羅嫄，胡澤鍇

(成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川 成都 610045)

復(fù)方巖白菜素片使用歷史悠久，為鎮(zhèn)咳祛痰藥，用于慢性支氣管炎，由巖白菜素和馬來酸氯苯那敏組成。其中巖白菜素為新疆虎耳草科植物厚葉巖白菜提煉精制得到的異香豆精類化合物，對慢性支氣管炎具有良好的鎮(zhèn)咳、祛痰效果，于處方中起主要作用[1-2]；馬來酸氯苯那敏為化學(xué)合成藥，作為抗組胺藥[3]可減輕呼吸道其他癥狀，起輔助作用。復(fù)方巖白菜素片最早收載于《中國藥典》1977年版(一部)[4]，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為1989年出版的部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品及制劑第一冊[5]，這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中均未對有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制。

在藥物的生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程中會(huì)產(chǎn)生一定的降解產(chǎn)物，降解產(chǎn)物通常與不良反應(yīng)息息相關(guān)，對藥物的安全性產(chǎn)生影響。在復(fù)方巖白菜素片多年的使用過程中，生產(chǎn)企業(yè)均收到數(shù)量不等的不良反應(yīng)案例的反饋。研究其降解產(chǎn)物，控制好有關(guān)物質(zhì)，保障其用藥安全是很有必要的。

查閱文獻(xiàn)及部分生產(chǎn)企業(yè)資料，復(fù)方巖白菜素片有關(guān)物質(zhì)的相關(guān)研究并未見報(bào)道和提供。馬來酸氯苯那敏為化學(xué)合成藥，處方比例較低，其有關(guān)物質(zhì)已有相關(guān)資料[3,6]；巖白菜素為植物提取物，處方比例較高，其有關(guān)物質(zhì)無對應(yīng)文獻(xiàn)資料，情況不明。為了保障藥品使用的安全性，本文就收集到的5個(gè)廠家的制劑及輔料，對復(fù)方巖白菜素片的有關(guān)物質(zhì)做了一些探索性研究，最終建立了高效液相色譜(HPLC)檢查方法，對未知雜質(zhì)進(jìn)行限度檢查，并對樣品中的雜質(zhì)總量進(jìn)行了控制。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1290高效液相色譜儀；梅特勒MS205DU電子天平(精度：十萬分之一)；島津AEG 220電子天平(精度：萬分之一)。

1.2 藥品與試劑 對照品：巖白菜素(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111532-201604，含量：94.1%)、馬來酸氯苯那敏(中檢院，批號(hào)：100047-201507，含量：99.7%)；試劑：甲醇(Fisher Chemical，純度99.9%)為色譜純，其余試劑為國產(chǎn)分析純。

復(fù)方巖白菜素片樣品，規(guī)格均為每片含巖白菜素125 mg和馬來酸氯苯那敏2 mg：貴州A藥廠3批，批號(hào)：180301、180905、190302；四川B藥廠3批，批號(hào)：180301、180701、190501；云南C藥廠2批，批號(hào)：180504、180806；湖南D藥廠2批，批號(hào)：180502、180908；云南E藥廠2批，批號(hào)：181101、181103。

輔料：玉米淀粉(濰坊盛泰藥業(yè)，批號(hào)：20180802)；淀粉(湘潭縣淀粉有限公司)；預(yù)膠化淀粉(湖州展望藥業(yè)，批號(hào)：201905010)；硬脂酸鎂(山東聊城阿華制藥，批號(hào)：20190332)；羥丙甲纖維素(湖州展望藥業(yè)，批號(hào)：20190204)；依地酸二鈉(湖南爾康制藥，批號(hào)：102320181204)；薄膜包衣劑(上海新菲爾生物制藥，批號(hào)：1904125S)；糊精(安徽山河藥用輔料，批號(hào)：190207)；羧甲淀粉鈉(西安北方惠安醫(yī)藥輔料，批號(hào)：180801)；滑石粉(廣西龍勝華美滑石開發(fā)有限公司)；微晶纖維素(湖州展望藥業(yè))；蔗糖(云南德宏英茂糖業(yè)龍江糖廠，批號(hào)：190301)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Shiseido Capcell PAK C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(16∶84)，檢測波長為215 nm，柱溫30 ℃，流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量20 μL，等度洗脫，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍；供試品溶液如有雜質(zhì)峰，按外標(biāo)法以對照溶液峰面積計(jì)算雜質(zhì)含量。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照溶液 精密稱取巖白菜素對照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇2 mL超聲使溶解，加流動(dòng)相稀釋，搖勻，精密量取1 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋，搖勻，制成每1 mL含巖白菜素0.01 mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，加甲醇10 mL超聲使溶解，加流動(dòng)相稀釋并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 空白對照溶液 根據(jù)各廠家提供的輔料種類和處方比例配制5個(gè)廠家的空白混合輔料，混勻后按照各個(gè)廠家配制供試品溶液所需稱樣量取樣，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液同法處理配制即得。

2.2.4 系統(tǒng)適用性溶液 稱取供試品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于巖白菜素10 mg)，加甲醇2 mL使溶解，加流動(dòng)相稀釋并定容至10 mL，搖勻，制成每1 mL含巖白菜素1 mg的溶液，將此溶液置80 ℃水浴中加熱1 h，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取系統(tǒng)適用性溶液照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，巖白菜素與其前相鄰雜質(zhì)峰的分離度為5.0(應(yīng)不低于1.5)，理論板數(shù)為9 364(應(yīng)不低于2 000)。取對照溶液、供試品溶液和空白溶液進(jìn)樣，典型色譜圖見圖1～2(圖中主峰后無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，故只截取主峰前雜質(zhì)放大)。

2.4 檢測限考察 用對照溶液逐步稀釋后進(jìn)行檢測限考察，結(jié)果檢測限為0.040 μg·mL-1。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察，從2 h開始RRt=0.82的雜質(zhì)峰明顯開始增大，表明供試品溶液穩(wěn)定性較差，建議臨用新制。

2.6 破壞性試驗(yàn)

2.6.1 破壞性試驗(yàn)溶液的制備

2.6.1.1 酸破壞樣品溶液 稱取B藥廠190501批次供試品細(xì)粉(下同)適量(約含巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，加2 mol·L-1鹽酸溶液1 mL，放置1 h，再加入2 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL，調(diào)pH為中性，照供試品溶液制備方法制備即得。

2.6.1.2 堿破壞樣品溶液 稱取供試品細(xì)粉適量(約含巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，加0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液1 mL，放置15 min，再加入0.2 mol·L-1鹽酸溶液1 mL，調(diào)pH為中性，照供試品溶液制備方法制備即得。

2.6.1.3 氧化破壞樣品溶液 稱取供試品細(xì)粉適量(約含巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，加30%過氧化氫溶液1 mL，放置1 h，照供試品溶液制備方法制備即得。

2.6.1.4 加熱破壞樣品溶液 稱取供試品細(xì)粉適量(約含巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，加甲醇10 mL振搖后加入適量流動(dòng)相，于80 ℃水浴條件下加熱1 h，取出放冷至室溫，照供試品溶液制備方法制備即得。

2.6.1.5 光照破壞樣品溶液 稱取供試品細(xì)粉適量(約含巖白菜素50 mg)，置50 mL量瓶中，于4 500 Lx光照20 h，照供試品溶液制備方法制備即得。

2.6.2 破壞性試驗(yàn)結(jié)果 將上述各種溶液照“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果：復(fù)方巖白菜素片雜質(zhì)較少，主要集中為相對保留時(shí)間為0.58、0.70和0.82的3個(gè)雜質(zhì)，其中RRt=0.82的雜質(zhì)在酸、加熱和光破壞條件下有增大趨勢，后二者較明顯；在堿破壞條件下有兩個(gè)新增雜質(zhì)(RRt=0.19、0.92)，前者較為明顯，但在供試品中并無檢出；強(qiáng)制降解試驗(yàn)提示樣品對堿、加熱和光照較其他條件敏感；在各破壞條件下的雜質(zhì)峰之間及雜質(zhì)峰與主峰之間均分離度良好；空白輔料均不干擾測定。強(qiáng)制降解樣品圖見圖3。

2.7 耐用性試驗(yàn) 改變“2.1”項(xiàng)下色譜條件中的參數(shù)：甲醇比例(±2%)、柱溫(±3 ℃)、流速(±0.1 mL·min-1)、換用不同品牌的相同填料的色譜柱(Thermo C8柱4.6 mm×250 mm，5 μm)試驗(yàn)，結(jié)果樣品中總雜質(zhì)含量在0.08%～0.11%之間，說明方法耐用性良好，能滿足測定要求。

2.8 樣品測定 照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備5個(gè)廠家共12批次樣品的供試品溶液，照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算雜質(zhì)含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 此處方組成中兩組分配方比例相差大(每片含巖白菜素125 mg和馬來酸氯苯那敏2 mg)，馬來酸氯苯那敏處方量低，對有關(guān)物質(zhì)中雜質(zhì)的貢獻(xiàn)量微小，而巖白菜素為植物提取物且無有關(guān)物質(zhì)研究資料，故有關(guān)物質(zhì)檢查主要針對巖白菜素。參考文獻(xiàn)[7-10]，篩選了不同色譜柱填料及流動(dòng)相比例，最終確定此色譜條件下各雜質(zhì)峰分離度較好，主峰保留時(shí)間適中。

3.2 檢測波長的選擇 采用PDA檢測器對雜質(zhì)峰進(jìn)行光譜掃描，最大單個(gè)雜質(zhì)的最大吸收波長在215 nm，其他雜質(zhì)在210～300 nm間吸收強(qiáng)度無明顯變化。同時(shí)，由于其他雜質(zhì)含量過低無法通過掃描獲得紫外吸收光譜以確定最大吸收波長，故根據(jù)最大雜質(zhì)的紫外吸收特征選擇了215 nm作為檢測波長。

3.3 采集時(shí)間的選擇 在此色譜條件下定位馬來酸氯苯那敏，其保留時(shí)間約為巖白菜素主峰的3倍，而供試品溶液濃度的馬來酸氯苯那敏色譜峰未檢出。鑒于強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)中在主峰之后基本無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，采集時(shí)間考慮將另一組分馬來酸氯苯那敏峰洗脫完畢為結(jié)束時(shí)間，即巖白菜素主峰保留時(shí)間的3倍。

3.4 溶劑的選擇 有資料顯示[3,11]，兩個(gè)組分的溶解性不同：巖白菜素在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶，而馬來酸氯苯那敏在水或乙醇中易溶。為降低溶劑效應(yīng)，用流動(dòng)相溶解樣品最為理想，但流動(dòng)相中甲醇的比例較低，易造成巖白菜素溶解不完全，故本文采用先用少量甲醇溶解后再加流動(dòng)相定容的方式來溶解樣品。

3.5 供試品溶液濃度的選擇 根據(jù)樣品中雜質(zhì)的個(gè)數(shù)和含量，比較了1 mg·mL-1和2 mg·mL-1的供試品溶液濃度，發(fā)現(xiàn)二者雜質(zhì)個(gè)數(shù)一致，最大雜質(zhì)峰面積與供試品濃度不成倍數(shù)關(guān)系，其他雜質(zhì)峰面積增大不明顯，故最終選擇1 mg·mL-1作為供試品溶液的濃度。

3.6 限度的制定 由12批次樣品的有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果可以看出，最大單個(gè)雜質(zhì)含量與總雜質(zhì)含量相近，說明總雜質(zhì)含量主要受最大單個(gè)雜質(zhì)影響，其他未知雜質(zhì)含量較低，故有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)考慮只控制總雜質(zhì)限度。根據(jù)此次的測定結(jié)果，初步將總雜質(zhì)限度定為不得超過1.0%。在不同廠家和不同批次之間，最大雜質(zhì)含量有高于或低于0.1%的現(xiàn)象，可能與不同廠家原料藥來源、制劑工藝、生產(chǎn)時(shí)間以及樣品儲(chǔ)存條件差異有關(guān)。