張萌，和東遷，楊玉東，文匯玉，董雪巖，羅芳，王俊奎，陳麗堯，陶金忠

（1.寧夏大學農(nóng)學院，銀川 750021；2.寧夏農(nóng)墾賀蘭山奶業(yè)有限公司，銀川 750021）

胚胎和胎兒丟失是造成奶牛不能妊娠和繁殖失敗的主要原因，盡管人工授精后的受精率約為90%，但產(chǎn)犢率只有30%～50%[1]。奶牛大部分胚胎丟失發(fā)生在母畜和胚胎建立聯(lián)系之前的妊娠早期[2]，70%～80%的胚胎丟失發(fā)生在人工授精后的前兩周，在授精后前7d的胚胎死亡比例明顯比其他時期高得多[3]。早期胚胎損失成為了影響奶牛繁殖力的主要因素。

孕酮（P4）在維持妊娠中起著重要的作用，妊娠早期P4不足會導致胚胎損失[4]。Ahmad等[5]發(fā)現(xiàn)在人工授精后6～7d，妊娠奶牛體內(nèi)P4濃度顯著高于未妊娠組。奶牛授精后第4～8天乳中P4濃度與早期胚胎存活率之間存在正相關(guān)關(guān)系，早期的P4濃度過低影響胚胎發(fā)育能力[6,7]。人工授精后的第6天，P4濃度低于正常值可導致妊娠失敗。妊娠奶牛體內(nèi)的P4濃度上升較早，且比未妊娠奶牛濃度更高[8]。Starbuck等[9]研究發(fā)現(xiàn)，奶牛在排卵后第5天乳中P4濃度在7～8ng/mL之間，且與最高妊娠率相關(guān)，而濃度較低與降低生育能力相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，從人工授精后第3～7天開始外源性補充P4能提高奶牛生育能力[10]。Stevenson等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在人工授精后第13～18天增加P4濃度能提高妊娠率。但也有研究發(fā)現(xiàn)在妊娠早期補充P4對妊娠率沒有影響[12,13]，補充P4最有效的時間和劑量是目前研究的關(guān)鍵。本研究通過利用不同方式及不同劑量的處理方法增加P4濃度，探究其與奶牛妊娠的關(guān)系，以期了解不同途徑增加P4對奶牛妊娠率的影響。

1 材料與方法

1．1 試驗動物和預(yù)同期處理方案

在某大型集約化奶牛場，隨機選擇胎次、年齡、配種日齡和體況相近（體況評分BCS2.75左右）的健康荷斯坦牛285頭。在產(chǎn)后42±3d肌肉注射PG；56±3d肌肉注射PG；67±3d肌肉注射GnRH和陰道內(nèi)放置P4陰道栓（CIDR）；74±3d肌肉注射PG和取出陰道內(nèi)放置的CIDR，緊接著24h后肌肉注射PG，然后在32h后肌肉注射GnRH，16h后對發(fā)情奶牛進行人工授精。

1．2 試驗藥品

試驗藥品黃體酮注射液（P4）由寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，P4陰道栓（CIDR1380）由新西蘭DCE國際有限公司生產(chǎn)。

1．3 試驗分組及處理

CIDR P4D組：試驗?zāi)膛?0頭，定時人工授精后第4天將CIDR放入陰道內(nèi)，第9天取出。

CIDR P13D組：試驗?zāi)膛?0頭，定時人工授精后第13天將CIDR放入陰道內(nèi)，第18天取出。

P4P20組：試驗?zāi)膛?8頭，定時人工授精后第5天一次肌肉注射P420 mg/頭。

P4P40組：試驗?zāi)膛?4頭，定時人工授精后第5天一次肌肉注射P440mg/頭。

對照組：選取同一時期場內(nèi)定時人工授精后不做處理的奶牛113頭，作為對照組。

1．4 妊娠率及返情率的檢測

使用B超于人工授精后第32天進行妊娠檢測，通過B超觀察試驗?zāi)膛４_認懷孕狀態(tài)。在配種后24d內(nèi)發(fā)情的奶牛定為返情奶牛，24d以上發(fā)情以及32d妊檢未妊娠的奶牛歸為未妊娠奶牛，32d妊檢懷孕的定為妊娠奶牛。妊娠率、未妊娠率及返情率計算如下：

妊娠率=妊娠奶牛頭數(shù)/人工授精奶牛頭數(shù)×100%

未妊娠率=未妊娠奶牛頭數(shù)/人工授精奶牛頭數(shù)×100%

返情率=返情奶牛頭數(shù)/人工授精奶牛頭數(shù)×100%

1．5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)經(jīng)過Excel整理后，使用SAS對各數(shù)據(jù)之間差異顯著性采用卡方檢驗，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結(jié)果

2．1 定時人工授精后通過不同方法增加P4濃度對奶牛妊娠率、未妊娠率的影響

由表1可知，CIDR P4D組和對照組妊娠率分別是50.00%和40.71%，CIDR P4D組妊娠率比對照組高了22.80%，差異顯著（P＜0.05）；未妊娠率分別為15.00%和31.86%，CIDR P4D組未妊娠率顯著低于對照組（P＜0.05）；而CIDR P13D組與對照組相比妊娠率和未妊娠率差異不顯著（P>0.05）。而一次高劑量和低劑量注射P4的P4P20組和P4P40組與對照組相比妊娠率差異不顯著（P>0.05）；P4P20組和P4P40組與對照組相比未妊娠率差異顯著（P＜0.05）。

2．2 定時人工授精后通過不同方法增加P4濃度對奶牛返情率的影響

由表1可知，CIDR P4D組和對照組返情率分別是35.00%和27.43%，CIDR P4D組返情率顯著高于對照組（P＜0.05）；P4P20組和P4P40組與對照組相比返情率差異顯著（P＜0.05），CIDR P13D組與對照組的返情率差異不顯著（P>0.05）。

表1 不同處理組和對照組奶牛妊娠率、未妊娠率和返情率比較

3 討論

3．1 CIDR對定時人工授精后奶牛妊娠率的影響

黃體中的P4對妊娠的建立和維持至關(guān)重要，在反芻動物妊娠早期，黃體中的P4在調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜分泌方面發(fā)揮重要作用，而子宮內(nèi)膜分泌對于刺激和調(diào)節(jié)胚胎的生長和分化至關(guān)重要[14]。奶牛P4濃度與胚胎發(fā)育的關(guān)系早在妊娠第5天就已存在[15]。人工授精后第5天P4濃度降低會對子宮啟動囊胚發(fā)育產(chǎn)生不利影響，導致妊娠率降低和胚胎發(fā)育受損[16]。本研究發(fā)現(xiàn)人工授精后第5天肌肉注射不同劑量P4與對照組妊娠率差異不顯著，不能提高奶牛妊娠率，說明在人工授精后第5天一次注射P4不能提高受胎率，可能的原因是注射后體內(nèi)P4一次性升高，不能長時間維持P4較高的水平，所以對妊娠率沒有影響。但是降低了未妊娠率，增加了返情率，使得返情奶牛的比例增加，這個比例的增加可以縮短奶牛再次配種的時間間隔，進而縮短產(chǎn)后到配種的時間間隔，有利于提高奶牛的繁殖率。

據(jù)Bisinotto等的研究，人工授精后使用CIDR補充P4，降低了泌乳奶牛妊娠損失，與對照組相比在人工授精后第4～9天使用CIDR處理的奶牛的受孕率有所提高[17,18]，這與本研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)人工授精后第4天CIDR組奶牛妊娠率顯著高于對照組，表明人工授精后第4天CIDR處理有利于增加并維持體內(nèi)P4濃度。而據(jù)Naoki等的研究，在人工授精后第12～19天，使用CIDR處理日本黑奶牛，沒有增加血漿P4濃度，也沒有改善其生育能力[19]，這也與本研究的結(jié)果一致。表明在人工授精后第13天后使用CIDR處理沒有效果，說明10d內(nèi)持續(xù)補充P4有利于胚胎的存活。

3．2 CIDR和P4對定時人工授精后奶牛返情率的影響

有研究發(fā)現(xiàn)CIDR可以增加奶牛返情的比率[20]，但受時間限制；Alnimer等研究發(fā)現(xiàn)，人工授精后第4天，與對照組相比，CIDR處理組奶牛返情率顯著增加[21]；EI-zarkouny等研究發(fā)現(xiàn)，人工授精后第13天CIDR處理和對照組無P4處理相比，使用CIDR未能增加未懷孕奶牛的返情率[22]。以上與本研究的結(jié)果一致，本研究表明，人工授精后第4天使用CIDR增加了奶牛返情率，降低了未妊娠率。有研究表明，從第3～7天開始外源性補充P4，并達到適當?shù)腜4水平，有益于提高奶牛生育能力[10]。本研究中人工授精后第5天使用不同劑量P4，雖沒有提高奶牛妊娠率，但是顯著提高了奶牛返情率，進而縮短了奶牛再次配種的時間間隔。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)定時人工授精后第4天采用CIDR處理有利于提高奶牛妊娠率。定時人工授精后第4天采用CIDR處理和定時人工授精后第5天注射不同劑量P4有利于提高奶牛返情率。