呂燕 王文彬 茍琪 王英娜 李靖宇 劉建利

（1. 北方民族大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，銀川 750021；2. 河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，保定 071002）

寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）屬茄科枸杞屬，為藥食同源植物，在寧夏、青海、甘肅、新疆和內(nèi)蒙古等地分布最廣［1］。其果實(shí)枸杞子、葉和根含有甜菜堿、東莨菪素等藥理活性物質(zhì)、桂皮酸和多酸類(lèi)物質(zhì)以及多種維生素和氨基酸，具有抗腫瘤、降血壓和防衰老的作用，為鹽堿地造林和經(jīng)濟(jì)林的首選樹(shù)種［2］。隨著寧夏枸杞規(guī)模化種植面積的擴(kuò)大和種植年限的增加，化肥、農(nóng)藥的大量使用使土壤透氣性減弱，根腐病大規(guī)模發(fā)生，并有逐年加重趨勢(shì)［3-4］。寧夏枸杞根腐病是一種由鐮刀菌屬真菌（Fusarium spp.）所引起的使植株葉片發(fā)黃、枝條萎縮嚴(yán)重時(shí)整株枯死的毀滅性病害，給枸杞產(chǎn)量和品質(zhì)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失［5-6］。

寧夏枸杞根腐病防治方法主要有培育抗性品種、農(nóng)業(yè)管理［7］、化學(xué)殺菌劑和生物防治。在寧夏枸杞插條時(shí)可用高錳酸鉀、20%抗枯寧水劑或15%混合氨基酸鋅鎂水劑定根；發(fā)病初期可用50%甲基托布津或50%多菌靈澆灌根部；葉片發(fā)黃、枝條萎縮、側(cè)枝枯死的植株，立即拔除后用5%的石灰乳消毒，以防蔓延［8］。陳伶俐等［9］研究10種殺菌劑對(duì)枸杞根腐病菌的毒力發(fā)現(xiàn)，2.5%咯菌腈毒力最強(qiáng)。生物防治寧夏枸杞根腐病亦有開(kāi)展，張小彥等［10］在健康枸杞植株根際土壤中分離中華根瘤菌（Sinorhizobium sp.）和綠僵菌（Metarhizium sp.）對(duì)枸杞根腐病菌具有良好抑制效果；宋學(xué)云等［11］在田間應(yīng)用海洋芽孢桿菌可濕性粉劑和多粘類(lèi)芽孢桿菌可濕性粉劑對(duì)枸杞根腐病進(jìn)行防治，防控效果顯著，發(fā)病率分別降低81.48%和61.27%。

叢枝菌根真菌（arbuscular mycorrhizal fungi，AMF）是土壤習(xí)居真菌，是植物根圍微生物區(qū)系最重要的成員之一，在園藝、農(nóng)作物和林業(yè)生產(chǎn)中，AMF既可作為生物肥料，又可作為生防藥劑，提高植物對(duì)土傳病害的抗性［12］，誘導(dǎo)植物抵抗生物脅迫［13］。李敏［14］在田間和盆栽條件下研究AMF對(duì)西瓜生長(zhǎng)的影響以及與由根內(nèi)鐮刀菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum引起的枯萎病發(fā)生的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，接種AMF能顯著促進(jìn)西瓜植株的生長(zhǎng)并降低枯萎病發(fā)病率。Jamiolkowska等［15］研究接種AMF對(duì)辣椒根腐病的生長(zhǎng)和防治發(fā)現(xiàn)，接種AMF的辣椒根系發(fā)育好于接種尖孢鐮刀菌的根系并提高辣椒幼苗的光合活性。AMF與其他有益微生物共同接種對(duì)病原體亦表現(xiàn)出更大的抵抗?jié)摿?。Nafady等［16］研究AMF和植物促生酵母（Brettanomyces naardensis）的聯(lián)合作用對(duì)由Macrophomina phaseolina引起的向日葵根腐病和炭腐病的影響，結(jié)果表明，雙接種通過(guò)增加植物的養(yǎng)分利用率來(lái)誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)；Gao等［17］研究了接種Funnelliformis mosseae、Glomus tortuosum和根瘤菌Sinorhizobium medicae對(duì)苜蓿根腐病的聯(lián)合防治效果，發(fā)現(xiàn)在A(yíng)MF和S.medicae存在下，植株的N、P濃度均顯著高于不存在A(yíng)MF和S.medicae的植株；接種AMF可增加結(jié)瘤數(shù)且植物病害相關(guān)酶、過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶含量升高。

AMF應(yīng)用于植物病害的防治具有很大的應(yīng)用前景，但寧夏枸杞健康植株根腐病發(fā)病后，其根區(qū)土壤AMF群落如何發(fā)生變化尚不清楚。

本研究以不同樣地寧夏枸杞健康植株和根腐病發(fā)病植株根系和根區(qū)土壤為研究材料，鑒定寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF群落組成，并分析根腐病發(fā)病后對(duì)寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF群落組成、多樣性及結(jié)構(gòu)的影響，為后續(xù)開(kāi)展應(yīng)用AMF防控寧夏枸杞根腐病奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

2019 年 8 月在寧夏銀川（38°39′N(xiāo)，106°9′E）、寧夏中寧（37°28′N(xiāo)，105°37′E）和甘肅靖遠(yuǎn)（36°54′N(xiāo)，105°9′E）樣地分別選取3個(gè)樣方，在每個(gè)樣方選取‘寧杞1號(hào)’品種10株健康植株和10株根腐病發(fā)病植株（根部明顯腐爛，葉片變黃、萎蔫、脫落大于80%），去除表面枯枝凋落物，挖出植株，輕輕抖落根區(qū)土壤、收集根樣并放入自封袋，每個(gè)樣地3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，樣品編號(hào)分別為“銀川Yinchuan（‘健康 樹(shù) Healthy tree’，‘ 病 樹(shù) Root rot-infected tree’）”，“ 中 寧 Zhongning（‘ 健 康 樹(shù) Healthy tree’，‘ 病 樹(shù)Root rot-infected tree’）”，“靖遠(yuǎn) Jingyuan（‘健康樹(shù)Healthy tree’，‘病樹(shù) Root rot-infected tree’）”。土壤樣品過(guò)2 mm篩，部分土壤樣品陰干后于4℃冷藏保存，用于土壤理化性質(zhì)和AMF分離鑒定；陰干根樣用于A(yíng)MF侵染率的測(cè)定。

1.2 方法

1.2.1 AMF分離鑒定 土壤樣品風(fēng)干后過(guò)2 mm篩準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g，用濕篩傾析-蔗糖離心法［18］分離AMF孢子，在體視顯微鏡下觀(guān)察并記錄孢子數(shù)量。將孢子置于浮載劑（水、乳酸甘油、PVLG）中壓片處理，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察孢子大小、形態(tài)、顏色、表面紋飾、孢壁結(jié)構(gòu)、連孢菌絲和內(nèi)含物等特征，并拍照記錄。根據(jù)國(guó)際AM真菌保藏中心（INVAM） 在 http：//invam.wvu.edu/和 http：//www.amf-phylogeny.com/上提供的最新分類(lèi)描述及圖片進(jìn)行種屬鑒定。

1.2.2 AMF多樣性測(cè)定 參照劉海躍［19］的方法對(duì)AMF孢子密度、種豐度、相對(duì)多度及物種多樣性指數(shù)進(jìn)行計(jì)算。

孢子密度（spore density，SD）：10 g風(fēng)干土中孢子數(shù)量；種豐度（species richness，SR）：10 g土樣含有AMF的種數(shù)；相對(duì)多度（relative abundance，RA）：AMF某種或?qū)俚逆咦訑?shù)/該樣地AMF總孢子數(shù)×100%；分離頻度（frequency，F(xiàn)）：AMF某屬或種出現(xiàn)次數(shù)/土樣數(shù)×100%；重要值（important value，IV）：某樣地AMF種或?qū)俜蛛x頻度與相對(duì)多度之和平均值，即IV=（F+RA）/2；根據(jù)重要值將AMF優(yōu)勢(shì)度劃分為4個(gè)等級(jí)，即IV＞60%為優(yōu)勢(shì)屬（種），40%＜IV≤ 60%為亞優(yōu)勢(shì)屬（種），20%＜IV≤40%為伴生屬（種），IV≤20%為偶見(jiàn)屬（種）；

式中，S為某采樣點(diǎn)AMF種類(lèi)數(shù)，Pi為種i所占比例。

1.2.3 AMF定殖率測(cè)定 依據(jù)Phillips等［20］方法計(jì)算AMF結(jié)構(gòu)定殖率。將收集的根樣用蒸餾水反復(fù)沖洗3次后，置于10% KOH溶液中，于90℃水浴45-60 min；棄去KOH溶液后加入堿性H2O2，室溫下放置20 min后洗去堿性H2O2；加入2%鹽酸，室溫酸化5 min，加入0.5%酸性品紅置于90℃水浴中染色30 min，棄去染色液后，加入乳酸甘油溶液（1∶1∶1）室溫下脫色24 h。隨機(jī)選取30個(gè)長(zhǎng)度為1 cm根段，壓片后于電子顯微鏡下觀(guān)察并計(jì)算AMF定殖率。

1.2.4 土壤理化性質(zhì)測(cè)定 采用電位法測(cè)定pH，采用凱氏定氮法測(cè)定全氮（total nitrogen，TN），采用酸溶-鉬銻抗比色法測(cè)定全磷（total phosphorus，TP），采用鉬銻抗比色法測(cè)定速效磷（available phosphorus，AP），采用重鉻酸鉀容量法測(cè)定有機(jī)質(zhì)（organic matter，OM），采用氫氟酸高氯酸銷(xiāo)煮法測(cè)定全鉀（total potassium，TK），采用醋酸銨-火焰光度計(jì)法測(cè)定速效鉀（available potassium，AK），采用紫外分光光度法測(cè)定硝態(tài)氮（nitrate nitrogen，NO3--N），采用苯酚-次氯酸鹽法測(cè)定氨態(tài)氮（ammonia nitrogen，NH4+-N）。采用Braford法測(cè)定土壤中易提取球囊霉素（easily extractable glomalin-related soil protein，EEG）和總球囊霉素（total glomalin-related soil protein，TG）。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016處理后，用SPSS 20.0軟件進(jìn)行2組t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著；用Excel 2016對(duì)AMF屬種組成進(jìn)行作圖；用美吉生信云平臺(tái)工具（https：//cloud.majorbio.com/）進(jìn)行組間差異分析和PCoA分析；運(yùn)用R語(yǔ)言（R×64 3.5.1）“vegan”包進(jìn)行PERMANOVA分析；運(yùn)用微生太生科云平臺(tái)（https：//www.bioincloud.tech/#/）對(duì)AMF與土壤因子進(jìn)行RDA分析和環(huán)境因子相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 土壤理化性質(zhì)

由表1可知，不同樣地寧夏枸杞健康植株土壤與根腐病發(fā)病植株土壤全磷、氨態(tài)氮、全氮、速效鉀和速效磷含量無(wú)顯著性差異；銀川樣地健康植株土壤與根腐病發(fā)病植株有機(jī)質(zhì)含量存在顯著性差異，健康植株土壤低于根腐病發(fā)病植株土壤；不同樣地健康植株土壤與根腐病發(fā)病植株土壤的硝態(tài)氮含量均存在顯著性差異，銀川和中寧樣地根腐病發(fā)病植株土壤高于健康植株土壤，但靖遠(yuǎn)樣地健康植株土壤高于根腐病發(fā)病植株土壤；靖遠(yuǎn)樣地全鉀含量存在顯著性差異，健康植株土壤高于根腐病發(fā)病植株土壤；中寧樣地健康植株土壤與根腐病發(fā)病植株pH存在顯著性差異，根腐病發(fā)病使中寧樣地土壤pH升高。由表1可知，根腐病發(fā)生與土壤理化因子中有機(jī)質(zhì)含量呈顯著正相關(guān)。

表1 不同樣地寧夏枸杞健康與根腐病發(fā)病植株土壤理化性質(zhì)Table 1 Physicochemical properties of soil around healthy and root rot-infected L. barbarum L. plants from different cultivated sites

2.2 AMF孢子密度、侵染率與球囊霉素

由表2可知，銀川樣地健康植株和發(fā)病植株土壤AMF孢子密度分別為9.77個(gè)/g和9.70個(gè)/g，AMF總侵染率分別為2.50%和7.72%，土壤樣品孢子密度和AMF總侵染率最低；中寧樣地健康植株和發(fā)病植株土壤AMF孢子密度分別為34.90個(gè)/g和36.40個(gè)/g，AMF總侵染率分別為10.27%和17.85%；靖遠(yuǎn)樣地健康植株和發(fā)病植株土壤AMF孢子密度分別為36.30個(gè)/g和42.67個(gè)/g，AMF總侵染率分別為30.00%和33.23%，3個(gè)樣地健康植株和發(fā)病植株土壤AMF孢子密度和AMF總侵染率無(wú)顯著變化。

表2 不同樣地寧夏枸杞健康與根腐病發(fā)病植株土壤AMF孢子密度、侵染率和球囊霉素Table 2 AMF spore density，infection rate and glomalin content in the soil of healthy and root rot plants of L. barbarum L.from different cultivated sites

不同樣地健康植株和發(fā)病植株土壤易提取球囊霉素和總球囊霉素存在差異。銀川樣地健康植株和發(fā)病植株土壤易提取球囊霉素分別為20.71 mg/g和29.37 mg/g，總球囊霉素分別為57.16 mg/g和70.5 mg/g；中寧樣地健康植株和發(fā)病植株土壤易提取球囊霉素分別為18.09 mg/g和24.42 mg/g，總球囊霉素分別為61.74 mg/g和67.65 mg/g；靖遠(yuǎn)樣地健康植株和發(fā)病植株土壤易提取球囊霉素分別為12.54 mg/g和22.42 mg/g，總球囊霉素分別為50.50 mg/g和55.76 mg/g。中寧樣地健康植株土壤易提取球囊霉素含量顯著小于發(fā)病植株土壤。

因此，寧夏枸杞健康植株受根腐病病原菌入侵后，AMF孢子密度、總侵染率和總球囊霉素含量不發(fā)生顯著變化，中寧樣地寧夏枸杞健康植株根腐病發(fā)病后易提取球囊霉素含量升高。

2.3 AMF孢子形態(tài)

在3個(gè)樣地共分離到AMF 6屬32種，包括無(wú)梗囊霉屬（Acaulospora）9種；近明球囊霉屬（Claroideoglomus）4種；球囊霉屬（Glomus）11種，未定種3種；根孢囊霉屬（Rhizophagus）1種；盾巨孢囊霉屬（Scutellospora）1種；隔球囊霉屬（Septoglomus）3種（圖1）。其中，銀川健康植株土壤樣品鑒定出4屬16種，銀川根腐病發(fā)病植株土壤樣品鑒定出5屬17種，中寧健康植株土壤樣品鑒定出6屬22種，中寧根腐病發(fā)病植株土壤樣品鑒定出6屬19種，靖遠(yuǎn)健康植株土壤樣品鑒定出4屬18種，靖遠(yuǎn)根腐病發(fā)病植株土壤樣品鑒定出5屬16種。

圖1 AMF孢子形態(tài)Fig.1 Spore morphology of AMF

2.4 AMF群落組成

由圖2可知，在屬水平，不同樣地樣品AMF的組成存在差異。銀川樣地健康和發(fā)病植株、中寧樣地健康植株和靖遠(yuǎn)樣地健康植株土壤優(yōu)勢(shì)屬為球囊霉屬，但靖遠(yuǎn)樣地發(fā)病植株土壤優(yōu)勢(shì)屬為無(wú)梗囊霉屬，中寧樣地發(fā)病植株土壤優(yōu)勢(shì)屬為根孢囊霉屬；中寧樣地健康植株土壤次優(yōu)勢(shì)屬為根孢囊霉屬，發(fā)病植株土壤為無(wú)梗囊霉屬，近明球囊霉屬僅在中寧樣地出現(xiàn)；靖遠(yuǎn)樣地健康植株土壤次優(yōu)勢(shì)屬為無(wú)梗囊霉屬，發(fā)病植株土壤次優(yōu)勢(shì)屬為球囊霉屬。

圖2 屬水平不同樣地寧夏枸杞健康與根腐病發(fā)病植株根區(qū)土中AMF相對(duì)豐度圖Fig.2 Relative abundance of AMF community at genus level among healthy and root rot-infected plants of L. barbarum L. from different cultivated sites

因此，寧夏枸杞植株受根腐病病原菌侵染后，銀川樣地寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF優(yōu)勢(shì)屬未發(fā)生改變，中寧樣地優(yōu)勢(shì)屬?gòu)那蚰颐箤僮優(yōu)楦吣颐箤?，靖遠(yuǎn)樣地優(yōu)勢(shì)屬?gòu)那蚰颐箤僮優(yōu)闊o(wú)梗囊霉屬，各屬的相對(duì)豐度在健康和罹病植株之間無(wú)顯著差異。

在種水平，地表球囊霉（G. versiforme）為銀川樣地健康和發(fā)病植株根區(qū)土壤的優(yōu)勢(shì)種；中寧樣地健康植株根區(qū)土壤的優(yōu)勢(shì)種為明根孢囊霉（R.clarus）；但靖遠(yuǎn)樣地健康植株根區(qū)土壤優(yōu)勢(shì)種為大果球囊霉（G. macrocarpum），發(fā)病植株根區(qū)土壤的優(yōu)勢(shì)種為細(xì)凹無(wú)梗囊霉（A. scrobiculata）。黑球囊霉（G.melanosporum）、網(wǎng)狀球囊霉（G. reticulatum）、地表球囊霉（G. versiforme）和縮隔球囊霉（S. constrictum）為所有樣地健康植株和病樹(shù)植株根區(qū)土壤AMF的共有種（表3）。結(jié)果表明，根腐病造成靖遠(yuǎn)樣地優(yōu)勢(shì)種發(fā)生變化，從大果球囊霉變?yōu)榧?xì)凹無(wú)梗囊霉，但對(duì)銀川樣地和中寧樣地優(yōu)勢(shì)種無(wú)顯著影響，銀川樣地仍為地表球囊霉，中寧樣地仍為明根孢囊霉。

表3 種水平AMF空間分布重要值Table 3 Important value of spatial distribution of AMF at species level

組間差異物種顯示，根腐病造成銀川樣地網(wǎng)狀球囊霉（G. reticulatum）和凹坑球囊霉（A. excavate）相對(duì)豐度顯著降低，細(xì)凹無(wú)梗囊霉（A. scrobiculata）、多梗球囊霉（G. multicaule）和扭形球囊霉（G.tortuosum）相對(duì)豐度顯著上升（圖3-A）；中寧樣地健康植株根區(qū)土壤AMF占比顯著大于根腐病發(fā)病植株的有黏質(zhì)隔球囊霉（S. viscosum）、大果球囊霉（G.macrocarpum）和蜜色無(wú)梗囊霉（A. mellea），根腐病發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF占比顯著大于健康植株的有近明球囊霉（C. luteum）、明根孢囊霉（R. clarus）和扭形球囊霉（G. tortuosum），根腐病造成黏質(zhì)隔球囊霉、大果球囊霉、蜜色無(wú)梗囊霉相對(duì)豐度顯著降低，明根孢囊霉相對(duì)豐度顯著升高（圖3-B）；靖遠(yuǎn)樣地健康植株根區(qū)土壤AMF占比顯著大于根腐病發(fā)病植株的有大果球囊霉（G. macrocarpum）和G. sp1，根腐病發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF占比顯著大于健康植株的有細(xì)凹無(wú)梗囊霉（A. scrobiculata）、沙荒隔球囊霉（S. deserticola）和凹坑無(wú)梗囊霉（A. excavate），根腐病造成大果球囊霉和G. sp1相對(duì)豐度顯著降低，細(xì)凹無(wú)梗囊霉、沙荒隔球囊霉和凹坑無(wú)梗囊霉相對(duì)豐度顯著升高（圖3-C）。

圖3 種水平不同樣地寧夏枸杞健康與根腐病發(fā)病植株根區(qū)土中AMF差異物種Fig. 3 AMF differentiated species in the root zone soil of L. barbarum L. healthy and root rot-infected plants at species level

2.5 AMF群落α-多樣性

由表4可知，銀川樣地寧夏枸杞健康植株和發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF物種豐度分別為11.00和13.00，中寧樣地分別為16.00和13.33，靖遠(yuǎn)樣地分別為14.00和13.67，3個(gè)樣地AMF物種豐度均無(wú)顯著差異。銀川樣地寧夏枸杞根腐病發(fā)病后寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF香農(nóng)威納指數(shù)顯著升高，中寧樣地和靖遠(yuǎn)樣地寧夏枸杞根腐病發(fā)病后香農(nóng)威納指數(shù)呈下降趨勢(shì)，但不存在顯著性差異。因此，根腐病發(fā)病后，銀川樣地寧夏枸杞根區(qū)土壤AMFα-多樣性升高，中寧樣地和靖遠(yuǎn)樣地α-多樣性無(wú)顯著變化。

表4 不同樣地寧夏枸杞健康和根腐病發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF物種豐度和α-多樣性Table 4 AMF species richness and α-diversity in soil of healthy and infected plants of L. barbarum L. from different cultivated sites

2.6 AMF群落β-多樣性

基于Bray-Curtis距離的PCoA分析（principal co-ordinates analysis）結(jié)果（圖4）顯示，銀川樣地寧夏枸杞健康植株和發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF群落組成更相似，中寧樣地和靖遠(yuǎn)樣地寧夏枸杞健康植株和發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF群落組成存在差異；PERMANOVA分析顯示不同樣地寧夏枸杞健康植株和發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF群落組成差異顯著（R2=0.875，P=0.001）。結(jié)果表明，寧夏枸杞根腐病發(fā)病后根區(qū)土壤AMF群落組成發(fā)生改變。

圖4 基于Bray-Curtis距離AMF群落的PCoA圖Fig.4 PCoA plot based on Bray-Curtis similarities of AMF community

2.7 RDA分析根腐病對(duì)土壤理化因子與根區(qū)土壤AMF關(guān)系的影響

對(duì)土壤理化性質(zhì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行RDA分析，在銀川樣地，速效鉀是健康植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子，有機(jī)質(zhì)是罹病植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子（圖5-A）；在中寧樣地，硝態(tài)氮是健康植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子，全氮和氨態(tài)氮是罹病植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子（圖5-B）；在靖遠(yuǎn)樣地，全磷是健康植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子，全鉀和硝態(tài)氮是罹病植株根區(qū)土壤AMF分布的主要影響因子（圖5-C）。

圖5 AMF群落與土壤理化因子RDA分析Fig. 5 Redundancy analysis between AMF community and soil physicochemical properties

綜上所述，根腐病發(fā)生改變了影響寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF群落的土壤理化因子。

2.8 AMF物種多樣性與土壤理化性質(zhì)的相關(guān)性

AMF物種多樣性和環(huán)境因子相關(guān)性分析表明（表5），速效磷含量與孢子密度呈顯著負(fù)相關(guān)，速效鉀含量與種豐度呈顯著負(fù)相關(guān)，其余土壤理化性質(zhì)與孢子密度和種豐度無(wú)顯著相關(guān)性；pH與AMF總侵染率呈顯著正相關(guān)，其余土壤理化性質(zhì)與AMF侵染率無(wú)顯著相關(guān)性；所有土壤理化性質(zhì)與Shannon-Wiener指數(shù)無(wú)顯著相關(guān)性。

表5 AMF物種多樣性和環(huán)境因子相關(guān)性分析Table 5 Correlation analysis between species diversity of AMF and environmental factors

3 討論

對(duì)枸杞根系土壤中AMF群落的研究已有開(kāi)展。其中唐明等［21］用濕篩傾析法篩取VA菌根真菌的孢子和孢子果，發(fā)現(xiàn)寧夏中衛(wèi)地區(qū)的枸杞（L. chinense）根系土壤中優(yōu)勢(shì)種為雙型球囊霉（G.ambisporum），地球囊霉（G. geosporum）為少見(jiàn)種，單孢球囊霉（G. monosporum）為偶見(jiàn)種。劉洪光［22］采用濕篩傾析法對(duì)銀川產(chǎn)區(qū)寧夏枸杞（L. barbarum L.）根際土AMF孢子鑒定發(fā)現(xiàn)球囊霉屬為優(yōu)勢(shì)屬。張海涵［23］采用巢式PCR-DGGE和克隆測(cè)序技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)黃土高原旱區(qū)不同品種枸杞根系A(chǔ)MF均屬于球囊霉屬。盛敏［24］運(yùn)用濕篩傾析法研究寧夏平羅鹽堿土生境中枸杞（L. chinense）根際土壤AMF群落的有6個(gè)種，地表球囊霉（G. versiforrm）所占比例最高。本研究中銀川、中寧、靖遠(yuǎn)樣地寧夏枸杞健康植株和銀川樣地發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF優(yōu)勢(shì)屬均為球囊霉屬，與劉洪光［22］研究結(jié)果一致，銀川樣地健康植株和發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF優(yōu)勢(shì)種為地表球囊霉（G. versiforrm），與盛敏［24］研究結(jié)果一致；中寧樣地發(fā)病植株根區(qū)土壤AMF優(yōu)勢(shì)屬發(fā)生變化，發(fā)病植株優(yōu)勢(shì)屬為明根孢囊霉屬，優(yōu)勢(shì)種為明根孢囊霉（R. clarus），靖遠(yuǎn)樣地優(yōu)勢(shì)屬種為無(wú)梗囊霉屬凹坑無(wú)梗囊霉（A. excavate）。

趙蕾［25］對(duì)典型喀斯特區(qū)玉米紋枯病及根際土壤AMF群落特征調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)球囊霉屬和原囊霉屬（Archaeospora）的相對(duì)豐度表現(xiàn)為健康植株高于感病植株，本研究結(jié)果與其一致，發(fā)現(xiàn)銀川樣地健康植株優(yōu)勢(shì)屬均為球囊霉屬，且比例存在下降趨勢(shì)。宋放等［26］采用高通量測(cè)序技術(shù)研究贛州橘園根系A(chǔ)MF多樣性受黃龍病菌侵染影響時(shí)發(fā)現(xiàn)黃龍病菌侵染能夠顯著改變柑橘根系內(nèi)生AMF的群落結(jié)構(gòu)，但對(duì)其總體豐度和多樣性無(wú)顯著影響。本研究發(fā)現(xiàn)中寧、靖遠(yuǎn)樣地寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF α-多樣性受根腐病菌影響不大，AMF多樣性無(wú)顯著變化；但銀川樣地寧夏枸杞受根腐病病原菌侵染后AMF α-多樣性顯著升高。張智慧等［27］對(duì)健康三七和根腐病三七根內(nèi)AMF和DSE侵染狀況研究發(fā)現(xiàn)，健康三七的AMF侵染率顯著高于根腐病三七，AMF提高了三七的抗根腐病能力。本研究發(fā)現(xiàn)3個(gè)寧夏枸杞樣地健康植株和根腐病發(fā)病植株AMF侵染率無(wú)顯著差異，根腐病病原菌侵入寧夏枸杞根系后對(duì)AMF侵染率無(wú)影響。AMF物種多樣性與環(huán)境因子相關(guān)性顯示，土壤pH與AMF侵染率呈顯著正相關(guān)，根腐病發(fā)病土壤酸堿度發(fā)生變化會(huì)影響AMF侵染率。

土著AMF長(zhǎng)期存在于土壤中，已適應(yīng)土壤的生態(tài)條件具備良好的生存優(yōu)勢(shì)［28］。使用AMF有助于在可持續(xù)和綜合的土壤傳播疾病管理中預(yù)防土傳疾病的發(fā)生［29］，病原入侵前植物與AMF建立共生體可提前誘導(dǎo)寄主的抗病防御體系［30］。選取AMF菌種作用于植株時(shí)應(yīng)考慮土著AMF菌種。本研究發(fā)現(xiàn)靖遠(yuǎn)樣地健康植株AMF豐度大于發(fā)病植株，顯著差異種有大果球囊霉（G. macrocarpum）和G. sp1，銀川樣地顯著差異種有網(wǎng)狀球囊霉（G. reticulatum）和凹坑無(wú)梗囊霉（A. excavate），中寧樣地顯著差異種有黏質(zhì)隔球囊霉（S. viscosum）、大果球囊霉（G.macrocarpum）和蜜色無(wú)梗囊霉（A. mellea），后續(xù)試驗(yàn)可對(duì)上述不同樣地健康植株根區(qū)土壤AMF種進(jìn)行篩選并建立土著AMF菌劑，進(jìn)一步探究土著AMF對(duì)寧夏枸杞根腐病的作用。

有研究表明，土壤理化性質(zhì)通過(guò)影響AMF產(chǎn)孢影響其多樣性。如盛敏［24］研究發(fā)現(xiàn)AMF種的豐度和多樣性指數(shù)隨土壤養(yǎng)分（有機(jī)質(zhì)、速效磷、速效鉀和堿解氮）的增加而降低，本研究也發(fā)現(xiàn)速效磷含量與孢子密度顯著負(fù)相關(guān)，速效鉀含量與種豐度顯著負(fù)相關(guān)，與盛敏研究結(jié)果一致，速效磷含量低的土壤更利于A(yíng)MF產(chǎn)孢。

4 結(jié)論

根腐病發(fā)生改變寧夏枸杞根區(qū)土壤AMF群落結(jié)構(gòu)，但對(duì)α-多樣性指數(shù)、優(yōu)勢(shì)類(lèi)群、物種組成等各個(gè)群落結(jié)構(gòu)特征在不同樣地之間影響不同。土壤理化性質(zhì)不影響AMF物種多樣性，但影響AMF定殖。