林惠燕，孫愛農(nóng)，何銳洪，葛 峰

中山市中心血站，廣東中山 528403

血液是一種特殊的寶貴資源，據(jù)統(tǒng)計全球每年大約有1.174億人獻(xiàn)血，按照美國的數(shù)據(jù)統(tǒng)計，獻(xiàn)血人次與輸血患者比例為3∶1，全球每年接受輸血的患者高達(dá)3 000萬例[1]。血液在采集過程中，因獻(xiàn)血者血流不暢、血管太細(xì)等原因，造成血液與采血袋里的抗凝劑不能及時和充分混勻，就會激活離體后凝血系統(tǒng)，出現(xiàn)大小不一的血液凝塊[2]，對于外觀明顯發(fā)現(xiàn)凝塊的血液都會直接進(jìn)行報廢處理，導(dǎo)致血液報廢率隨之增加[3]，然而一些細(xì)小的凝塊和纖維蛋白析出往往很難被發(fā)現(xiàn)[4]。考慮到采血不暢血液不會用于洗滌紅細(xì)胞、新鮮冰凍血漿、冷沉淀凝血因子等血液制品制備，因此本研究標(biāo)本僅使用懸浮紅細(xì)胞和冰凍血漿，并對其分別做相應(yīng)質(zhì)量檢測，探討過濾后的血液質(zhì)量指標(biāo)變化，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 選取來自中山市中心血站2019年3-12月采集過程中血流不暢的血液230袋，過濾后發(fā)現(xiàn)凝塊和血漿纖維蛋白析出的血液共30袋，該30袋血液檢測結(jié)果均合格，獻(xiàn)血者年齡18～55歲，中位年齡36歲；男12例(40%)，女18例(60%)。

1.2試劑與耗材 血漿游離血紅蛋白測定試劑盒、血漿總蛋白測定試劑盒均由北京瑞爾達(dá)公司提供；血漿纖維蛋白原測定試劑盒由西門子公司提供；一次性使用去白細(xì)胞塑料血袋(簡稱：濾白血袋)由山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司提供；一次性使用塑料血袋轉(zhuǎn)移袋Tr-200(簡稱轉(zhuǎn)移袋)由費森尤斯卡比(廣州)醫(yī)療用品有限公司提供。所有試劑和耗材均有醫(yī)療器械注冊證，并在有效期內(nèi)使用。

1.3儀器與環(huán)境 檢測儀器包括SC-203A無菌接駁機(jī)(日本TERUMO)、SE250熱合機(jī)(韓國Centron)、 Sysmex KX-21全自動血液分析儀(日本希森美康)、CH190-1A臺式低速離心機(jī)(上海醫(yī)療器械)、4040半自動生化儀(德國ROBERT RIELE)、BacT/ALERT 3D(120)培養(yǎng)儀(法國生物梅里埃)、Versa TREK 培養(yǎng)儀(美國賽默飛世爾)、CX-40電子顯微鏡(日本奧林巴斯)、Thermo單通道移液器5～50、20～200、100～1 000 μL(美國賽默飛世爾)。在恒溫實驗室(室溫22～25 ℃、濕度40%～60%)完成所有試驗，所有儀器檢測結(jié)果均可通過校準(zhǔn)溯源至參考方法。

1.4方法

1.4.1計算采血不暢血液發(fā)生率 記錄2019年3-12月采集血液總袋數(shù)和采血現(xiàn)場標(biāo)記采血不暢血液總袋數(shù)，登記過濾血液凝塊后的血液袋數(shù)，計算肉眼可見血液凝塊在采血不暢血液中的發(fā)生率。

1.4.2血液凝塊大小測量 使用透明塑料直尺測量紅細(xì)胞母袋和過濾網(wǎng)中殘留凝塊直徑，判斷肉眼可見血液凝塊大小，并計算相關(guān)比例。

1.4.3血液凝塊過濾步驟 將采血現(xiàn)場標(biāo)記為采血不暢的血液制備成懸浮紅細(xì)胞后，接駁濾白血袋，懸掛于工作柜支架上，利用自然重力作用，使血液經(jīng)過濾器進(jìn)行過濾。

1.4.4懸浮紅細(xì)胞容量計算與留樣檢測 記錄懸浮紅細(xì)胞過濾前和過濾后的重量變化，并且計算血容量回收率。過濾前留樣20 mL作為過濾前的對照標(biāo)本；過濾后分別接駁5份懸浮紅細(xì)胞于轉(zhuǎn)移袋，每份留樣20 mL待檢測使用，在轉(zhuǎn)移袋中標(biāo)記7、14、21、28、35 d，放置于2～4 ℃貯血冰箱保存。過濾袋剩余懸浮紅細(xì)胞樣品視為0 d樣品，立即進(jìn)行血細(xì)胞比容(Hct)、血紅蛋白(Hb)、溶血率、無菌試驗及顯微鏡鏡檢檢測，并依次對貯存7、14、21、28、35 d的懸浮紅細(xì)胞分別測定相應(yīng)數(shù)據(jù)并記錄，所有檢測均按照《全血及成分血質(zhì)量要求：GB18469-2012》[5]進(jìn)行，并評估血液質(zhì)量。

1.4.5血漿檢測 每份制備好的冰凍血漿分別接駁留樣5 mL，立即進(jìn)行血漿總蛋白(TP)和血漿纖維蛋白原(FIB)檢測。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS23.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析，不同血液凝塊大小的懸浮紅細(xì)胞Hct與Hb比較采用獨立樣本t檢驗，溶血率比較采用配對樣本t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1采血不暢血液發(fā)生率 共采集血液39 831袋，其中采血現(xiàn)場標(biāo)記為采血不暢血液230袋，采血不暢血液占采集血液比例0.58%(230/39 831)；經(jīng)過濾后肉眼可見血液凝塊與纖維蛋白析出共30袋，肉眼可見血液凝塊占采血不暢血液的13.04%(30/230)。

2.2血液凝塊大小判斷 在30袋含有血液凝塊和纖維蛋白析出的血液中，血液凝塊<10 mm共11袋，占36.7%(11/30)；10～<20 mm共2袋，占6.7%(2/30)；20～<30 mm共8袋，占26.7%(8/30)；30～<40 mm共4袋，占13.3%(4/30)；40～<50 mm共3袋，占10.0%(3/30)；≥50 mm共2袋，占6.7%(2/30)。其中血液凝塊<10 mm的以碎狀凝塊為主，個別為纖維蛋白析出。

2.3懸浮紅細(xì)胞容量計算 過濾前后懸浮紅細(xì)胞容量結(jié)果及其回收率結(jié)果見表1。

表1 過濾前后懸浮紅細(xì)胞容量結(jié)果

2.4Hct和Hb指標(biāo)變化 經(jīng)計算30份懸浮紅細(xì)胞Hct和Hb均達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；過濾前和過濾后Hct和Hb沒有明顯變化；血液凝塊<20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hct和Hb均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hct不符合標(biāo)準(zhǔn)，Hb符合標(biāo)準(zhǔn)，Hct均低于0.50，過濾后的懸浮紅細(xì)胞經(jīng)檢測質(zhì)量合格率為43.3%(13/30)；過濾前血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hct比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.384，P<0.05)；過濾后血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hct比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.410，P<0.05)；過濾前血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hb比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.573，P<0.05)；過濾后血液凝塊<20 mm與≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hb比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.987，P<0.05)。見表2。

表2 懸浮紅細(xì)胞過濾前后Hct、Hb結(jié)果比較

2.5血液凝塊<20 mm懸浮紅細(xì)胞不同貯存時間溶血率變化 因血液凝塊≥20 mm懸浮紅細(xì)胞不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以溶血率試驗只對血液凝塊<20 mm懸浮紅細(xì)胞進(jìn)行檢測。貯存0～28 d過濾前和過濾后懸浮紅細(xì)胞溶血率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；貯存35 d過濾前和過濾后懸浮紅細(xì)胞溶血率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 血液凝塊<20 mm懸浮紅細(xì)胞不同貯存時間溶血率比較

2.6血漿TP和FIB檢測 檢測30袋過濾后血液發(fā)現(xiàn)血液凝塊和纖維蛋白析出的冰凍血漿，其中25袋檢測合格，TP為(53.88±3.40)g/L，F(xiàn)IB為(235.32±30.63)mg/dL；另外5袋為纖維蛋白析出，TP為(46.62±2.93)g/L，均不合格，F(xiàn)IB為(181.00±21.63)mg/dL，與正常血漿結(jié)果比較略低。

2.7鏡檢紅細(xì)胞聚集情況和無菌試驗 取貯存0 d過濾前和過濾后標(biāo)本分別涂抹在玻璃片上，使用顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，過濾前個別標(biāo)本出現(xiàn)明顯紅細(xì)胞聚集，而過濾后沒有發(fā)現(xiàn)明顯紅細(xì)胞聚集。過濾后懸浮紅細(xì)胞細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均無細(xì)菌生長。

3 討 論

懸浮紅細(xì)胞是臨床醫(yī)院使用較多的一種血液成分，主要用于改善機(jī)體攜氧功能。懸浮紅細(xì)胞數(shù)量、Hct、Hb、溶血率等是衡量懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，采血不暢血液占采集血液比例為0.58%，肉眼可見血液凝塊占采血不暢的13.04%；發(fā)現(xiàn)血液凝塊的懸浮紅細(xì)胞容量均符合質(zhì)量要求，經(jīng)過濾后血容量變化較少且均能達(dá)到標(biāo)示量±10%的要求，與盧珍萍[6]的觀點一致，過濾后標(biāo)示血量為1.0、1.5、2.0 U的血液回收率分別為(93.79±4.51)%、(95.22±3.26)%、(95.09±2.54)%。血液凝塊<20 mm的懸浮紅細(xì)胞Hct和Hb都符合標(biāo)準(zhǔn)，過濾后的懸浮紅細(xì)胞經(jīng)檢測質(zhì)量合格率為43.3%。因此，建議成分制備過程中發(fā)現(xiàn)血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞可以直接報廢處理。

過濾后的懸浮紅細(xì)胞因過濾過程中的機(jī)械損傷使其游離Hb高于過濾前，所以過濾后溶血率會較過濾前稍升高，貯存0～28 d的懸浮紅細(xì)胞過濾前后溶血率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；貯存35 d過濾后溶血率較過濾前升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但均在國家標(biāo)準(zhǔn)范圍以內(nèi)。 檢測30袋過濾后血液發(fā)現(xiàn)血液凝塊和纖維蛋白析出的冰凍血漿，其中25袋檢測合格，另外5袋血漿TP均不合格，F(xiàn)IB與正常血漿結(jié)果比較略低。建議制備過程中如發(fā)現(xiàn)纖維蛋白析出的血液，直接報廢處理。另外，使用顯微鏡鏡檢發(fā)現(xiàn)過濾前個別懸浮紅細(xì)胞標(biāo)本出現(xiàn)明顯紅細(xì)胞聚集，而過濾后沒有發(fā)現(xiàn)明顯紅細(xì)胞聚集，這與白細(xì)胞濾器主要為機(jī)械攔截過濾和電荷吸附作用的過濾機(jī)制有關(guān)[7]，經(jīng)過白細(xì)胞濾器的過濾可以在一定程度上去除血液中的雜質(zhì)，并能夠降低活化白細(xì)胞的數(shù)量[8-9]，因此不排除可以有效濾除凝集大的細(xì)胞與凝塊。過濾后懸浮紅細(xì)胞細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果均無細(xì)菌生長。由于本研究中血液凝塊<20 mm和有纖維蛋白析出的標(biāo)本數(shù)較少，需要考慮標(biāo)本量不平衡可能對試驗結(jié)果造成的偏倚，今后還應(yīng)擴(kuò)大樣本量，豐富完善相關(guān)數(shù)據(jù)。

根據(jù)國家規(guī)定，一些采供血機(jī)構(gòu)已對血液中紅細(xì)胞成分使用白細(xì)胞濾器進(jìn)行了過濾，制備成去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞[10-12]，因此，臨床使用時均已去除白細(xì)胞和血液凝塊，明顯減少了不良輸血反應(yīng)，使用效果良好，是輸血界推薦的成分血。本研究將懸浮紅細(xì)胞用白細(xì)胞濾器進(jìn)行了過濾，實際上是制備了去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞成分，并得到過濾血液凝塊后的血液質(zhì)量檢測數(shù)據(jù)，結(jié)果表明在一定范圍內(nèi)安全有效。

綜上所述，血液凝塊≥20 mm的懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量檢測不合格，血液凝塊<20 mm的懸浮紅細(xì)胞質(zhì)量檢測合格。纖維蛋白析出的冰凍血漿TP檢測不合格。血液采集時，應(yīng)對采血過程進(jìn)行嚴(yán)格管理，提高采血人員采血技術(shù)，避免血管異常獻(xiàn)血者獻(xiàn)血，減少血液凝塊產(chǎn)生，避免血液報廢，有條件時推廣白細(xì)胞濾器的全面使用，讓臨床獲得不良反應(yīng)較少的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞成分血。