周賽賽，宋仁德，羅曉林，趙索南，馬進(jìn)壽，參木友，石紅梅，索朗斯珠

（1.西藏農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，林芝860000；2.青海玉樹藏族自治州畜牧獸醫(yī)工作站，玉樹815400；3.四川省草原科學(xué)研究院，成都610097；4.青海省海北畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，海北812200；5.青海省大通種牛場(chǎng)，大通810102；6.西藏農(nóng)牧科學(xué)院草原研究所，拉薩850000；7.甘南州畜牧工作站，甘南747000）

輪狀病毒（Rotavirus，RV）是呼腸孤病毒科（Reoviridae）輪狀病毒屬（Rotavirus）成員，可分為A～G 7個(gè)不同群；A群RV是5歲以下兒童和各幼齡動(dòng)物病毒腹瀉的病原之一，是導(dǎo)致嚴(yán)重腹瀉的人畜共患病原，在國(guó)內(nèi)外廣泛流行[1-4]。牛輪狀病毒（Bovine rotavirus，BRV）是導(dǎo)致牛腹瀉的病原之一，犢牛腹瀉嚴(yán)重影響了犢牛的健康生長(zhǎng)。目前，在四川[5]、新疆[6]、黑龍江[7]、內(nèi)蒙古[8]等地均分離鑒定出了BRV；印度[9]、巴西[10]、泰國(guó)[11]、烏干達(dá)共和國(guó)[12]等國(guó)家均呈地方性流行。牦牛是生活在青藏高原地區(qū)包括我國(guó)西藏全部地區(qū)和青海、甘肅、四川、云南、新疆的部分地區(qū)的獨(dú)特物種，是高原地區(qū)農(nóng)牧民的經(jīng)濟(jì)支柱。雖然BRV對(duì)我國(guó)牦牛產(chǎn)業(yè)影響較大，但由于青藏高原地理環(huán)境惡劣、民族文化差異、牦牛生活習(xí)慣差異等原因，我國(guó)還尚未對(duì)牦牛源RV進(jìn)行大規(guī)模系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查研究。本研究采用BRV抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，在2014-2019年采集的西藏7地市、青海、甘肅、四川部分地區(qū)牦牛血清樣品中隨機(jī)挑選了630份進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，明確牦牛源RV在青藏高原各省區(qū)的流行情況，為青藏高原BRV的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 Bovine RV-Ab ELISA Kit，批號(hào)為ZKB6971，生產(chǎn)日期為2019年6月，有效期6個(gè)月，購(gòu)自深圳子科生物科技有限公司。

1.2 血清樣品來源 2014-2019年采集并選取牦牛血清630份，牦牛均未免疫過RV疫苗，置于-80℃冰箱保存。

1.3 抗體檢測(cè)和結(jié)果判定 按照Bovine RV-Ab ELISA Kit（批號(hào)：ZK-B6971）說明書對(duì)血清樣品進(jìn)行RV抗體檢測(cè)和結(jié)果判定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 利用SPSS 19.0軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行年份、地區(qū)、年齡差異分析，取連續(xù)校正卡方（χ2）值，通過χ2檢驗(yàn)并分析差異顯著性，P＜0.01為差異極顯著，0.01＜P＜0.05為差異顯著，P＞0.05為無顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同年份牦牛感染RV的情況 2014-2019年青藏高原牦牛輪狀病毒血清抗體檢測(cè)結(jié)果見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯示：僅2014年RV陽(yáng)性率較高，與其他年份陽(yáng)性率差異極顯著（P＜0.01），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；除2014年以外其他年份間陽(yáng)性率差異不顯著（P＞0.05）。高原地區(qū)牦牛飼養(yǎng)方式多為散養(yǎng)模式，牛群中一旦感染RV，將會(huì)在種群內(nèi)一直伴隨牛群，這可能是近些年青藏高原地區(qū)牦牛RV血清陽(yáng)性率較高的原因之一，表明近些年RV可能一直在影響青藏高原地區(qū)牦牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

表1 不同年份青藏高原牦牛血清RV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 Detection results of yak sera RV antibody in Qinghai-Tibet plateau in different years

2.2 不同地區(qū)牦牛RV的檢測(cè)結(jié)果 通過對(duì)青藏高原4個(gè)省牦牛BRV抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表2和圖1。青藏高原地區(qū)牦牛RV總陽(yáng)性率為18.57%（117/630），西藏牦牛RV抗體陽(yáng)性率（25.76%）平均水平明顯高于其他地區(qū)，并且西藏地區(qū)抗體陽(yáng)性率高于青海地區(qū)（8.33%），差異極顯著（P＜0.01），高于四川地區(qū)（11.67%），差異顯著（P＜0.05）。青藏高原的西藏地區(qū)氣候和其他地區(qū)牧場(chǎng)相比，更為惡劣，飼養(yǎng)環(huán)境更差，側(cè)面證實(shí)了Herv á s等[13]所表達(dá)的觀點(diǎn)，高海拔及惡劣氣候會(huì)影響RV對(duì)人和其他動(dòng)物的感染性。李鑫等[14]收集了2005-2006年我國(guó)12省份的1760份牛血清并對(duì)BRV抗體進(jìn)行了檢測(cè)，其中西藏176份血清中，BRV抗體弱陽(yáng)性率12%，中陽(yáng)性率71%，強(qiáng)陽(yáng)性率17%，總陽(yáng)性率高達(dá)100%，比本試驗(yàn)中RV抗體陽(yáng)性率最高的西藏地區(qū)還高，說明西藏牦牛的感染率非常高，因此，要加強(qiáng)西藏地區(qū)RV的監(jiān)測(cè)。2014年，賀曉龍[15]檢測(cè)了青海省天峻、海晏、共和地區(qū)的犢牦牛血清RV抗體，平均總陽(yáng)性率為4.17%，與本次檢測(cè)的海北、大通、玉樹的總陽(yáng)性率為（8.33%）相比，差異不顯著（P＞0.05）。李然、周芳等[5,16]已經(jīng)分離出牦牛RV，但并未能對(duì)青藏高原牦RV進(jìn)行充分流行病學(xué)調(diào)查。本研究雖選擇了西藏7個(gè)地市的牦牛血清樣品，但仍有不全面之處，后期還需對(duì)全陰性的阿里地區(qū)增加檢測(cè)數(shù)量。牦牛RV感染可能因地理位置、氣候環(huán)境等因素存在差異，因此，應(yīng)該對(duì)牦牛RV加強(qiáng)區(qū)域化監(jiān)測(cè)，才能有利于牦牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

圖1 青藏高原各地區(qū)牦牛RV血清抗體檢測(cè)結(jié)果Fig. 1 Detection of yak serum antibody against BRV in different areas of Qinghai-Tibet plateau

表2 不同地區(qū)青藏高原牦牛血清RV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of yak sera RV antibody in Qinghai-Tibet Plateau

2.3 不同月齡牦牛RV的檢測(cè)結(jié)果 對(duì)不同年齡牦牛的檢測(cè)結(jié)果見圖2。≤4月齡犢牛RV血清抗體陽(yáng)性率（32.27%）極顯著高于4～12月齡牦牛（14.05%）和≥12月齡牦牛（9.76%），差異極顯著（P＜0.01），4～12月齡牦牛的血清抗體陽(yáng)性率（14.05%）和≥12月齡牦牛的差異不顯著（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，青藏高原牦牛RV感染存在月齡差異，≤4月齡牦牛RV陽(yáng)性率較高，最為易感。青藏高原牦牛養(yǎng)殖方式主要為散養(yǎng)，牦?；顒?dòng)范圍廣，糞便處理?xiàng)l件差，RV極易通過糞口傳播，幼齡動(dòng)物的呼吸道和消化道較敏感，且自身抵抗力弱，因此，更易感染RV。

圖2 不同年齡階段牦牛RV血清抗體陽(yáng)性率比較Fig. 2 Positive rate comparison of BRV serum antibody in yaks of different ages

RV感染可能因地區(qū)、溫度、海拔、氣壓、降雨量或季節(jié)氣候影響而存在差異，但均有可能引起流行，較寒冷的季節(jié)RV感染較多[13]。牛源RV感染導(dǎo)致犢牛腹瀉，繼發(fā)感染大腸桿菌、冠狀病毒、牛病毒性腹瀉病毒等細(xì)菌和病毒病，嚴(yán)重影響犢牛的健康。本研究首次大范圍檢測(cè)了青藏高原4個(gè)省區(qū)牦牛RV血清抗體，表明青藏高原地區(qū)牦牛持續(xù)存在RV感染，豐富了青藏高原地區(qū)牦牛RV血清流行病學(xué)的資料。