楊寧娟，劉妍如，唐志書，宋忠興，段金廒，陳 琳，劉 峰，陳衍斌，許 剛，史鑫波

基于“質量標志物-生物活性”關聯(lián)分析評價丹參的等級

楊寧娟1，劉妍如1*，唐志書1*，宋忠興1，段金廒4，陳 琳1，劉 峰2，陳衍斌3，許 剛3，史鑫波1

1. 陜西中醫(yī)藥大學 陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同中心，省部共建協(xié)同秦藥特色資源研究與開發(fā)重點實驗室（培育），陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083 2. 陜西國際商貿(mào)學院，陜西 咸陽 712083 3. 陜西步長制藥有限公司，陜西 西安 710075 4. 南京中醫(yī)藥大學 江蘇省方劑高技術研究重點實驗室，江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210023

基于“成分反映活性，活性指向功效”的中藥質量控制研究思路，建立用于丹參飲片等級評價的Logistic回歸模型。采用超高效液相色譜法（UPLC）測定丹參質量標志物（quality marker，Q-marker）含量，以凝血酶時間（thrombin time，TT）、羥自由基抑制率、DPPH自由基清除率作為生物活性評價指標，運用Logistic回歸分析法將質控指標和生物活性指標進行關聯(lián)分析，最后建立Logistic回歸模型。Logistic模型結果顯示，31批丹參飲片被分成了優(yōu)、良、中、差4個等級，樣本等級預測概率（）值均大于90%，說明本研究所建立的模型其準確性和預測能力均較好?；诤繙y定及生物活性結果建立的Logistic回歸模型可用來評價丹參飲片質量高低，為丹參整體質量控制提供參考依據(jù)。

丹參；二分類Logistic回歸分析；生物活性；超高效液相色譜；質量標志物

丹參是唇形科植物丹參Bunge.的干燥根或根莖，收載于《中國藥典》2015年版[1]，是中醫(yī)臨床常用大品種中藥飲片之一。主要分布在我國華北、華東、西北地區(qū)[2]。丹參味微辛、苦，歸心經(jīng)、肝經(jīng)[3]，具有抑制血小板聚集、抗心肌缺血、抗動脈粥樣硬化等功效。臨床上常用于治療心肌缺血、心力衰竭以及動脈粥樣硬化等心血管疾病[4-6]。近年來，通過野生品、栽培品[7]、產(chǎn)地[8]、直徑[9]以及根皮顏色[10]與有效成分含量的相關性對丹參進行等級分類的研究甚多，但飲片是由藥材經(jīng)除去雜質和殘莖、洗凈、潤透、切厚片、干燥等加工工序制成，炮制方法不同，有效成分的含量都會受到影響，因此不能完全依照丹參有效成分的含量標準評價丹參飲片質量，及時修訂丹參飲片的質量標準是亟待解決的問題。

中藥化學成分復雜多樣給中藥質量控制帶來了巨大的挑戰(zhàn)。劉昌孝院士[11]于2016年首次提出中藥質量標志物（quality marker，Q-markers）新概念，使中藥質量控制體系更加完善。劉妍如等[12]對腦心通膠囊中Q-marker進行預測分析，指出丹參中的丹酚酸B和丹參酮IIA可作為丹參的Q-marker，故可通過測定其含量增加質量控制結果的準確性。范華英[13]指出丹參酮IIA能降低血液黏度，抑制凝血酶活化和加速纖維蛋白降解；丹酚酸B可以減少血小板激活和動脈血栓的形成。因此本課題組將凝血酶時間（thrombin time，TT）作為評價丹參抗凝血作用的主要指標。此外，丹參在治療心腦血管疾病的作用與其提取物具有抗氧化活性有關，其機制為通過抑制自由基的產(chǎn)生而保護心臟免受傷害[14]，故選用羥自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除率作為評價丹參抗氧化能力的指標。

本研究以31批不同產(chǎn)地的丹參飲片為研究對象，采用Logistic回歸分析法對質控指標和TT、羥自由基清除率及DPPH自由基清除率等生物活性指標進行關聯(lián)分析，最后建立用于丹參等級評價的Logistic回歸模型，為建立科學、可靠的丹參飲片分級標準提供新思路。

1 材料與儀器

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級SD大鼠，雄性，體質量 (240±10) g，購于成都達碩實驗動物有限公司，實驗動物許可證號SCXK（川）2015-030。保持溫度 (22±3) ℃，相對濕度(50±10)%，自由飲水攝食，適應性飼養(yǎng)1周。實驗動物的飼養(yǎng)和使用，以及動物的處理嚴格遵循中國實驗動物倫理委員會的相關規(guī)定。

1.1.2 試劑 丹酚酸B（批號MUST-18070503，質量分數(shù)98.51%）、丹參酮IIA（批號MUST-17022502，質量分數(shù)99.64%）購于成都曼思特生物科技有限公司；凝血酶時間TT測定試劑盒（上海長島生物技術有限公司）；羥自由基試劑盒（批號W27F10E81251，南京建成生物工程研究所）；DPPH（批號W27F10E81251，源葉生物公司）；含枸櫞酸鈉添加劑一次性真空采血管（批號181201，江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）；0.9%氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)股份有限公司）；甲酸（FlukaTM，色譜純，美國霍尼韋爾公司）；甲醇、乙腈為色譜純，購于德國默克公司；其他試劑均為分析純。實驗用水為屈臣氏蒸餾水。

1.1.3 藥材 本研究收集31批丹參飲片，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學劉世軍教授鑒定為唇形科植物丹參Bunge. 的干燥根和根莖。丹參對照藥材（批號SGAS-QTQ3）購于中國食品藥品檢定研究院；31批丹參基本信息見表1。

表1 31批丹參藥材信息

1.2 儀器

Acquity H-CLASS型超高效液相色譜系統(tǒng)（美國沃特世公司）；包括二元超高壓溶劑系統(tǒng)、FTN自動進樣管理器、PDA檢測器和Empower 3色譜工作站；1510型全波長酶標儀（美國Thermo公司）；Sartorius CPA225D十萬分之一分析天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）；Thermo Micro 17R微量低溫冷凍離心機（上海珂淮儀器有限公司）；C2000-A型全自動凝血分析儀（北京普利生儀器有限公司）。

2 方法

2.1 樣品的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 分別取丹酚酸B和丹參酮IIA對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成丹酚酸B和丹參酮IIA質量濃度均為0.22 mg/mL的混合對照品溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過4號篩）約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率140 W、頻率42 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為ACQUITY UPLC?BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動相為0.1%甲酸-水溶液（A）-乙腈溶液（B）；梯度洗脫條件為0～2 min，2% B；2～10 min，2%～100% B；10～13 min，100% B；13～15 min，100%～2% B，后運行5 min；體積流量0.2 mL/min；柱溫25 ℃；檢測波長270 nm；進樣量2 μL。色譜圖見圖1。

圖1 丹參提取物 (A)、丹酚酸B (B)、丹參酮ⅡA (C) 及空白對照 (D) 的色譜圖

2.3 方法學考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性考察 將“2.1.1”和“2.1.2”項下的對照品及供試品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件分別進樣2 μL，記錄270 nm波長下的UPLC譜圖，比較在線紫外光譜圖和保留時間，此條件下丹酚酸B、丹參酮IIA強度適中且與相鄰峰分離較好且理論塔板數(shù)不低于8000。

2.3.2 線性關系考察 分別精密移取混合對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加1∶1的甲醇水溶解至刻度，搖勻。按“2.2”項下色譜條件分析，以對照品峰面積為縱坐標（），質量濃度為橫坐標（），繪制標準曲線。丹酚酸B線性范圍為30.0～150.0 μg/mL，丹參酮IIA線性范圍為20.0～70.0 μg/mL，表明各對照品在實驗質量濃度范圍內(nèi)線性關系良好

2.3.3 精密度試驗 吸取“2.1.2”項下供試品溶液適量，以“2.2”項下色譜條件連續(xù)測定6次，記錄保留時間和峰面積，結果顯示丹酚酸B、丹參酮IIA的相對保留時間RSD分別為0.02%、0.06%，相對峰面積RSD分別為0.39%、0.76%。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 吸取“2.1.2”項下供試品溶液適量，分別于室溫放置0、3、6、12、18、24、36 h，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄保留時間和峰面積，結果顯示丹酚酸B、丹參酮IIA的相對保留時間RSD分別為0.04%、0.08%，相對峰面積RSD分別為0.41%、0.82%。

2.3.5 重復性試驗 按“2.1.2”項下方法制備6份供試品溶液，以“2.2”項下色譜條件測定，記錄保留時間和峰面積，結果丹酚酸B、丹參酮IIA的相對峰面積RSD為0.19%、0.67%，相對保留時間RSD分別為0.01%、0.02%。

2.3.6 加樣回收率試驗 按“2.1.2”項下方法制備6份供試品溶液，按照低、中、高3個添加水平（80%、100%、120%）進行加樣回收測定，以“2.2”項下色譜條件平行測定6次，記錄峰面積。丹酚酸B和丹參酮IIA加樣回收率為101.05%、99.86%，RSD值分別為0.16%、0.56%。

2.4 體內(nèi)抗凝血活性測定[15]

2.4.1 血漿制備 大鼠腹主動脈取血，采用3.2%枸櫞酸鈉抗凝，全血與抗凝劑比例為9∶1，將血液分裝在離心管內(nèi)，2500 r/min，離心15 min，取血漿備用。

2.4.2 丹參粉末的前處理 精密稱取丹參粉末1.00 g，加0.9%的生理鹽水至10 mL，超聲20 min，然后將其分裝在離心管內(nèi)，用離心機以5000 r/min離心10 min，取上清液，再以5000 r/min離心5 min，取上清液，用0.22 μm針頭過濾器濾過，得丹參粉末提取原液。

2.4.3 TT測定 取血凝儀測試杯，每通道精密加入血漿90 μL，分別加入不同濃度的丹參溶液50 μL，用全自動血凝儀測定TT值，為保證測量的準確性，測定應在4 h內(nèi)完成，且不可冷凍保存和過度震蕩。

2.4.4 量效關系考察 將S11提取原液用0.9%氯化鈉注射液稀釋成質量濃度為13.30、10.60、8.50、6.80、5.40、4.40、3.40、2.80、2.20、1.80、1.40 mg/mL溶液（劑間比0.8），按“2.4.3”項方法，分別測定含藥血漿的TT，每個濃度平行測定3次，見圖2。結果發(fā)現(xiàn)，S11丹參提取液濃度較低時，體外抗凝血作用不明顯，不具有劑量依賴性，而在一定質量濃度范圍內(nèi)劑量依賴性較為明顯，并在該質量濃度范圍內(nèi)隨著丹參溶液質量濃度的增加，TT值也在增加。通過量效關系考察實驗，認為S11樣品的一定質量濃度范圍，可作為其他批次丹參樣品TT測定時質量濃度范圍選擇的依據(jù)。

圖2 丹參在體外對TT的量效關系考察結果

2.4.5 線性范圍考察 根據(jù)量效關系考察結果，將S11提取液用0.9%氯化鈉注射液稀釋成質量濃度為13.30、10.60、8.50、6.80、5.40 mg/mL的溶液，劑間比為0.8，按“2.4.3”項方法，分別測定含藥血漿的TT，平行測定3次，以藥物質量濃度為橫坐標（），TT值為縱坐標（）繪制標準曲線，發(fā)現(xiàn)丹參提取液的質量濃度在5.40～13.30 mg/mL時，TT與質量濃度的線性關系良好，其回歸方程為＝2 281.6＋26.738，＝0.999 6。通過該線性范圍考察，明確了S11的線性質量濃度范圍，并將該范圍的中間質量濃度8.50 mg/mL作為各批次樣品測定TT時的質量濃度。

2.4.6 效價定義及各批次丹參TT測定 將質量濃度為8.50 mg/mL的丹參溶液使空白血漿的TT延長1 s定義為1個效價單位（U）。取各批次丹參提取原液，用生理鹽水稀釋成質量濃度為8.50 mg/mL的標準溶液，按“2.4.3”項下方法連續(xù)測定6次，取平均值作為該批樣品的效價。

標準品的效價＝/(V×C)

為標準品溶液比空白血漿TT延長的時間，為標準品溶液體積，為標準品溶液的濃度

2.4.7 羥自由基清除率測定 參考羥自由基試劑盒說明書，采用微量法進行加樣，每個樣品設3個復孔，重復2次，測定吸光度（）值。根據(jù)公式計算樣品的羥自由基清除率，取平均值。

羥自由基清除率＝(c－s)/s

s為測定管的值，c為對照管的值

2.4.8 DPPH自由基清除率測定 用甲醇配制0.2 mmol/L的DPPH溶液，避光保存?zhèn)溆?；另配?.0 mg/mL的維生素C（Vc）溶液備用，參考文獻方法[16]，采用微量法在96孔板上進行操作，取150 μL 70%甲醇，加入150 μL 待測液作為空白組；取 150 μL 70 %甲醇，加入150 μL DPPH溶液作為對照組；取150 μL DPPH 溶液，加入150 μL維生素 C（Vc）溶液作為標準組；取150 μL DPPH 溶液，加入150 μL 待測液作為測定組。加樣完成后于室溫下避光靜置30 min，采用酶標儀測定 517 nm 處的吸光度（A）值。每個樣品設置 3 個復孔，重復實驗2次。根據(jù)公式計算丹參提取液的DPPH自由基清除率，取平均值。

DPPH自由基清除率＝1－(s－b)/c

s為測定管的值，b為空白管的值，c為對照管的值

2.5 丹參飲片等級評價

2.5.1 主成分（principal component analysis，PCA）分析 PCA是一種將多維數(shù)據(jù)進行降維處理，簡化為少數(shù)幾個不相關的綜合指標（主成分）的多元統(tǒng)計分析方法。其目的在于減少變量的數(shù)目使多變量數(shù)據(jù)集可視化，結合原始變量的線性關系生成影響分類較大的主成分。因此，采用PCA方法觀察樣品差異情況，將提取的數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)對齊、積分、標準化處理，導入至Simca-p 14.1軟件中，以其影響因素（質控含量，生物活性）作為觀測值（）進行PCA分析，從得到的數(shù)據(jù)矩陣中提取攜帶差異變量最多的主成分。提取前2個主成分，得到模型擬合度為83.9%。PC1的貢獻率為66.1%，包合差異信息最多，這說明此模型擬合能力較好，其模型預測圖見圖3-A。

以前2個主成分建立投影，得到散點圖見圖3-B。采用聚類分析（hierarchical cluster analysis，HCA）方法，對31個批次的丹參數(shù)據(jù)進行聚類分析，發(fā)現(xiàn)樣本被自動分為4類（組1～4），由圖3可見，丹參正品和偽品有明顯的分類距離。浙皖丹參、白花丹參和南丹參等批次是丹參的代用品被分為一類（綠色）；甘西鼠尾草和偽品分為一類（紅色），其他2類為丹參正品（黃色，藍色），見圖3-C。結果表明，采用PCA的分類具有較高的可靠性。

A-模型預測圖 B-PCA散點圖 C-HCA聚類圖

2.5.2 建立Logistic回歸模型 目前，已有大量研究采用Logistic回歸模型對不同產(chǎn)地的中藥材或飲片進行等級分類，這不僅為相關藥物的質量評價提供了實驗數(shù)據(jù)，還給生產(chǎn)該藥物相關制劑時投料飲片產(chǎn)地來源的選擇提供了一定的參考[17-19]。而影響丹參投料飲片的主要因素分為2類：第1類是主要成分的質控含量；第2類是生物活性（抗氧化活性、抗凝血活性），故本研究通過Logistic模型建立各產(chǎn)地的丹參樣本對應的主成分（質控含量、生物活性）與歸屬等級之間的函數(shù)關系。根據(jù)丹參質控成分，生物活性等測定結果對實驗數(shù)據(jù)進行初步分級，將其分成訓練集和測試集2部分，運用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對選定的訓練集樣本進行Logistic回歸分析擬合方程，再對測試集樣本進行分類預測。

3 結果與分析

3.1 定量測定

取31批丹參樣品，按照“2.1.2”項下方法制備3份供試品溶液，精密吸取對照品溶液及供試品溶液各2 μL，注入液相色譜儀，以“2.2”項下色譜條件平行測定6次，記錄峰面積和保留時間，計算各批次樣品的平均質量分數(shù)。結果見表2。

表2 31批丹參質控成分含量測定結果()

3.2 抗凝血活性測定

將31批丹參按“2.4.2”項下方法制備并稀釋至質量濃度為8.50 mg/mL的溶液，按“2.4.3”項下方法測定各批次丹參的TT值，平行測定6次。通過效價定義公式計算不同批次丹參的生物效價，見圖4。

圖4 31批丹參抗凝血生物活性測定結果(n＝6)

3.3 抗氧化活性測定

取31批丹參樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.4.7”“2.4.8”項下方法測定丹參體外抗氧化活性，平行測定3次。各批次羥自由基清除率結果見圖5-A，DPPH自由基清除率結果見圖5-B。

圖5 31批丹參羥自由基清除率(A)和DPPH自由基清除率(B)測定結果(n＝3)

3.4 等級評價

以“3.1”項下各個批次測定結果作為模式識別的基礎，擬將丹參不同批次按照優(yōu)（1）、良（2）、中（3）、差（4）4個等級分類，分別賦予響應值4、3、2、1。以SPSS軟件對Logistic模型參數(shù)進行求解，得到模型表達式如下。

優(yōu)=exp(?85.539＋0.121×抗凝血TT＋3.845×丹參酮IIA含量＋1.166×丹酚酸B含量?0.240×抗氧化DPPH＋0.119×抗氧化OH)/[1＋exp(?85.539＋0.121×抗凝血TT＋3.845×丹參酮IIA含量＋1.166×丹酚酸B含量?0.240×抗氧化DPPH＋0.119×抗氧化OH)]

良=exp(69.307?0.461×抗凝血TT?12.857×丹參酮IIA含量＋1.326×丹酚酸B含量?0.771×抗氧化DPPH?1.160×抗氧化OH)/[1+exp(69.307?0.461×抗凝血TT?12.857×丹參酮IIA含量＋1.326×丹酚酸B含量?0.771×抗氧化DPPH?1.160×抗氧化OH)]

中=exp(118.369＋1.223×抗凝血TT?3.453×丹參酮IIA含量＋0.642×丹酚酸B含量?5.175×抗氧化DPPH＋0.645×抗氧化OH)/[1＋exp(118.369＋1.223×抗凝血TT?3.453×丹參酮IIA含量＋0.642×丹酚酸B含量?5.175×抗氧化DPPH＋0.645×抗氧化OH)]

差=exp(?12.692?0.189×抗凝血TT＋1.571×丹參酮IIA含量?1.056×丹酚酸B含量＋1.272×抗氧化DPPH?0.152×抗氧化OH)/[1＋exp(?12.692?0.189×抗凝血TT＋1.571×丹參酮IIA含量?1.056×丹酚酸B含量＋1.272×抗氧化DPPH?0.152×抗氧化OH)]

將不同批次丹參的丹酚酸B、丹參酮IIA含量和生物活性（抗凝血效價，抗氧化活性）等指標實測值代入回歸模型表達式中，從而確定丹參等級（接近1則判定為該等級），各等級評價結果見表3。由表3可知，不同產(chǎn)地丹參飲片概率均達到90%以上，這說明該模型可以較好地對丹參飲片等級進行評價，其中，優(yōu)級丹參有6個批次，良級有6個批次，中級有9個批次，其余為差級。而結合表1及表3結果，不難發(fā)現(xiàn)，本實驗結果與初始定級標準基本相同，但丹參質量等級評價結果與丹酚酸B及丹參酮IIA含量測定結果不呈單純的線性關系，這提示在判斷丹參質量優(yōu)劣的過程中還應將抗凝血、抗氧化等生物學指標劃入考慮范圍之內(nèi)。

4 討論

4.1 色譜條件優(yōu)化

本實驗考察了乙腈-水、乙腈-磷酸水、乙腈-醋酸水和乙腈-甲酸水作為色譜流動相，結果顯示，乙腈-0.1%甲酸水的峰形最佳，分離效果優(yōu)于其它流動相，故選擇乙腈-0.1%甲酸水作為流動相；采用PDA檢測器進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)在270 nm波長下，樣品待測成分的峰型好，基線平穩(wěn)，響應值高，因此選擇270 nm波長作為本實驗含量測定的檢測波長。此外，還考察了體積流量和進樣量對色譜峰峰形以及峰參數(shù)的影響，結果顯示，體積流量0.2 mL/min，進樣量2 μL時峰形最好。

表3 31批丹參的等級評價結果

4.2 測定生物活性的方法選擇

現(xiàn)代藥理研究表明，丹參水溶性成分有清除羥自由基的功效，能夠抑制或降低脂質過氧化反應，起到防治心、腦血管病、肝病、腎臟病的作用[20]，本實驗選擇測定其抗氧化能力作為生物活性評價指標之一。目前，用于評價藥物抗氧化能力的方法很多[21-22]，主要分為體內(nèi)和體外2種，體內(nèi)實驗成本高且繁瑣，動物個體差異影響大；而體外實驗篩選法，具有簡便、迅速、影響因素少的特點，適合于中藥抗氧化能力的快速評價。據(jù)報道，不同中藥與DPPH自由基反應達到平衡所需的時間不同，如維生素C與DPPH反應20 min即達到平衡[23]，而丹參提取液與DPPH反應時間緩慢，故從實際操作角度出發(fā)，本研究確定在加入DPPH溶劑充分反應30 min后統(tǒng)一測定樣品，此時樣品的吸光度變化趨于平穩(wěn)，保證測定的準確性。

丹參具有顯著的活血化瘀作用[24]，本研究通過體外對SD大鼠血漿進行TT測定來評價丹參的抗凝血能力。在實驗操作過程中，為最大程度接近人體環(huán)境，采用生理鹽水作為提取溶劑。為保證實驗結果的準確性，本研究嚴格控制SD大鼠血漿和藥物提取液的比例。實驗結果表明，丹參對體外SD大鼠血漿TT值有明顯的延長作用，且TT值與丹參劑量成依賴性，兩者之間也存在明顯的線性關系，因此，采用TT值來評價丹參體外抗凝血活性的方法具有較強的可行性。

4.3 Logistic回歸模型選擇

從模型的通用性和實用性考慮，具有一定數(shù)學表達式的模型更易于被理解和應用，其只需將實際數(shù)據(jù)輸入數(shù)學表達式中即可計算出預測結果。故本研究采用Logistic回歸模型來描述丹參投料飲片等級與影響因素（成分含量、生物活性）之間的映射關系，建立丹參投料飲片預測的數(shù)學表達式，計算影響因素屬于各等級的概率，最終確定投料飲片等級。結果發(fā)現(xiàn)，Logistic回歸模型對所選樣本的擬合結果與實際結果基本一致，說明本研究所建立的模型可以表達投料飲片等級分類標準。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 中國藥典 [S]. 一部. 2015: 76-77.

[2] 蔡良, 徐雄飛, 譚靈芝, 等. 丹參藥材產(chǎn)地篩選及炮制工藝的研究 [J]. 廣東化工, 2016, 43(20): 93-94.

[3] 陳琴華, 王招玉, 熊琳, 等. 丹參的炮制工藝及分析方法研究 [J]. 中醫(yī)藥導報, 2016, 22(12): 54-57.

[4] 方芳, 王平珍, 邱蕓. 中藥丹參的臨床研究進展 [J]. 內(nèi)蒙古中醫(yī)藥, 2012, 31(19): 81-82.

[5] 李翔, 吳磊宏, 范驍輝, 等. 復方丹參方主要活性成分網(wǎng)絡藥理學研究 [J]. 中國中藥雜志, 2011, 36(21): 2911-2915.

[6] 羅明, 陳夢潔, 寧藝, 等. 依那普利與丹參多酚酸注射液合用對慢性肺源性心臟病患者的臨床實效性評價 [J]. 山西中醫(yī), 2015, 31(6): 22-24.

[7] 潘雪梅, 韋輝, 劉毅, 等. 不同產(chǎn)地丹參藥材質量研究 [J]. 中草藥, 2011, 42(9): 1833-1836.

[8] 鄧寒霜, 王新軍. 丹參藥材分級標準驗證實驗 [J]. 藥學進展, 2006, 30(1): 35-39.

[9] 王海, 嚴鑄云, 沈昱翔, 等. 丹參藥材的顏色特征與有效成分的相關性研究 [J]. 中藥新藥與臨床藥理, 2014, 25(3): 333-338.

[10] 李春霞, 余潔, 陸遠富, 等. 丹參酮類心腦血管保護作用與機制的研究進展 [J]. 中國新藥與臨床雜志, 2016, 35(8): 542-546.

[11] 劉昌孝, 陳士林, 肖小河, 等. 中藥質量標志物(Q-Marker): 中藥產(chǎn)品質量控制的新概念 [J]. 中草藥, 2016, 47(9): 1443-1457.

[12] 劉妍如, 唐志書, 宋忠興, 等. 多元統(tǒng)計及“成分-靶點-疾病”在線關聯(lián)分析腦心通膠囊中質量標志物 [J]. 中草藥, 2018, 49(12): 2775-2785.

[13] 范華英. 丹酚酸A抗血小板及抗血栓作用的研究 [D]. 長春: 吉林大學, 2012.

[14] 王研, 溫新寶, 秦翠萍, 等. 丹參提取物體外抗氧化活性研究 [J]. 西北農(nóng)業(yè)學報, 2011, 20(11): 160-163.

[15] 談利紅, 楊宗發(fā), 張丹, 等. 中藥抗氧化活性成分及評價方法研究進展 [J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2017, 13(10): 35-37.

[16] 肖珠, 王志斌, 程源, 等. 益心通絡膠囊體外抗凝血的生物活性測定法研究 [J]. 實驗動物科學, 2017, 34(3): 20-23.

[17] 閆亞峰, 宋忠興, 劉妍如, 等. 基于“生物活性-質量標志物”關聯(lián)的紅花等級評價研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(19): 4683-4690.

[18] 李曉紅, 劉妍如, 唐志書, 等. 基于“生物活性-質量標志物”關聯(lián)的赤芍飲片等級評價方法研究 [J]. 中草藥, 2020, 51(10): 2611-2617.

[19] 江大海, 劉妍如, 王梅, 等. 基于二分類Logistic回歸分析的桂枝等級預測研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(19): 4697-4704.

[20] 高兵. 丹參的藥理作用及臨床應用分析 [J]. 中國現(xiàn)代藥物應用, 2018, 12(1): 196-197.

[21] 肖覃, 楊思敏, 胡閩, 等. 丹參-葛根提取物抗氧化能力與活性成分的相關性研究 [J]. 精細化工中間體, 2018, 48(1): 49-54.

[22] 李晶, 沈震亞, 陳超, 等. 南丹參中酚酸類成分抗氧化活性譜效關系研究 [J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2017, 28(12): 2895-2897.

[23] 余蘭彬, 徐國良, 譚志偉, 等. DPPH法對5種抗衰老中藥抗氧化活性的研究 [J]. 江西中醫(yī)藥, 2016, 47(8): 74-76.

[24] 穆娟, 趙明峰, 李玉明. 丹參在藥理作用的研究現(xiàn)況 [J]. 當代醫(yī)學, 2017, 23(27): 182-184.

Grade evaluation ofbased on correlation of “quality marker-biological activity”

YANG Ning-juan1, LIU Yan-ru1, TANG Zhi-shu1, SONG Zhong-xing1, DUAN Jin-ao4, CHEN Lin1, LIU Feng2, CHEN Yan-bin3, XU Gang3, SHI Xin-bo1

1. Drugsand ChineseMedicineFoundationResearch, Xianyang 712083, China 2. Shaanxi International Business College, Xianyang 712083, China 3. Shaanxi Buchang Pharmaceutical Co., Ltd. Xi’an 710075, China 4. Jiangsu Key Laboratory for Traditional Chinese Medical Formula Research, Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization of Jiangsu Province, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China

A logistic regression model for grade evaluation ofmedicinal slices was constructed based on the quality control idea of traditional Chinese medicines that “ingredients reflect activity and activity expresses effect”.Q-marker content inwas tested by ultra-high performance liquid chromatography (UPLC). Thrombin time (TT) inhibition rate of hydroxyl radical and DPPH clearance rate were used as evaluation indexes of biological activity. Correlations between quality control indexes and bioactivity indexes were analyzed by the logistic algorithm. Finally, A Logistic regression model was established.The results of Logistic model showed that 31 batches ofmedicinal slices were divided into four grades: excellent, good, medium and poor.values of sample grade prediction were higher than 90%, indicating the high accuracy and prediction ability of the Logistic model.The Logistic model based on content determination and biological activity can be used to evaluate quality ofand provide some reference for quality control.

Bge.;binary logistic regression analysis;bioactivity; UPLC; Q-marker

R286.2

A

0253 - 2670(2021)04 - 1135 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.04.027

2020-06-08

陜西省“特支計劃”青年拔尖人才項目；國家中藥標準化項目（ZYBZH-C-QIN-45）；基于多維整合分析策略的盤龍七片質量標志物發(fā)現(xiàn)與大品種技術提升研究（2020ZDLSF05-08）

楊寧娟（1994—），女，碩士研究生，研究方向為中藥藥劑。Tel: 18291009983 Email: ynj214218@163.com

劉妍如，女，副教授，碩士生導師，主要從事藥物分析研究。Tel: (029)38182207 Email: yanzi_2203@aliyun.com

唐志書，男，教授，碩士生導師，主要從事中藥制劑制備技術的研究。Tel: (029)38185060 Email: tzs6565@163.com.

[責任編輯 時圣明]