曲 棟，張 群，申 麗*，汪志剛

1暨南大學(xué)藥學(xué)院；2暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣州 510632

檸檬苦素是一種高度氧化的四降三萜類化合物，主要來源于楝科(Meliaceae)和蕓香科(Rutaceae)植物。木果楝屬(Xylocarpus)紅樹植物是楝科真紅樹植物，主要分布于東非、印度、孟加拉國、東南亞、中國南部和澳大利亞北部[1]。長期遭受海水周期性浸淹使紅樹植物產(chǎn)生了眾多結(jié)構(gòu)新穎的次生代謝產(chǎn)物，如檸檬苦素、原檸檬苦素、生物堿、芳香酮酸、黃酮、甾醇等[2,3]，其中檸檬苦素是木果楝屬紅樹植物的主要次生代謝產(chǎn)物。近年來的研究表明該屬植物中的檸檬苦素不僅結(jié)構(gòu)多樣，而且具有拒食殺蟲、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)、胃保護(hù)和抗抑郁等多種生物活性[2,3]。墨西哥交酯是一類母核中含有雙環(huán)[3.3.12.10]壬烷結(jié)構(gòu)單元的檸檬苦素類型，基本骨架由Connolly[4]于1964年從楝科植物Swieteniamacrophylla中分離得到的檸檬苦素swietenine而確定，是木果楝屬紅樹植物中主要的檸檬苦素類型之一，本課題組也從木果楝屬紅樹植物發(fā)現(xiàn)了多個(gè)此類型檸檬苦素[5]。

羧酸酯酶是一類藥物代謝酶，屬于絲氨酸酯酶大家族的一員，可水解眾多內(nèi)外源的酯類化合物，其活性與許多的疾病相關(guān)。人體中主要存在人羧酸酯酶1(CES1)和人羧酸酯酶2(CES2)[6]。CES2在人體腸道和很多腫瘤組織中高表達(dá)，在酯類或酰胺類藥物或前藥的口服生物利用度和治療效果中起重要作用[7]。為了從紅樹植物中尋找結(jié)構(gòu)新穎，活性顯著的次生代謝產(chǎn)物，本研究選取紅樹植物X.moluccensis的種子，對其化學(xué)成分及活性進(jìn)行了進(jìn)一步研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

薄層層析用硅膠板(煙臺化學(xué)工業(yè)研究所GF2型層預(yù)板)；Waters 2998和2489型高效液相色譜儀(美國Waters公司)；AmaZon SL離子阱電噴霧質(zhì)譜儀(德國Bruker Daltonics公司)；Bruker AV-400型核磁共振波譜儀(德國布魯克公司)；SHZ-C型循環(huán)水式多用真空泵(河南鞏義市予華儀器廠)；DLSB-5/25型低溫冷卻液循環(huán)泵(上海霄漢實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司型)；Hei-VAP Advantage旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國海道夫公司 )；KQ-25OVDB型超聲波清洗儀(上海霄漢實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司)；ME204型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；Synergy H1酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek)；色譜柱(日本YMC公司，YMC-Pack， ODS-5-A，250 mm × 10 mm i.d.，5 μm)；正相柱層析硅膠(青島海洋化工廠，100～200目)；反相柱層析硅膠(日本YMC公司，YMC-GEL，ODS-RP-C18，75 μm)；氘代試劑(美國劍橋同位素實(shí)驗(yàn)室)；乙腈(色譜純，德國Merck公司)；甲醇(色譜純，德國Merck公司)；乙醇、乙酸乙酯、甲醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)；丙酮、氯仿(分析純，廣州化學(xué)試劑廠)。

1.2 植物材料

實(shí)驗(yàn)材料X.moluccensis種子于2007年9月采集于印度安得拉邦克里希納港灣紅樹林濕地，由南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院吳軍教授鑒定。樣品標(biāo)本(No. IXM200701)保存于廣州市暨南大學(xué)藥學(xué)院海洋藥物研究中心。

1.3 提取與分離

干燥的X.moluccensis種子6.0 kg，粉碎后用95%的乙醇常溫下浸泡提取6次(6 × 15 L)，每次浸泡48 h。6次提取液減壓濃縮得浸膏共824.6 g，浸膏加純水?dāng)嚢杌鞈遥靡宜嵋阴ポ腿?次(6 × 7.5 L)，濃縮蒸干得乙酸乙酯浸膏299.1 g。

乙酸乙酯萃取物299.1 g經(jīng)正相硅膠(100～200目)柱層析，(氯仿/甲醇體積比100∶0→5∶1，梯度)洗脫，共得到223個(gè)流份。隨后經(jīng)過薄層色譜和高效液相色譜檢測分析，合并正相柱層析流份58～67(43.0 g)，經(jīng)過反相硅膠柱層析(58 × 5.5 cm i.d.，丙酮/水體積比40∶60、50∶50、65∶35、80∶20、90∶10、100∶0，梯度洗脫)，得到136個(gè)流份。反相柱層析流份45經(jīng)半制備HPLC純化得到化合物1(4.4 mg，YMC-Pack ODS-A，乙腈/水，體積比49∶51，流速3 mL/min)、化合物3(23.2 mg，YMC-Pack ODS-A，甲醇/水，體積比67∶33，流速3 mL/min)；反相柱層析流份36經(jīng)半制備HPLC(YMC-Pack ODS-A，甲醇/水，體積比70∶30，流速3 mL/min)得到化合物8(4.3 mg)；反相柱層析流份37經(jīng)半制備HPLC(YMC-Pack ODS-A，乙腈/水，體積比60∶40，流速3 mL/min)得到化合物6(2.0 mg)；反相柱層析流份72結(jié)晶得到化合物7(8.1 mg)；反相柱層析流份98經(jīng)半制備HPLC得到化合物2(45.3 mg，YMC-Pack ODS-A，甲醇/水，體積比65∶35，流速3 mL/min)、化合物5(6.5 mg，YMC-Pack ODS-A，乙腈/水，體積比55∶45，流速3 mL/min)；反相柱層析流份106經(jīng)半制備HPLC(YMC-Pack ODS-A，甲醇/水，體積比72∶28，流速3 mL/min)得到化合物11(3.5 mg)、化合物4(12.5 mg)。

合并正相柱層析流份68～71(22.9 g)，再經(jīng)過反相硅膠柱層析(60 × 3 cm i.d. 丙酮/水體積比40∶60、50∶50、65∶35、80∶20、90∶10、100∶0梯度洗脫)，得到111個(gè)流份。反相柱層析流份63～65合并經(jīng)半制備HPLC得到化合物9(2.8 mg，YMC-Pack ODS-A，甲醇/水，體積比70∶30，流速3 mL/min)；反相柱層析流份75～76合并結(jié)晶得到化合物10(94.9 mg)。

1.4 CES2抑制活性測試

CES2活性測試實(shí)驗(yàn)過程參照文獻(xiàn)中實(shí)驗(yàn)方法[8-10]。首先，向200 μL含有100 mM的磷酸鉀緩沖液(pH 7.4)，0.2 μg/mL的人肝微粒體(HLM)，和選擇性探針DDAB(10 μM)的體系中加入2 μL化合物1(10 mM)，在37 ℃恒溫下孵育30 min后，加入100 μL冰乙腈充分混勻終止反應(yīng)。之后，將反應(yīng)液在20 000 g離心20 min，取上清液于酶標(biāo)儀上檢測600 nm處吸收。以不加入化合物的體系作為空白對照。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從X.moluccensis種子中發(fā)現(xiàn)了11個(gè)檸檬苦素化合物(圖1)，其中1個(gè)新的具有CES2抑制活性的化合物krishnolide E(化合物1)。

2.1 化合物的物理常數(shù)、波譜數(shù)據(jù)及結(jié)構(gòu)解析

化合物1白色無定形粉末，易溶于氯仿、丙酮試劑，微溶于甲醇，不溶于水。分子式為C32H42O10。ESI-MS：m/z609.28 [M + Na]+(calcd for C32H42O10Na，609.27)，結(jié)合核磁共振氫譜(1H NMR)和碳譜(13C NMR)判斷分子式為C32H42O10，不飽和度為12。1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)(表1)表明有7個(gè)不飽和度分別來源于1個(gè)酮羰基、3個(gè)酯羰基和3個(gè)碳碳雙鍵，因此化合物1的結(jié)構(gòu)中應(yīng)該有五個(gè)環(huán)系。

圖1 化合物1～11的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-11

結(jié)合DEPT譜可知化合物1具有7個(gè)甲基(其中包括1個(gè)甲氧基、4個(gè)角甲基和2個(gè)取代基上的甲基)、5個(gè)亞甲基、9個(gè)次甲基(包括3個(gè)烯碳次甲基)和11個(gè)季碳(其中4個(gè)為羰基碳)。

表1 化合物1的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)(400 MHz和100 MHz，CDCl3)

化合物1的1H和13C NMR數(shù)據(jù)與化合物xylomolin A3相似[5]，只有C-6碳數(shù)據(jù)區(qū)別較大，化合物1的C-6(δC33.2，CH2)的化學(xué)位移相對xylomolin A3(δC73.0 CH)明顯移向高場，結(jié)合H-5/C-6，H2-6/C-7的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)信號確定化合物1的C-6位比xylomolin A3少羥基取代。

化合物1的相對立體構(gòu)型由NOE相關(guān)信號確認(rèn)(圖2)。H-17/H-12β，H-17/H-5，H-5/H3-28，H-5/H-30之間的NOE相關(guān)信號表明H-5，H-17，H3-28，H-30位β構(gòu)型，因而與C-30相連的OH為β構(gòu)型。H-3/2-OH，H3-29/2-OH，H3-19/H-9，H3-18/H-11α，H3-18/H-15α之間的NOE相關(guān)信號表明H-3，H-9，H3-18，H3-19，2-OH為α構(gòu)型。H-3與H3-29之間存在NOE相關(guān)信號，但H-3與H-5之間無NOE相關(guān)信號，表明H-3為α構(gòu)型，而與C-3相連的2-甲基丁?；鶠棣聵?gòu)型。因此，化合物1被鑒定為1個(gè)新的墨西哥交酯型檸檬苦素，命名為krishnolide E，其結(jié)構(gòu)如圖1所示?；衔?的詳細(xì)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)原始圖譜可從本刊官網(wǎng)免費(fèi)下載(www.trcw.ac.cn)。

圖2 化合物1的關(guān)鍵1H-1H COSY、HMBC和NOE相關(guān)Fig.2 Key 1H-1H COSY,HMBC,and NOE correlations for compound 1

化合物2白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z593.28 [M + Na]+，分子式為C32H42O9。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.06(1H，s，H-3)，3.14(1H，dd，J= 9.6，3.2 Hz，H-5)，2.36(2H，d，J= 9.6 Hz，H2-6)，2.04(1H，s，H-9)，1.79(2H，m，H2-11)，1.11(1H，m，H-12α)，1.76(1H，m，H-12β)，3.47(1H，d，J= 21.0 Hz，H-15α)，3.87(1H，d，J= 21.0 Hz，H-15β)，5.65(1H，s，H-17)，1.06(3H，s，H3-18)，1.24(3H，s，H3-19)，7.40(1H，br s，H-21)，6.46(1H，br s，H-22)，7.54(1H，br s，H-23)，0.77(3H，s，H3-28)，0.69(3H，s，H3-29)，1.76(1H，m，H-30α)，3.23(1H，d，J= 15.0 Hz，H-30β)，3.69(3H，s，H3-7-OMe)，2.44(1H，m，H-2′)，1.51(1H，m，H-3′a)，1.76(1H，m，H-3′b)，1.01(3H，t，J= 7.2 Hz，H3-4′)，1.19(3H，d，J= 7.2 Hz，H3-5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：217.5(C-1)，78.2(C-2)，85.3(CH-3)，39.1(C-4)，40.8(CH-5)，33.3(CH2-6)，174.0(C-7)，125.8(C-8)，52.0(CH-9)，52.1(C-10)，18.7(CH2-11)，29.0(CH2-12)，38.3(C-13)，133.0(C-14)，33.4(CH2-15)，169.6(C-16)，80.5(CH-17)，17.7(CH3-18)，17.7(CH3-19)，120.6(C-20)，142.9(CH-21)，109.9(CH-22)，141.7(CH-23)，20.1(CH3-28)，22.6(CH3-29)，44.0(CH2-30)，52.2(7-OMe)，176.0(C-1′)，41.5(CH-2′)，26.4(CH2-3′)，11.7(CH3-4′)，16.7(CH3-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故化合物2被鑒定為cipadesin N。

化合物3白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。分子式為C31H38O11。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：4.96(1H，s，H-3)，3.32(1H，s，H-5)，5.47(1H，s，H-6)，2.08(1H，m，H-9)，1.94(1H，m，H-11α)，1.76(1H，m，H-11β)，1.81(1H，m，H-12α)，1.17(1H，m，H-12β)，3.78(1H，d，J= 19.2 Hz，H-15α)，3.48(1H，dt，J= 19.2，3.0 Hz，H-15β)，5.60(1H，s，H-17)，1.06(3H，s，H3-18)，1.27(3H，s，H3-19)，7.54(1H，br s，H-21)，6.46(1H，br s，H-22)，7.44(1H，br s，H-23)，1.04(3H，s，H3-28)，0.84(3H，s，H3-29)，3.21(1H，d，J= 14.4 Hz，H-30α)，1.76(1H，m，H-30β)，3.74(3H，s，H3-7-OMe)，2.18(3H，s，H3-2′)，2.19(3H，s，H3-2′′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：216.6(C-1)，78.0(C-2)，86.6(CH-3)，39.4(C-4)，44.3(CH-5)，72.7(CH-6)，171.1(C-7)，125.6(C-8)，52.8(CH-9)，52.4(C-10)，18.6(CH2-11)，29.3(CH2-12)，38.3(C-13)，133.6(C-14)，33.5(CH2-15)，169.5(C-16)，80.7(CH-17)，16.8(CH3-18)，18.0(CH3-19)，120.4(C-20)，141.6(CH-21)，109.8(CH-22)，143.1(CH-23)，22.6(CH3-28)，22.6(CH3-29)，44.4(CH2-30)，53.3(7-OMe)，169.9(C-1′)，21.0(CH3-2′)，169.7(C-1′′)，21.3(CH3-2′′)。ESI-MS：m/z609.28 [M + Na]+。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故化合物3被鑒定為khayalenoid H。

化合物4白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z551.31 [M + Na]+，分子式為C29H36O9。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.05(1H，m，H-2)，3.63(1H，d，J= 9.6 Hz，H-3)，3.45(1H，br s，H-5)，5.45(1H，s，H-6)，2.02(1H，m，H-9)，1.89(1H，m，H-11α)，1.76(1H，m，H-11β)，1.84(1H，m，H-12α)，1.15(1H，m，H-12β)，3.45(1H，d，J= 21.0 Hz，H-15α)，4.00(1H，d，J= 21.2 Hz，H-15β)，5.52(1H，s，H-17)，1.01(3H，s，H3-18)，1.15(3H，s，H3-19)，7.54(1H，br s，H-21)，6.47(1H，br s，H-22)，7.41(1H，br s，H-23)，0.99(3H，s，H3-28)，0.94(3H，s，H3-29)，3.17(1H，dd，J= 14.4，2.4 Hz，H-30α)，2.00(1H，m，H-30β)，3.75(3H，s，H3-7-OMe)，2.17(3H，s，H3-2′)，3.69(1H，s，H-6-OH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：218.9(C-1)，49.9(CH-2)，78.4(CH-3)，39.8(C-4)，43.0(CH-5)，73.5(CH-6)，171.3(C-7)，128.1(C-8)，52.6(CH-9)，54.1(C-10)，18.6(CH2-11)，28.8(CH2-12)，37.9(C-13)，131.8(C-14)，33.2(CH2-15)，171.3(C-16)，80.3(CH-17)，17.7(CH3-18)，17.0(CH3-19)，120.7(C-20)，141.5(CH-21)，110.0(CH-22)，142.8(CH-23)，23.1(CH3-28)，23.5(CH3-29)，33.6(CH2-30)，53.1(7-OMe)，169.9(C-1′)，21.0(CH3-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故化合物4被鑒定為6-O-acetylswietenolide。

化合物5白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z551.25 [M + Na]+，分子式為C29H36O9。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：4.87(1H，s，H-3)，3.28(1H，dd，J= 8.6，3.4 Hz，H-5)，2.36(2H，m，H2-6)，2.27(1H，m，H-9)，1.62(1H，m，H-11α)，1.17(1H，m，H-11β)，1.42(1H，m，H-12α)，1.67(1H，m，H-12β)，2.25(1H，m，H-14)，2.84(1H，m，H-15α)，2.90(1H，m，H-15β)，5.70(1H，s，H-17)，1.09(3H，s，H3-18)，1.23(3H，s，H3-19)，7.80(1H，br s，H-21)，6.47(1H，br s，H-22)，7.42(1H，br s，H-23)，0.81(3H，s，H3-28)，0.76(3H，s，H3-29)，5.38(1H，br s，H-30)，3.72(3H，s，H3-7-OMe)，2.13(3H，s，H3-2′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：215.0(C-1)，76.9(C-2)，84.9(CH-3)，39.1(C-4)，41.7(CH-5)，32.7(CH2-6)，173.9(C-7)，136.5(C-8)，56.4(CH-9)，49.5(C-10)，20.3(CH2-11)，34.2(CH2-12)，36.7(C-13)，44.9(CH-14)，30.0(CH2-15)，169.3(C-16)，77.2(CH-17)，22.0(CH3-18)，15.8(CH3-19)，120.6(C-20)，141.9(CH-21)，109.7(CH-22)，143.0(CH-23)，19.7(CH3-28)，21.9(CH3-29)，129.1(CH-30)，52.3(7-OMe)，170.9(C-1′)，20.5(CH3-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故化合物5被鑒定為ruageanin D。

化合物6白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z535.28 [M + Na]+，分子式為C29H36O8。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.50(1H，t，J= 7.6 Hz，H-2)，4.76(1H，br d，J= 9.4 Hz，H-3)，3.36(1H，dd，J= 7.6，4.2 Hz，H-5)，2.37(1H，m，H-6a)，2.17(1H，m，H-6b)，2.38(1H，m，H-9)，1.17(1H，m，H-11α)，1.64(1H，m，H-11β)，1.42(1H，m，H-12α)，1.67(1H，m，H-12β)，2.24(1H，m，H-14)，2.82(1H，br d，J= 18.2 Hz，H-15α)，2.92(1H，dd，J= 18.2，6.0 Hz，H-15β)，5.71(1H，s，H-17)，1.08(3H，s，H3-18)，1.14(3H，s，H3-19)，7.80(1H，br s，H-21)，6.47(1H，br s，H-22)，7.42(1H，br s，H-23)，0.82(3H，s，H3-28)，0.79(3H，s，H3-29)，5.36(1H，br d，J= 7.6 Hz，H-30)，3.72(3H，s，H3-7-OMe)，2.18(3H，s，H3-2′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：217.0(C-1)，56.4(CH-2)，77.3(CH-3)，38.1(C-4)，48.4(CH-5)，33.0(CH2-6)，174.1(C-7)，138.4(C-8)，41.6(CH-9)，49.9(C-10)，20.4(CH2-11)，30.1(CH2-12)，36.7(C-13)，45.2(CH-14)，34.4(CH2-15)，170.9(C-16)，77.5(CH-17)，20.4(CH3-18)，15.9(CH3-19)，120.7(C-20)，142.9(CH-21)，109.8(CH-22)，141.9(CH-23)，20.4(CH3-28)，22.1(CH3-29)，122.9(CH-30)，52.2(7-OMe)，169.6(C-1′)，22.5(CH3-2′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故化合物6被鑒定為3β-acetoxy-1-oxo-Δ8-30-methylmdicate。

化合物7白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z609.27 [M + Na]+，分子式為C31H38O11。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：5.56(1H，s，H-3)，3.50(1H，s，H-5)，4.75(1H，s，H-6)，2.31(1H，m，H-9)，1.81(1H，m，H-11α)，2.21(1H，m，H-11β)，1.46(1H，m，H-12α)，1.77(1H，m，H-12β)，2.27(1H，m，H-14)，2.87(1H，m，H-15α)，2.88(1H，m，H-15β)，5.64(1H，s，H-17)，1.07(3H，s，H3-18)，1.08(3H，s，H3-19)，7.71(1H，br s，H-21)，6.45(1H，br s，H-22)，7.44(1H，br s，H-23)，1.27(3H，s，H3-28)，0.92(3H，s，H3-29)，5.36(1H，br s，H-30)，3.74(3H，s，H3-7-OMe)，2.19(1H，s，CH3-2′)，2.12(1H，s，CH3-2′′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：214.0(C-1)，76.9(C-2)，85.6(CH-3)，39.4(C-4)，44.9(CH-5)，72.5(CH-6)，171.0(C-7)，136.4(C-8)，57.0(CH-9)，49.6(C-10)，20.8(CH2-11)，34.3(CH2-12)，36.6(C-13)，44.8(CH-14)，29.9(CH2-15)，170.7(C-16)，77.2(CH-17)，20.4(CH3-18)，15.6(CH3-19)，120.7(C-20)，141.4(CH-21)，109.5(CH-22)，143.1(CH-23)，21.9(CH3-28)，22.1(CH3-29)，129.4(CH-30)，53.4(7-OMe)，169.1(C-1′)，22.1(CH3-2′)，169.7(C-1′′)，21.0(CH3-2′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，故化合物7被鑒定為humilinolide D。

化合物8白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z579.29 [M + Na]+，分子式為C31H40O9。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：4.89(1H，s，H-3)，3.33(1H，dd，J= 8.6，3.0 Hz，H-5)，2.37(1H，m，H-6a)，2.17(1H，m，H-6b)，2.33(1H，m，H-9)，1.17(1H，m，H-11α)，1.62(1H，m，H-11β)，1.42(1H，m，H-12α)，1.67(1H，m，H-12β)，2.25(1H，m，H-14)，2.89(1H，m，H-15α)，2.90(1H，m，H-15β)，5.68(1H，s，H-17)，1.23(3H，s，H3-18)，1.11(3H，s，H3-19)，7.80(1H，br s，H-21)，6.47(1H，br s，H-22)，7.42(1H，br s，H-23)，0.81(3H，s，H3-28)，0.77(3H，s，H3-29)，5.38(1H，br s，H-30)，3.72(3H，s，7-OMe)，2.67(1H，m，H-2′)，1.19(1H，d，J= 7.2 Hz，H-3′)，1.19(1H，d，J= 7.2 Hz，H-4′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：215.1(C-1)，76.9(C-2)，84.6(CH-3)，39.5(C-4)，41.5(CH-5)，32.7(CH2-6)，173.8(C-7)，136.6(C-8)，56.6(CH-9)，49.4(C-10)，20.5(CH2-11)，34.3(CH2-12)，36.8(C-13)，45.0(CH-14)，29.8(CH2-15)，169.2(C-16)，76.9(CH-17)，21.9(CH3-18)，15.7(CH3-19)，120.8(C-20)，142.0(CH-21)，109.7(CH-22)，143.0(CH-23)，19.9(CH3-28)，21.9(CH3-29)，129.0(CH-30)，52.3(7-OMe)，176.7(C-1′)，34.0(CH-2′)，19.1(CH3-3′)，18.6(CH3-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道一致，故化合物8被鑒定為methyl-2-hydroxy-3β-isobutyroxy-1-oxomeliac-8(30)-enate。

化合物9白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z593.26 [M + Na]+，分子式為C32H42O9。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.31(1H，dd，J= 17.2，8.0 Hz，H-2)，4.91(1H，d，J= 8.0 Hz，H-3)，3.48(1H，d，J= 8.0 Hz，H-5)，2.37(1H，m，H-6a)，2.32(1H，m，H-6b)，1.83(1H，d，J= 13.0 Hz，H-9)，1.66(1H，m，H-11α)，1.53(1H，m，H-11β)，2.00(1H，m，H-12α)，1.28(1H，m，H-12β)，6.12(1H，s，H-15)，5.18(1H，s，H-17)，1.28(3H，s，H3-18)，1.13(3H，s，H3-19)，7.51(1H，br s，H-21)，6.50(1H，br s，H-22)，7.44(1H，br s，H-23)，0.77(3H，s，H3-28)，0.85(3H，s，H3-29)，2.47(1H，dd，J= 15.6，6.8 Hz，H-30α)，3.18(1H，dd，J= 15.6，6.8 Hz，H-30β)，3.71(3H，s，7-OMe)，2.39(1H，m，H-2′)，1.51(1H，m，H-3′a)，1.72(1H，m，H-3′b)，0.96(3H，t，J= 7.0 Hz，H3-4′)，1.19(3H，d，J= 7.2 Hz，H3-5′)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：217.5(C-1)，44.7(CH-2)，77.6(CH-3)，39.8(C-4)，41.5(CH-5)，33.1(CH2-6)，173.9(C-7)，72.7(C-8)，60.8(CH-9)，48.4(C-10)，20.7(CH2-11)，33.6(CH2-12)，38.7(C-13)，168.3(C-14)，116.0(CH-15)，164.8(C-16)，79.8(CH-17)，23.1(CH3-18)，18.6(CH3-19)，119.8(C-20)，141.8(CH-21)，110.5(CH-22)，143.1(CH-23)，23.2(CH3-28)，23.0(CH3-29)，35.9(CH2-30)，52.1(7-OMe)，175.5(C-1′)，41.4(CH-2′)，26.7(CH2-3′)，11.8(CH3-4′)，16.9(CH3-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致，故化合物9被鑒定為xylomexicanin B。

化合物10白色無定形粉末;易溶于DMSO，微溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z681.32 [M + Na]+，分子式為C35H46O12。1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：4.78(1H，s，H-3)，2.51(1H，m，H-5)，2.29(2H，m，H2-6)，2.00(1H，t，J= 9.0 Hz，H-9)，1.90(1H，m，H-11α)，2.13(1H，m，H-11β)，1.21(1H，m，H-12α)，1.90(1H，m，H-12β)，6.23(1H，s，H-15)，4.86(1H，s，H-17)，1.12(3H，s，H3-18)，0.99(3H，s，H3-19)，7.74(1H，br s，H-21)，6.53(1H，br s，H-22)，7.72(1H，br s，H-23)，0.59(3H，s，H3-28)，1.21(3H，s，H3-29)，5.53(1H，s，H-30)，3.59(3H，s，7-OMe)，2.55(1H，m，H-2′)，1.02(3H，d，J= 7.0 Hz，H3-3′)，1.02(3H，d，J= 7.0 Hz，H3-4′)，2.37(1H，m，H-2′′)，1.06(3H，d，J= 7.2 Hz，H3-3′′)，1.06(3H，d，J= 7.2 Hz，H3-4′′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：108.7(C-1)，79.8(C-2)，81.2(CH-3)，38.6(C-4)，40.4(CH-5)，31.9(CH2-6)，174.2(C-7)，80.9(C-8)，50.9(CH-9)，42.8(C-10)，14.6(CH2-11)，25.2(CH2-12)，38.6(C-13)，159.4(C-14)，118.6(CH-15)，163.4(C-16)，81.1(CH-17)，19.7(CH3-18)，21.0(CH3-19)，120.3(C-20)，141.9(CH-21)，110.4(CH-22)，144.1(CH-23)，24.1(CH3-28)，22.1(CH3-29)，75.2(CH-30)，52.1(7-OMe)，175.7(C-1′)，33.9(CH-2′)，18.9(CH3-3′)，19.1(CH3-4′)，175.7(C-1′′)，33.9(CH-2′′)，19.1(CH3-3′′)，19.4(CH3-4′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致，故化合物10被鑒定為xylogranin A。

化合物11白色無定形粉末;易溶于氯仿、丙酮。ESI-MS：m/z487.27 [M + H]+，分子式為C27H34O8。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：6.67(1H，d，J= 10.4 Hz，H-1)，5.93(1H，d，J= 10.4 Hz，H-2)，1.95(1H，br s，H-5)，3.94(1H，m，H-6a)，4.10(1H，m，H-6b)，3.32(1H，d，J= 10.8 Hz，H-9)，1.57(1H，m，H-11α)，1.46(1H，m，H-11β)，1.50(1H，m，H-12α)，1.78(1H，m，H-12β)，3.68(1H，s，H-15)，5.42(1H，s，H-17)，1.23(3H，s，H3-18)，1.19(3H，s，H3-19)，7.38(1H，br s，H-21)，6.33(1H，br s，H-22)，7.38(1H，s，H-23)，1.26(3H，s，H3-28)，1.07(1H，s，H3-29)，1.26(1H，s，H3-30)，3.80(3H，s，7-OMe)，2.16(1H，s，H-6-OH)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：152.4(CH-1)，126.4(CH-2)，203.4(C-3)，45.0(C-4)，51.4(CH-5)，61.2(CH2-6)，176.4(C-7)，43.2(C-8)，43.2(CH-9)，50.9(C-10)，21.7(CH2-11)，32.6(CH2-12)，37.9(C-13)，68.2(C-14)，51.5(CH-15)，166.7(C-16)，78.4(CH-17)，19.5(CH3-18)，18.3(CH3-19)，119.9(C-20)，141.0(CH-21)，109.9(CH-22)，143.1(CH-23)，24.4(CH3-28)，23.3(CH3-29)，15.3(CH3-30)，53.4(7-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道一致，故化合物11被鑒定為deacetylsecomahoganin。

2.2 化合物1的生物活性

對分離得到的新化合物1進(jìn)行了人羧酸酯酶2的抑制活性測試，結(jié)果表明，在100 μM濃度下化合物1對人羧酸酯酶2的抑制率為63%。

3 結(jié)論

本文通過對印度紅樹植物X.moluccensis種子中的次生代謝產(chǎn)物研究，分離鑒定了11個(gè)檸檬苦素，全部化合物均為首次從該植物中分離得到?；衔?～10為墨西哥交酯型檸檬苦素，化合物1～4、5～8、9分別含有Δ8,14、Δ8,30、Δ14,15雙鍵，化合物10含有1,8-半縮醛結(jié)構(gòu)?；衔?1為Secomahoganin型檸檬苦素，結(jié)構(gòu)上由gedunin的B環(huán)氧化為C-7為羰基的內(nèi)酯環(huán)，內(nèi)酯環(huán)開環(huán)衍生而來，是X.moluccensis中較少見的檸檬苦素類型。其中化合物1為一個(gè)新的墨西哥交酯型檸檬苦素，通過NMR和MS手段并結(jié)合文獻(xiàn)，確定了該化合物的結(jié)構(gòu)及相對立體構(gòu)型。研究結(jié)果表明印度X.moluccensis種子中富含檸檬苦素化合物，為進(jìn)一步豐富該屬植物的檸檬苦素結(jié)構(gòu)多樣性，研究地域性對木果楝屬植物的次生代謝產(chǎn)物的影響提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。對新化合物1進(jìn)行了羧酸酯酶2的抑制活性測試，結(jié)果表明該化合物在濃度100 μM下對CES2的抑制率為63%。目前文獻(xiàn)中關(guān)于檸檬苦素類化合物的羧酸酯酶2的抑制活性報(bào)道較少，本研究對進(jìn)一步擴(kuò)展檸檬苦素的藥理活性及作用機(jī)制研究，從紅樹植物中發(fā)現(xiàn)具有CES2抑制活性的先導(dǎo)化合物提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。