凌彩玲，趙可偉，楊皓云，趙清，區(qū)旭春

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州)

0 引言

男性精液質(zhì)量是直接導(dǎo)致男性不育的重要原因之一。成年男性睪丸支持細(xì)胞產(chǎn)生抗苗勒氏管激素（anti-Müllerian hormone, AMH)，因此AMH 可能與精子發(fā)生有一定關(guān)系。抗苗勒氏管激素（AMH），被歸為轉(zhuǎn)化生長因子超家族，能夠?qū)M織的生長以及分化起作用[1]。廣泛參與了生殖細(xì)胞的調(diào)控、性腺的發(fā)育及睪丸的下降。已有研究表明精漿中AMH 能夠在精子生成期間發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，與精子密度、存活率呈明顯正相關(guān)[2-3]。李常林等報(bào)道不育患者與正常生育力男性精漿AMH 存在明顯關(guān)系[4]。精漿中AMH 水平降低是男性不育的危險(xiǎn)因素。本實(shí)驗(yàn)是測(cè)定男性精漿中AMH 水平，分析精漿中AMH 水平在男性精液中的濃度。研究AMH 水平對(duì)于男性在生育能力中能否給臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本實(shí)驗(yàn)選擇兩個(gè)組作為研究對(duì)象：其中A 組為對(duì)照組，B 組為不育組。B 組對(duì)象為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院橋東院區(qū)不孕不育門診就診的不育癥患者?；颊吣挲g為25-35 歲，平均（26±4.5）歲，無避孕措施，正常備孕1 年以上不育者，女方無生殖系統(tǒng)疾病;A 組選擇年齡25～38 歲，平均（25.5±5.5）歲健康已育捐獻(xiàn)者。A 組30 例：精子計(jì)數(shù)大于（或等于）20×109/mL， 精子活率大于75%，（a+b）級(jí)精子大于50%,或a 級(jí)精子大于25%，精漿PH7.0-8.0，排精量2-7mL 平均為（4±0.5） mL，液化時(shí)間小于30min，正常形態(tài)精子率大于30%；B 組按照精液中的精液理化檢查、顯微鏡動(dòng)力學(xué)檢查、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)分B1-B5 五組；B1（精液指標(biāo)無異常）28 例：精子數(shù)量、生存率、活動(dòng)力、形態(tài)等常規(guī)指標(biāo)無異常；B2（精液指標(biāo)異）32 例：精子數(shù)量、生存率、活動(dòng)力、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)指標(biāo)中存在一個(gè)或以上不正常；B3（輕度弱精癥）8 例：30%≤（a+b）級(jí)精子＜50%；B4（中度弱精癥）10 例：15% ≤（a+b）級(jí)精子 ＜30%；B5（重度弱精子）14 例：（a+b）級(jí)精子＜10%。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

精液常規(guī)參數(shù)測(cè)定采用北昂醫(yī)療BEION V4.20 醫(yī)學(xué)圖像軟件。AMH 測(cè)定采用采用上海江萊生物生產(chǎn)的ELISA 試劑盒。AMH 水平測(cè)定采用Rayto-2100C 酶標(biāo)分析儀。

1.3 方法

1.3.1 精液標(biāo)本采集

精液標(biāo)本采集為手淫法，禁欲時(shí)間3-7d，將一次射出的全部精液收入干凈容器內(nèi)，置37℃水浴箱內(nèi)，并每隔10 分鐘觀察一次，用滴管法觀察液化時(shí)間。精漿標(biāo)本制備：精液常規(guī)檢測(cè)后，剩下的精液以 3000r/min 離心10 min，取精漿0.5mL放置于專用5mL 試管中，并于-80℃保存待測(cè)。

1.3.2 精漿中AMH 水平的檢測(cè)

采用Rayto-2100C 酶標(biāo)分析儀測(cè)定，具體操作如下：㈠標(biāo)本及試劑準(zhǔn)備：提前60min 把實(shí)驗(yàn)用精漿及AMH 測(cè)定試劑盒從冰箱取出置于室溫。精漿進(jìn)行復(fù)融操作、AMH 試劑盒平衡至室溫。復(fù)融后的精漿1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測(cè)。此操作由專業(yè)的檢驗(yàn)技術(shù)人員嚴(yán)格按照試劑盒操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 精液檢測(cè)分析

采用國產(chǎn)北昂醫(yī)療BEION V4.20 醫(yī)學(xué)圖像軟件系統(tǒng)對(duì)精液中的精液理化檢查、顯微鏡動(dòng)力學(xué)檢查、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)進(jìn)行全自動(dòng)檢測(cè)。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 A 組與B 組精漿AMH 水平結(jié)果比較

B 組精漿AMH 水平均低于A 對(duì)照組 （P＜0.05)；B2 組精漿AMH 水平低于B1 組（P＜0.05）與A 組(P＜0.01，見表1)。

表1 A 組與B 組精漿AMH 水平結(jié)果比較

2.2 A 組與B2-B5 組精漿中AMH 水平結(jié)果比較

各組不育癥患者中精漿AMH 水平均低于對(duì)照組（P＜0.05)；三種程度弱精子癥隨著精子活力降低，精漿AMH 水平分別對(duì)應(yīng)降低，組間結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）如表2。

表2 不育癥指標(biāo)異常組精漿AMH 水平與A 組結(jié)果比較

2.3 精漿中AMH 水平與精液其他參數(shù)相關(guān)性分析

精漿中AMH 水平與精子數(shù)量無相關(guān)性（P＞ 0.05）；精漿中AMH 水平與精子活動(dòng)率呈正相關(guān)，其中輕度、中度弱精（P＜0.05）；重度弱精（P＜0.01)。而精漿中AMH 水平與精子畸形率在本次研究中暫未顯示存在明顯相關(guān)性。如表3。

表3 精漿AMH 水平與精液其他參數(shù)相關(guān)性分析

3 結(jié)果及討論

精液的成分是復(fù)雜多樣的，目前常規(guī)檢查可知它當(dāng)中包含了精子、前列腺液、精囊液等成分，并且這些物質(zhì)在正常狀態(tài)是處于平衡狀態(tài)的。一般的精液常規(guī)檢查只專注于精子的數(shù)量、活動(dòng)率、畸形率等，而對(duì)精漿中的其它成分了解甚少。從而導(dǎo)致了許多精液常規(guī)參數(shù)正常的不育癥患者得不到有效治療。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，得以讓更多問題浮現(xiàn)。精漿中的各種成分研究也引起了重視與關(guān)注。實(shí)際上，精漿中的各種成分也能直觀的反映男性生殖系統(tǒng)的狀態(tài)，為臨床不育癥患者的診斷與治療提供更多的依據(jù)。

目前對(duì)精漿成分的研究已趨向常態(tài)化與多元化，如對(duì)精漿中彈性蛋白酶（SPE）、精漿超氧化物歧化酶SOD 活性,精漿ROS、PON-1、MDA 聯(lián)合精子DNA 碎片檢測(cè)精子狀態(tài)，精漿α-葡萄糖苷酶等等一系列研究都已明確證實(shí)了精漿中的成分能對(duì)精液產(chǎn)生直觀的影響。給不育癥患者的臨床治療提供依據(jù)[5-9]。

抗繆勒管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）,由阿爾弗雷德約斯特教授在二十世紀(jì)四十年代發(fā)現(xiàn)[10]AMH 在男性和女性體內(nèi)均有表達(dá)，但在生物學(xué)作用上存在差異。在女性當(dāng)中，AMH 廣泛用于評(píng)估卵巢儲(chǔ)備功能、 輔助生殖、診斷多囊卵巢綜合征、預(yù)測(cè)絕經(jīng)期及診斷卵巢早衰、作為顆粒細(xì)胞腫瘤的一個(gè)特異循環(huán)指標(biāo)等[11]。而在男性當(dāng)中，血清AMH 檢測(cè)用于隱睪癥和無睪癥的鑒別診斷[12]。對(duì)于精漿中AMH 水平，曾有國內(nèi)外研究初步認(rèn)它與精子的密度、存活率有相關(guān)性[2-3]。國內(nèi)早期有報(bào)道稱不育患者與正常生育力男性精漿中AMH 存在差異[4]，與BMI 無明顯相關(guān)性[13]因此對(duì)于肥胖或超重不育患者精液質(zhì)量評(píng)估，精漿AMH 更具意義。同時(shí)AMH 也可應(yīng)用于無精癥患者生育能力的評(píng)估[14]。AMH 作為精漿的重要組成物之一，它的含量變化是否對(duì)不育癥有臨床意義？國內(nèi)外對(duì)此研究有限，甚至未見同類文獻(xiàn)報(bào)道?；谝陨锨闆r，本研究以此出發(fā)，深入研究精漿中AMH 的水平變化對(duì)精液的影響。在研究中我們發(fā)現(xiàn)男性不育組精漿AMH 水平低于正常已育組，我們的實(shí)驗(yàn)提示精漿中AMH 水平測(cè)定對(duì)男性的生育有指導(dǎo)意義[4]，精液常規(guī)指標(biāo)異常的男性不育組精漿AMH 水平也低于指標(biāo)正常的男性不育組。實(shí)驗(yàn)提示精漿中AMH 水平可明顯影響常規(guī)精液參數(shù)，特別是對(duì)精子的活動(dòng)能力具有決定性作用?？勺鳛榫踊顒?dòng)能力評(píng)價(jià)的一個(gè)獨(dú)立性檢測(cè)指標(biāo)。

本研究顯示精漿中AMH 水平的變化對(duì)精子的后動(dòng)能力產(chǎn)生的影響最為明顯（P＜0.05)，而對(duì)精子的密度、畸形率等作用暫不明顯（P＞0.05)。精子的生成是一個(gè)緊密、嚴(yán)謹(jǐn)并高度有序的過程，整個(gè)過程都依賴丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)，而其中卵泡激素與睪酮等不能直接作用于生精細(xì)胞，主要是與睪丸支持細(xì)胞上的受體結(jié)合，而成年男性睪丸支持細(xì)胞產(chǎn)生AMH，AMH 廣泛參與了生殖細(xì)胞的調(diào)控和性腺發(fā)育、誘導(dǎo)睪丸下降等，因此可推測(cè)AMH 與精子的發(fā)生有一定的聯(lián)系。但精漿中的AMH 是通過何種機(jī)制影響精子活動(dòng)能力的暫時(shí)不得而知，還需作進(jìn)一步的研究。

綜上所述，精漿中AMH 水平高低可明顯影響精子的質(zhì)量，導(dǎo)致男性不育癥的發(fā)生。精漿中AMH 對(duì)精子的活動(dòng)能力影響尤為明顯，臨床在治療精子的活動(dòng)能力低下時(shí)，可適當(dāng)考慮從提高精漿AMH 水平入手，直接使用能刺激睪丸產(chǎn)生AMH 的藥物，提高精漿中AMH 的濃度，從而增強(qiáng)精子的活動(dòng)能力，改善精子整體質(zhì)量，提高生育能力。