張洪文

（西峽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南西峽 474500）

長期以來，靈芝一直被用于預防和治療各種人類疾病。靈芝被列為“高等級”藥物，是神農(nóng)本草經(jīng)中無毒的中藥材。靈芝的生物活性成分是多糖，有研究報道，靈芝多糖可以通過促進抗原提呈細胞、單核吞噬細胞系統(tǒng)、體液免疫和細胞免疫的功能來調(diào)節(jié)體內(nèi)和體外免疫功能（張華斌等，2016）。β-葡聚糖是一個異構(gòu)群葡萄糖聚合物，目前作為酵母細胞壁結(jié)構(gòu)元素及其他真菌（如靈芝）發(fā)酵產(chǎn)物的成分，在抑制腫瘤形成、增強防御細菌挑戰(zhàn)感染，提高豬生長性能方面具有重要作用（Schoenherr等，1994）。來自各種酵母細胞壁的β-葡聚糖已被證明可以刺激特異性和非特異性免疫反應，同時體外研究表明，β-葡聚糖影響巨噬細胞形態(tài)，增加細胞一氧化氮產(chǎn)量，并刺激腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細胞因子的釋放，它還可以抑制炎癥細胞因子的反應，將營養(yǎng)物質(zhì)用于生長（Chen等，2003）。豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）是一種常見的豬病毒性傳染病，可誘導淋巴細胞凋亡、淋巴細胞耗損、白細胞介素-10（IL-10）過度表達，從而引起T細胞免疫抑制和繼發(fā)性感染（Darwich等，2003）。Liu和Li（1999）發(fā)現(xiàn)，香菇多糖增強了感染馬立克氏病毒肉雞的IL-2水平，提示香菇多糖可能對馬立克病和其他病毒性疾病有用，因為它具有免疫刺激活性。因此，本文研究不同水平靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對斷奶仔豬生長性能、肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬抗體滴度和血清生化指標的影響，同時也評估了其對感染PCV-2仔豬脾臟細胞因子的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗原料與動物分組 試驗選用的靈芝發(fā)酵產(chǎn)物由某醫(yī)藥公司提供，其工藝為深層發(fā)酵，多糖和β-葡聚糖含量分別是19.1%和7.25%。本研究共開展兩個試驗，試驗1：選擇160頭21 d斷奶的仔豬，隨機分為4組，每組4個重復，每個重復10頭豬。各組分別在基礎日糧（表1）中添加0、50、100和150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物。試驗2：將120頭21 d斷奶的仔豬隨機分為2組（4個重復，每個重復15頭），分別飼喂基礎日糧和基礎日糧+50 mg/kg的靈芝發(fā)酵產(chǎn)物。兩組仔豬在試驗當天通過肌肉注射105/mL感染劑量的PCV-2病毒。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.2 生長性能、抗體滴度和生化指標 每周統(tǒng)計一次飼料用量，稱量各重復豬只重量，以此計算平均日增重、平均日采食量和料重比。仔豬在斷奶時接種一劑偽狂犬病疫苗，兩周后接種加強劑。分別在第14和28天每個重復隨機選擇2頭豬進行采血。采用ELISA法測定假狂犬病抗體滴度，以log2滴度為基礎。血液離心分離血清后用試劑盒測定血清葡萄糖、甘油三酯、肌酸酐、膽固醇含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性。參考Makimura和Suzuki（1982）的方法分析血清結(jié)合珠蛋白水平。用磷酸鹽緩沖鹽水灌洗支氣管肺泡收集巨噬細胞，參考Guy等（2017）的方法測定肺泡巨噬細胞的趨化功能。

1.3 脾臟細胞因子 參考 Darwich等（2002）的方法，用熒光定量PCR法分析IL-β、IL-2、IL-4、IL-10、INF-γ和INF-α的表達水平。

1.4 統(tǒng)計分析 所有數(shù)據(jù)均采用SAS一般線性模型程序進行分析，采用Duncan’s法進行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 對生長性能的影響 由表2可知，日糧添加50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物2周和4周后顯著改善了平均日增重（P＜0.05），但隨添加水平的升高，仔豬平均日增重并無顯著改善效果（P＞0.05），同時在第4周150 mg/kg較50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物組顯著降低了平均日增重（P＜0.05）。日糧添加50或100 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物較對照組對整個試驗期仔豬平均日采食量無顯著影響（P＞0.05），但150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物組平均日采食量較其他組顯著降低了8.11%、6.85%和8.11%（P＜0.05）。此外，日糧添加50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物顯著改善了斷奶仔豬料重比（P＜0.05），但隨著靈芝發(fā)酵產(chǎn)物添加水平的升高，料重比無進一步改善（P＜0.05）。

2.2 對肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬抗體滴度及血清生化指標的影響 由表3可知，日糧添加50～150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物可顯著提高肺泡巨噬細胞的趨化性指數(shù)（P＜0.05），但趨化性指數(shù)不存在劑量依賴性。各處理對對巨噬細胞的吞噬作用和吞噬能力（以每200個巨噬細胞吞噬的白色念珠菌表示）均無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加50～150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物較對照組顯著提高了28 d偽狂犬病抗體滴度（P＜0.05），但對14 d偽狂犬病抗體滴度無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加靈芝發(fā)酵產(chǎn)物顯著降低了血糖水平（P＜0.05），但對血清肌酸酐、膽固醇、甘油三酯含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性無顯著影響（P＞0.05）。日糧靈芝發(fā)酵產(chǎn)物添加水平與血清結(jié)合珠蛋白含量表現(xiàn)為劑量依賴效應，其中對照組最低（P＜0.05），150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物組最高（P＜0.05）。

表2 靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對斷奶仔豬生長性能的影響

表3 靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對斷奶仔豬肺泡巨噬細胞功能、偽狂犬病抗體滴度和血清生化指標的影響

2.3 對脾臟細胞因子的影響 由于50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物組飼料轉(zhuǎn)化率最佳，因此我們研究照組和該組對比靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對脾臟細胞因子水平的影響。由表4可知，與對照組相比，日糧添加50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物脾臟IL-β、IL-4和IL-10相對強度無顯著影響（P＞0.05），但靈芝發(fā)酵產(chǎn)物日糧組顯著提高了IL-2、INF-γ和TNF-α相對強度（P＜0.05）。

表4 靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對斷奶仔豬脾臟細胞因子水平的影響

3 討論

靈芝多糖的有益作用已經(jīng)在許多動物（如小鼠、大鼠、兔子）中被證明，但幾乎沒有任何數(shù)據(jù)顯示靈芝發(fā)酵產(chǎn)物在豬或除馬以外的其他家畜中具有促生長作用（Lai等，2004）。本研究結(jié)果顯示，靈芝發(fā)酵產(chǎn)物添加劑量達到150 mg/kg時，與對照組相比，采食量明顯降低，同時生長性能與其添加水平不呈正相關(guān)，這可能與其添加水平過高，導致其苦味成分水平升高，如靈芝酸和萜類化合物可能會影響豬對飼料的適口性。本研究抗體滴度結(jié)果顯示，靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對偽狂犬病抗原的一度抗體滴度無顯著影響（14 d），但與對照組相比，飼喂靈芝發(fā)酵產(chǎn)物日糧的斷奶仔豬偽狂犬病二度抗體滴度顯著升高（28 d），這可能與靈芝發(fā)酵產(chǎn)物中的多糖成分可激活體液免疫和細胞免疫應答的作用有關(guān)（Lai等，2004）。

與對照組相比，補充靈芝發(fā)酵產(chǎn)物的斷奶仔豬血清結(jié)合珠蛋白濃度提高2倍。Hiss和Sauerwein（2003）報道，日糧添加β-葡聚糖使斷奶仔豬血清結(jié)合珠蛋白濃度和日增重成反比關(guān)系，這與本研究結(jié)果一致，即日糧添加150 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物后，結(jié)合珠蛋白的濃度明顯高于50 mg/kg組，同時該組也表現(xiàn)出較低的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率。

以往研究表明，靈芝通過水提取的多糖可以加強細胞因子的分泌，包括IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α（Mao等，1999）。但本結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靈芝發(fā)酵產(chǎn)物可以刺激感染感染PCV-2病毒斷奶仔豬脾臟IL- 2、IFN-γ和TNF-α的表達強度。靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對細胞因子表達的免疫調(diào)節(jié)作用可以表現(xiàn)為兩種方式的調(diào)節(jié)，然而，促炎細胞因子的過度表達可能對生長性能和健康狀況產(chǎn)生不利影響（Darwich等，2003）。此外，細胞因子分泌的增加可導致營養(yǎng)物質(zhì)從生長向免疫反應的再分配，從經(jīng)濟學角度來看是一個缺點（Chen等，2003）。

4 結(jié)論

日糧添加50 mg/kg靈芝發(fā)酵產(chǎn)物可以顯著改善斷奶仔豬的生長性能，在接種偽狂犬病疫苗時可提高肺泡巨噬細胞的趨化能力和抗體滴度。此外，除了降低血糖濃度外，靈芝發(fā)酵產(chǎn)物對大多數(shù)生化指標均無副作用。