王嵩 黃思捷 郤慶

摘 要 查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻進行分析發(fā)現(xiàn)，目前含黃芪的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷的含量測定方法較多，其中以高效液相色譜法為主，為中藥復(fù)方復(fù)雜成分中定量定性分析提供了有效地幫助。本文對含黃芪的中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷含量的各種測定方法進行綜述。

關(guān)鍵詞 黃芪 中藥復(fù)方制劑 黃芪甲苷 含量測定

中圖分類號：R286； R927.2 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2021）05-0064-05

*基金項目：全國中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項目（國中醫(yī)藥人教函〔2019〕43號）；上海市“醫(yī)苑新星”青年醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)計劃（滬衛(wèi)計人事〔2019〕72號）；上海市衛(wèi)計委科研課題青年項目（20174Y0160）；上海市虹口區(qū)衛(wèi)健委中醫(yī)藥科研項目（HKQ-ZYY-2020-16）

Advances in the determination of astragaloside Ⅳin compound prescriptions containing astragalus*

WANG Song**， HUNAG Sijie， XI Qing***

（Shanghai TCM-Integrated Hospital， Shanghai University of TCM， Shanghai 200082， China）

ABSTRACT There are various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus in domestic and foreign literatures. These methods are mainly involved in high performance liquid chromatography， which can provide effective results for qualitative and quantitative determination of the TCM compound prescriptions. In this article， the various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus are reviewed.

KEY WORDS astragalus； traditional Chinese medicine compound prescriptions； astragaloside Ⅳ； content determination

黃芪是常用的補益類中藥，臨床主要用于氣虛自汗、久咳虛喘、肺氣虛證、脾氣虛弱之中氣下陷及浮腫、瘡瘍潰難斂等癥的治療。近年來的研究發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷對于呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)等疾病有一定的治療作用。現(xiàn)代研究已經(jīng)從黃芪中提取、分離了包括黃酮、皂苷、生物堿類等多種化合物，其中黃芪甲苷是黃芪成分中最主要的活性物質(zhì)。黃芪甲苷在黃芪中的含量較低，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對于黃芪甲苷的含量測定的相關(guān)研究也取得了較大的進步，逐步由薄層法等轉(zhuǎn)向靈敏度更高、分離度更好的高效液相色譜法及超高效液相色譜法等。本文對近年來中藥復(fù)方中黃芪甲苷的含量測定方法做一概述。

1 薄層掃描法

薄層掃描法包括薄層吸收掃描和薄層熒光掃描兩種方法。在各種分析技術(shù)中，因其分析時間短、操作簡便、成本低等優(yōu)點而成為相關(guān)研究的理想選擇[1]。

1.1 補陽還五膠囊

補陽還五膠囊由《醫(yī)林改錯》中補陽還五湯加減而成，由當歸尾、赤芍、川芎、紅花等6味中藥組成。劉世軍等[2]建立硅膠G薄層板，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）10 ℃以下放置過夜的下層溶液展開，選擇530 nm與700 nm兩種波長，有良好的專屬性。線性范圍在0.980～6.860 mg之間，平均回收率為99.49%。3批樣品黃芪甲苷的含量在1.493～1.532 mg/g之間。該方法能有效地控制補陽還五膠囊的質(zhì)量。

1.2 六味補氣膠囊

六味補氣膠囊由黃芪、生曬參等六味中藥組成。周晶[3]采用硅膠G板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）下層溶液為展開劑，檢測波長為510 nm。在0.988～4.940 mg范圍內(nèi)線性良好，平均加樣回收率為98.3%，RSD=1.42%。該方法測得的黃芪甲苷平均含量為2.306 mg/g。解決了末端吸收，紫外檢測不穩(wěn)定，重復(fù)性差的缺點。

1.3 升胃沖劑

院內(nèi)制劑升胃沖劑由黃芪、黨參、陳皮等中藥組成。黃芪為該方的君藥，對其主要成分黃芪甲苷的含量研究能有效地對該制劑進行質(zhì)量控制。張昌文等[4]采用雙波長薄層掃描法（λS=515 nm，λR=700 nm）對升胃顆粒劑中黃芪甲苷進行定量。黃芪甲苷在0.948～4.740 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為96.46%，將0.25 mg/g作為升胃顆粒黃芪甲苷含量測定的最低標準。

1.4 芪黃通秘軟膠囊

芪黃通秘軟膠囊是從醫(yī)院制劑研發(fā)而成的一款中藥6類新藥，由黃芪、首烏等十多味中藥組成。常用于老年性便秘、習(xí)慣性便秘證屬氣血兩虛、大腸失潤者的治療?？椎聭椀萚5]在試用高效液相色譜法效果不理想的情況下采用薄層色譜掃描法，波長λS=515 nm，λR=700 nm，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）作為展開劑。發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷在1.00～5.00 mg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.7%，樣品的平均含量為0.099 mg/粒。

2 高效液相色譜法

2.1 蒸發(fā)光散射檢測（ELSD）

蒸發(fā)光散射檢測主要用于檢測含有弱色團的非揮發(fā)性化合物的定量分析和定性分析，作為非特異性通用檢測器與高效液相色譜聯(lián)用具有較高的分析通量，重復(fù)性好，結(jié)果精確，彌補了常規(guī)紫外檢測無法檢測或只有紫外末端吸收的缺陷。因此HPLC-ELSD聯(lián)用是目前中藥復(fù)方中測定黃芪甲苷含量的主要方法。近年來利用HPLC-ELSD檢測含黃芪中藥復(fù)方制劑中黃芪甲苷含量的情況見表1。

2.2 質(zhì)譜檢測（MS）

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)具有分離效果好、特異性和靈敏度高等優(yōu)點，是最常用的藥物分析方法。中藥成分復(fù)雜、分離困難，色譜法有時很難對中藥成分做出分析檢測。而高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用可避免復(fù)雜的樣品預(yù)處理，同時得到化合物特征結(jié)構(gòu)碎片等信息，尤其適用于含量較低成分的檢測[20]。目前對于黃芪甲苷檢測的質(zhì)譜條件多采用電噴霧離子源，用于定量分析的檢測離子及液相色譜檢測條件會有所不同。使用該方法檢測含黃芪中藥復(fù)方中黃芪甲苷含量見表2。

2.3 電霧式檢測（CAD）

電霧式檢測是基于霧化-氣溶膠的HPLC檢測器，通過將液相洗脫液霧化蒸發(fā)后對溶質(zhì)顆粒進行檢測，主要用于無或者弱紫外吸收的化合物的檢測，解決了電離檢測或蒸發(fā)光散射檢測等在精確度及靈敏度等方面的局限性。

2.3.1 歸脾丸

歸脾丸是臨床治療心脾兩虛、脾不統(tǒng)血所致的心悸、失眠、健忘等疾病的經(jīng)典方，出自《醫(yī)學(xué)六要》。為了更好地控制該復(fù)方的質(zhì)量，保證臨床療效，高海濤等[25]在傳統(tǒng)的HPLC-ELSD法的基礎(chǔ)上，選擇電霧式檢測器，霧化溫度為35 ℃，載氣：N2，壓強63.2 pa，黃芪甲苷含量在0.416～2.496 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為96.4%，為歸脾丸的質(zhì)量控制提供了新方法。

2.3.2 其他中藥復(fù)方制劑

由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜，含量較低不易分離，故常在樣品制備的過程中采用不同的萃取方式，利用電霧式檢測器的高靈敏度等特點進行檢測。廖強等[26]以水飽和正丁醇為溶劑，100 ℃，5 min，循環(huán)3次作為快速溶劑萃取的條件，以HPLC-CAD法對補中益氣丸、通竅鼻炎顆粒、醒腦再造膠囊、玉屏風(fēng)顆粒四種中成藥中的黃芪甲苷含量進行檢測。在26.62～665.5 mg/ml內(nèi)線性良好，回收率為98.80%～100.80%，與藥典方法的結(jié)果差異不大，但檢測效率明顯提高。李效寬等[27]采用在線固相萃取高效液相色譜法，結(jié)合電霧式檢測器，以雙三元液相色譜作為上樣凈化泵和分析泵，測得黃芪甲苷在4.0～80 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為97.6%。

3 超高效液相色譜法

超高效液相色譜（UPLC）柱效速度明顯加快，檢測時間縮短，近年來應(yīng)用越來越廣泛，尤其在中藥復(fù)方研究中有獨特的應(yīng)用價值。使用UPLC-PDA進行定量分析，可同時測定不同結(jié)構(gòu)的多種化合物[28]。

3.1 復(fù)方扶芳藤合劑

復(fù)方扶芳藤合劑屬國家中藥保護品種的保健品口服液。在《中國藥典》中其質(zhì)量控制的方法是測定其有效成分黃芪甲苷的含量。蔣湘等[29]通過建立UPLC-QExactive方法對該制劑中的13個成分進行了分析，測得黃芪甲苷的含量符合《中國藥典》的標準，精密度、重復(fù)性等指標均符合要求。該方法的應(yīng)用能系統(tǒng)、全面地反應(yīng)復(fù)方扶芳藤合劑的質(zhì)量。

3.2 心衰寧顆粒（無糖型）

心衰寧顆粒由黃芪等8味常用中藥組成。曾真等[30]采用Waters超高效液相色譜儀進行檢測。以乙腈-水（32∶68）為流動相，柱溫30 ℃、流速0.5 ml/min的作為檢測條件。黃芪甲苷的回收率為98.45%，三批中試樣品中的含量為0.839～0.888 mg/g。該方法提高了測試效率，為該制劑推向市場提供了質(zhì)量標準依據(jù)。

3.3 漢養(yǎng)生精口服液

漢養(yǎng)生精口服液是由院內(nèi)制劑研發(fā)而成，由黃芪、枸杞等中藥組成，已被列為非物質(zhì)文化遺產(chǎn)，具有提高人體免疫力、抗衰老、抗腫瘤等作用。尚慶霞等[31]采用Waters Acquity UPLC C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.7 mm），以乙腈-0.1%甲酸水溶液（15∶85）為流動相、流速0.2 ml/min 對該制劑中的黃芪甲苷等5種成分進行含量測定。通過電噴霧離子源多反應(yīng)監(jiān)測方式正離子模式檢測離子對m/z 807.3→627.30測定黃芪甲苷的平均含量為37.88 mg/ml，測定結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，實用性強，為該藥的全面質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

3.4 疏肝健脾顆粒

疏肝健脾顆粒由黃芪、熟地黃、枸杞等中藥組成，具有疏肝健脾，調(diào)經(jīng)活血的功效。羅靜霞等[32]采用Agilent Poroshell C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，2.7 mm），乙腈-0.1%甲酸水溶液（40∶60）為流動相，流速0.2 ml/min，進樣量2 ml，柱溫35 ℃，漂移管溫度100 ℃，氮氣2.0 ml/min，所測定的10批樣品中黃芪甲苷含量在1.236～2.576 mg/g之間。較傳統(tǒng)的HPLC法，該研究采用的UPLC-ELSD法洗脫更快，分離效率更高。

3.5 舒筋活血顆粒

舒筋活血顆粒由黃芪、葛根等中藥組成，對頸肩臂疼痛等有一定的療效。為了有效地解決同時檢測黃芪甲苷與葛根素的問題，陳昭等[33]采用UHPLC-MS-MS法進行同時測定，以Agilent Poroshell C18為色譜柱、0.2%甲酸-乙腈（40∶60）為流動相，在4 min內(nèi)洗脫，10批次供試品中黃芪甲苷的平均質(zhì)量分數(shù)為0.028 mg/g，準確性和重復(fù)性均良好。該方法的應(yīng)用解決了含黃芪的中藥復(fù)方制劑在同時檢測含黃芪甲苷等多成分含量時的不便。

4 近紅外光譜法

近紅外光與可見光相比，能穿透生物組織，具有較少的散射和吸收，從而為定量檢測提供了幫助[34]。近紅外光譜（NIRS）技術(shù)是近年來逐步應(yīng)用于各類食品、藥品等定性及定量分析的方法，具有快速、高效、無損、用量低等特點。目前運用于中藥復(fù)方分析的研究較少，而由黃芪、丹參等中藥組成的精芪雙參膠囊是其中之一，其有補氣養(yǎng)陰、活血化瘀、養(yǎng)心安神的功效。傳統(tǒng)的HPLC-ELSD檢測周期較長，蘇婷等[35]采用聲光可調(diào)-近紅外光譜法，首次建立了精芪雙參膠囊混合過程的近紅外光（NIR）在線監(jiān)測模型，黃芪甲苷定量模型的主成分維數(shù)為9，R2為0.954 9，校正均方根偏差（RMSEC）為0.039 2，預(yù)測均方根偏差（RMSEP）為0.042 6，預(yù)測平均值為11.74 mg/g，HPLC-ELSD法實測平均值為11.38 mg/g，平均偏差為3.16%。任緒華等[36]收集了80批次精芪雙參膠囊，運用偏最小二乘法（PLS）建立各指標分析值的NIR多元校正模型，各模型RMSEC為0.062 4，RMSEP為0.010 3，決定系數(shù)（correlation）為0.977 1，實測值與預(yù)測值的偏差為2.02%。結(jié)果都顯示該方法可快速判斷精芪雙參膠囊的混合終點，并能夠快速測定精芪雙參膠囊中黃芪甲苷的含量，可提高其質(zhì)量控制的水平及縮短周期。

5 其他方法

除上述方法外，對于中藥復(fù)方中黃芪甲苷含量測定的研究還利用其它相關(guān)技術(shù)，如反相色譜法、毛細管電泳法、近紅外漫反射光譜法等，在原有檢測方法的基礎(chǔ)上有一定改善，并取得了良好的效果。

6 展望

隨著檢測技術(shù)的不斷進步，對于黃芪甲苷的檢測方法也在不斷改良，伴隨著新型檢測器的不斷出新，操作簡單、重復(fù)性好、靈敏度高等特點是研究者選擇的方向。黃芪是臨床常用的中藥之一，也是眾多中藥復(fù)方制劑的主要組成，檢測技術(shù)的不斷更新將有助于進一步完善這些制劑的質(zhì)量控制和提高。

參考文獻

[1] Parys W， Pyka-Paj？k A， Do？owy M. Application of thinlayer chromatography in combination with densitometry for the determination of diclofenac in enteric coated tablets[J/ OL]. Pharmaceuticals （Basel）， 2019， 12（4）： 183. doi： 10.3390/ ph12040183.

[2] 劉世軍， 趙海峰， 唐志書， 等. 薄層掃描法測定補陽還五膠囊黃芪甲苷的含量[J]. 西部中醫(yī)藥， 2016， 29（1）： 30-32.

[3] 周晶. 薄層掃描法測定六味補氣膠囊中黃芪甲苷的含量[J]. 安徽醫(yī)藥， 2013， 17（1）： 37-38.

[4] 張昌文， 彭宣文. 薄層掃描法測定升胃顆粒劑中黃芪甲苷的含量[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2012， 8（9）： 20-21.

[5] 孔德憲， 劉育強， 趙伯友， 等. 薄層色譜掃描法測定芪黃通秘軟膠囊中黃芪甲苷的含量[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2011， 7（6）： 18-19.

[6] 王瑞芬， 逯小萌. HPLC-ELSD測定艾附暖宮丸中黃芪甲苷的含量[J]. 海峽藥學(xué)， 2019， 31（6）： 58-59.

[7] 張鑫， 楊智峰， 謝志民. HPLC-ELSD法測定腸腑康膠囊A中黃芪甲苷的含量[J]. 實用藥物與臨床， 2018， 21（6）： 686-688.

[8] 劉曉瑜， 華穎婷. HPLC-ELSD法測定復(fù)胃散膠囊中黃芪甲苷的含量[J]. 藥學(xué)研究， 2018， 37（3）： 149-151； 183.

[9] 朱日明， 羅瑜. HPLC-ELSD法測定三草鼻咽清煎膏劑中黃芪甲苷的含量[J]. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2018， 12（7）： 215-216.

[10] 葉繪晟， 唐文均， 龔志強， 等. HPLC法測定泰痹顆粒Ⅱ號中虎杖苷、葛根素、黃芪甲苷含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理[J]. 2018， 29（2）： 184-188.

[11] 谷華， 丁孝良， 孫寶軍. HPLC 法測定玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷及甘露醇的含量[J]. 世界中醫(yī)藥， 2019， 14（4）： 839-843.

[12] 孫婉瑾， 熊義濤， 段雪云， 等. 腦脈通顆粒中黃芪甲苷的含量測定[J]. 山西醫(yī)藥雜志， 2018， 47（22）： 2639-2641.

[13] 孫晨曦， 葛鼎， 王素梅， 等. 香菊顆粒中黃芪甲苷含量測定方法的改進及其與原方成分的一致性研究[J]. 中國藥房， 2019， 30（14）： 1914-1919.

[14] 宋增炫， 鄧映明. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定泌尿排石顆粒中黃芪甲苷的含量[J]. 海峽藥學(xué)， 2019， 31（9）： 92-94.

[15] 鄧紹友， 袁建平， 李玲瑞， 等. HPLC法測定中偏康合劑中黃芪甲苷的含量[J] 中國民族民間醫(yī)藥， 2019， 28（16）： 60-62.

[16] 陳健， 向鵬宇. HPLC-ELSD法測定貞芪扶正顆粒中黃芪甲苷的含量[J/OL]. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘， 2019， 19（32）： 114. doi： 10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.32.079.

[17] 王銀， 邱連建. HPLC-ELSD法同時測定益肺清化顆粒中的黃芪甲苷、桔梗皂苷D和麥冬皂苷D的含量[J]. 天津藥學(xué)， 2018， 30（5）： 11-13.

[18] 袁林， 冉麗娟. HPLC？ELSD法測定芪香益腎顆粒黃芪甲苷含量[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生， 2018， 34（24）： 3777-3778； 3781.

[19] 張承盟， 李瑞明， 繆興龍， 等. HPLC-ELSD法測定芪柏顆粒中黃芪甲苷的含量[J]. 天津藥學(xué)， 2018， 30（2）： 9-11.

[20] Gao SJ， Zhou XL， Lang LW， et al. Simultaneous determination of schisandrin and promethazine with its metabolite in rat plasma by HPLC-MS/MS and its application to a pharmacokinetic study[J/OL]. Int J Anal Chem， 2019， 2019： 3497045. doi： 10.1155/2019/3497045.

[21] 孫樹周， 何燕莉， 溫穎婉， 等. HPLC-MS/MS法同時測定骨疏康顆粒及骨疏康膠囊中6個成分的含量[J]. 藥物分析雜志， 2019， 39（6）： 1086-1092.

[22] 陳劍平， 鄭平， 李中桂， 等. HPLC-MS法同時測定健脾益腎丸中8個成分的含量[J]. 藥物分析雜志， 2017， 37（6）： 962-967.

[23] 梁琨， 孫輝， 安叡， 等. LC-MS/MS法同時測定護心口服液中11種成分[J]. 中成藥， 2018， 40（1）： 105-109.

[24] 張敏新， 王書林， 余宇燕. LC-MS/MS法同時測定益氣補血口服液中4個成分的含量[J]. 福建中醫(yī)藥， 2018， 49（5）： 36-39.

[25] 高海濤， 黃鵬， 劉軍玲， 等. HPLC-CAD法測定歸脾丸中黃芪甲苷的含量[J]. 廣州化工， 2017， 45（17）： 114-116.

[26] 廖強， 王麗麗， 韋日偉. 快速溶劑萃取-電霧式檢測器結(jié)合柱后補償液相色譜在4種中成藥黃芪甲苷測定中的應(yīng)用[J]. 中國藥學(xué)雜志， 2018， 53（6）： 456-459.

[27] 李效寬， 張艷海， 馮天輝， 等. 在線固相萃取法結(jié)合電霧式檢測器測定黃芪及其復(fù)方中黃芪甲苷的含量[J]. 分析化學(xué)， 2014， 42（12）： 1791-1796.

[28] Wang D， Li Q， Liu R， et al. Quality control of Semen Ziziphi Spinosae standard decoction based on determination of multi-components using TOF-MS/MS and UPLC-PDA technology[J]. J Pharm Anal， 2019， 9（6）： 406-413.

[29] 蔣湘， 廖強， 韋環(huán). 復(fù)方扶芳藤合劑中多種成分含量測定[J]. 中藥材， 2019， 42（11）： 2611-2616.

[30] 曾真， 劉杉， 張永萍. UPLC測定心衰寧顆粒（無糖型）中黃芪甲苷的含量[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2018， 14（9）： 32-34.

[31] 尚慶霞， 程偉， 裘罡， 等. UPLC-MS法同時測定古漢養(yǎng)生精口服液中5種化學(xué)成分[J]. 海峽藥學(xué)， 2018， 30（7）： 75-77.

[32] 羅靜霞， 何毅文. UPLC-ELSD法測定疏肝健脾顆粒中黃芪甲苷的含量[J]. 海峽藥學(xué)， 2019， 31（8）： 108-110.

[33] 陳昭， 陳偉韜， 胥愛麗， 等. UHPLC-MS-MS法同時測定舒筋活血顆粒中葛根素和黃芪甲苷的含量[J]. 廣東藥科大學(xué)學(xué)報， 2018， 34（3）： 303-306.

[34] Jones S， Chiesa ST， Chaturvedi N， et al. Recent developments in near-infrared spectroscopy （NIRS） for the assessment of local skeletal muscle microvascular function and capacity to utilise oxygen[J]. Artery Res， 2016， 16： 25-33.

[35] 蘇婷， 姜文月， 李亞東， 等. 聲光可調(diào)-近紅外光譜法快速判斷精芪雙參膠囊的混合終點及測定黃芪甲苷的含量[J].中國藥房， 2018， 29（12）： 1616-1620.

[36] 任緒華， 蘇婷， 姜文月， 等. AOTF-NIR在精芪雙參膠囊黃芪甲苷含量快速分析中的應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)療器械信息， 2018， 24（2）： 15-16； 20.