)：在油鏡下每視野可見1-3 種細(xì)菌菌群，Ⅱ級(jí)：在油鏡下每視野可見4-6 種細(xì)菌菌群，Ⅲ級(jí)：在油鏡下每視野可見7-9 種細(xì)菌菌群，Ⅳ級(jí)：在油鏡下每視野可見10 種或以上細(xì)菌菌群。②菌群密度：Ⅰ級(jí)：在油鏡下每視野可見1-10 個(gè)細(xì)菌數(shù)，Ⅱ級(jí)：在油鏡下每視野可見10-100 個(gè)細(xì)菌數(shù)，Ⅲ級(jí)：在油鏡下每視野可見100-1000 個(gè)細(xì)菌數(shù)，Ⅳ級(jí)：在油鏡下每視野可見1000 個(gè)或以上細(xì)菌數(shù)。

1.3 陰道微生態(tài)判斷標(biāo)準(zhǔn)

①正常陰道微生態(tài)：菌群多樣性在Ⅱ～Ⅲ級(jí)之間，菌群密度在Ⅱ～Ⅲ級(jí)之間，陰道清潔度在Ⅰ～Ⅱ度之間，優(yōu)勢(shì)菌種是乳酸桿菌，過氧化氫、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶均為陰性，且陰道pH 值少于4.5。②陰道清潔度，見表1。

表1 陰道清潔度評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS 23.0 軟件，計(jì)數(shù)資料以率描述，經(jīng)卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（±s）表示，予以樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

200 例患者中混合感染122 例（61.0%），單一感染78例（39.0%）。而且，混合感染與單一感染在陰道清潔度、菌群密集Ⅳ級(jí)、菌群多樣性Ⅱ/ Ⅲ級(jí)、優(yōu)勢(shì)菌、pH 值、過氧化氫（+）、白細(xì)胞酯酶（+）、唾液酸苷酶活性（+）的比例對(duì)比有顯著的差異（P＜0.05），見表2。

表2 單一感染與混合感染陰道微生態(tài)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

續(xù)表2

3 討論

下生殖道感染為婦科最常見的疾病，發(fā)病率高，病因復(fù)雜，可引起陰道內(nèi)微生態(tài)菌群失衡，使陰道分泌物增加，進(jìn)而對(duì)給婦女的身心健康、生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。因此，快速、準(zhǔn)確診斷本病對(duì)早期治療，促進(jìn)患者早日康復(fù)意義重大。目前在臨床上，女性下生殖道感染的診斷通常采用常規(guī)鏡檢陰道分泌物進(jìn)行檢查，再根據(jù)病原體的類型予以針對(duì)性治療，盡管常規(guī)鏡檢查操作簡(jiǎn)單，但受檢驗(yàn)醫(yī)師水平及外界影響較大，造成漏診率較高，難以為臨床提供準(zhǔn)確的參考。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)報(bào)道[2]，下生殖道感染發(fā)生的主要原因是陰道菌群失調(diào)，致使陰道內(nèi)環(huán)境pH 值、清潔度出現(xiàn)異常改變，誘發(fā)內(nèi)源性致病菌、外源性有害微生物侵入陰道內(nèi)寄生，進(jìn)而出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。而陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)則是通過對(duì)陰道分泌液的菌群多樣性、密集度、有無優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行客觀定性分析，進(jìn)而便于臨床了解受檢者陰道內(nèi)菌群分布狀態(tài)，同時(shí)通過檢測(cè)陰道酸堿度、過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶等陰道乳酸桿菌主要成分活性來判斷受檢者陰道內(nèi)乳桿菌的產(chǎn)酸功能是否正常。當(dāng)前有研究證實(shí)[3]，陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)靈敏度，特異度高，可以準(zhǔn)確診斷單一陰道感染，而且可及時(shí)發(fā)現(xiàn)各種混合性陰道感染，對(duì)評(píng)價(jià)殺滅病原體后陰道微生態(tài)恢復(fù)也有重大的意義。本研究結(jié)果也顯示。200 例患者中混合感染122 例（61.0%），單一感染78 例（39.0%），而且混合感染與單一感染在陰道清潔度、菌群密集Ⅳ級(jí)、菌群多樣性Ⅱ/Ⅲ級(jí)、優(yōu)勢(shì)菌、pH 值、過氧化氫（+）、白細(xì)胞酯酶（+）、唾液酸苷酶活性（+）方面有顯著的差異，表明了女性下生殖道感染以混合感染為主，且陰道微生態(tài)失衡較為嚴(yán)重，而采用陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)可快速、準(zhǔn)確評(píng)估下生殖道感染患者陰道微生態(tài)狀況，為臨床準(zhǔn)確診治疾病提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。