邵鑫　蔣先虹　王瑞　蒲強(qiáng)紅　劉福

【摘 要】目的：探討體外原代培養(yǎng)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（RA-FLS）中是否存在巨自噬現(xiàn)象以及在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）中的發(fā)病機(jī)制。方法：培養(yǎng)原代RA-FLS，以骨關(guān)節(jié)炎（OA）患者膝關(guān)節(jié)滑膜組織中培養(yǎng)的骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（OA-FLS）作為對(duì)照組。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）、蛋白免疫印跡法（Western Blot）分別檢測(cè)2組細(xì)胞中巨自噬標(biāo)志性因子LC3、P62 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平，激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)LC3、P62蛋白的表達(dá)。結(jié)果：從患者膝關(guān)節(jié)滑膜組織中成功分離、培養(yǎng)出RA-FLS與OA-FLS，MTT結(jié)果顯示，RA-FLS增殖活力明顯強(qiáng)于OA-FLS;流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，RA-FLS的細(xì)胞凋亡減少;RT-qPCR、Western Blot結(jié)果表明，RA-FLS與OA-FLS相比，LC3 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平升高、P62 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）;激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示，RA-FLS中LC3表達(dá)更高，P62表達(dá)更低。結(jié)論：RA-FLS中LC3 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平明顯增高，P62 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平顯著降低，提示RA中巨自噬水平活化，這可能是導(dǎo)致RA-FLS出現(xiàn)凋亡抵抗，增殖活性明顯高于OA-FLS的潛在原因。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕;骨關(guān)節(jié)炎;滑膜成纖維細(xì)胞;巨自噬;LC3;P62

Proliferation and Expression of Macroautophagy in Synovial Fibroblasts of Rheumatoid Arthritis

SHAO Xin，JIANG Xian-hong，WANG Rui，PU Qiang-hong，LIU Fu

【ABSTRACT】Objective：To investigate the existence of macroautophagy in rheumatoid arthritis synovial fibroblasts（RA-FLS）in vitro and its pathogenesis.Methods：Primary RA-FLS were cultured，and OA-FLS were used as a control group.MTT was used to detect cell proliferation activity;flow cytometry was used to detect cell apoptosis;RT-qPCR and Western Blot were used to detect the relative expression levels of LC3，P62 mRNA and protein in the two groups;and laser confocal microscopy was used to detect the expression levels of LC3 and P62.Results：RA-FLS and OA-FLS were successfully isolated and cultured from synovial tissue of knee joint.MTT results showed that the proliferation activity of RA-FLS was significantly stronger than that of OA-FLS.Flow cytometry results showed that the apoptosis of RA-FLS was reduced;RT-qPCR and Western Blot results showed that compared with OA-FLS，the relative expression levels of LC3 mRNA and protein of RA-FLS were higher，and P62 protein of RA-FLS was lower.The difference was statistically significant（P < 0.05）.Laser confocal microscopy showed that LC3 expression was higher and P62 expression was lower in RA-FLS.Conclusion：The relative expression levels of LC3 mRNA and protein in RA-FLS were significantly increased，while the relative expression levels of P62 mRNA and protein in RA-FLS were significantly decreased，suggesting that the level of macroautophagy was activated in RA，which may be the potential reason for the apoptosis resistance and proliferation activity of RA-FLS being significantly higher than those of OA-FLS.

【Keywords】 arthritis，rheumatoid;osteoarthritis;synovial fibroblasts;macroautophagy;LC3;P62

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）主要病理特征為滑膜增生、血管翳形成及軟骨破壞，最終可致殘疾和死亡。國內(nèi)調(diào)查結(jié)果顯示，RA等關(guān)節(jié)疾病和腦血管病是我國兩大主要致殘?jiān)騕1]。近年來，隨著對(duì)本病認(rèn)識(shí)的加深和新治療方法的出現(xiàn)，其預(yù)后得到明顯的改善，但總預(yù)后仍不容樂觀，RA的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全明確[2]。巨自噬過程在自身免疫性疾病中的作用逐漸成為研究熱點(diǎn)，大量研究表明巨自噬在RA發(fā)病機(jī)制、病程進(jìn)展中占有關(guān)鍵性地位[3]。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（RA-FLS）是一種以腫瘤樣方式異常增殖的細(xì)胞，細(xì)胞活性增強(qiáng)，凋亡減少，導(dǎo)致滑膜異常增生，這在RA的發(fā)病機(jī)理中起關(guān)鍵作用[4]。巨自噬通過形成雙膜囊泡（稱為自噬體）而發(fā)生，是一個(gè)“自食”過程，該過程中有一系列自噬相關(guān)蛋白共同參與周密調(diào)控，此過程維持了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)平衡[5]。近年來，巨自噬在RA中發(fā)揮的作用受到廣泛關(guān)注，有研究發(fā)現(xiàn)，巨自噬與RA的發(fā)病相關(guān)，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探索[6]。通常情況下，自噬是在應(yīng)激條件下促進(jìn)細(xì)胞存活的一種調(diào)節(jié)方式[7]。本研究檢測(cè)巨自噬標(biāo)志性因子P62、LC3在RA-FLS中的表達(dá)水平，初步探討RA的發(fā)病機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 對(duì)象與資料 收集川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨科住院部RA患者的膝關(guān)節(jié)滑膜組織，培養(yǎng)原代RA-FLS。同時(shí)收集骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）患者的膝關(guān)節(jié)滑膜組織，分離、培養(yǎng)原代骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（OA-FLS）作為對(duì)照。本研究獲得川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均知情并同意參與。

1.2 主要儀器 倒置顯微鏡（上海OLYMPUS公司）;超微量紫外分光光度計(jì)（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）;全波長(zhǎng)全自動(dòng)酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司）;LightCycler96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（瑞士羅氏公司）;凝膠成像系統(tǒng)（法國Vilber Lourmat公司）;脫色搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.3 主要試劑 胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基（美國Gibco公司）;青鏈霉素（美國Hyclone公司）;Ⅱ型膠原酶（美國Sigma公司）;MTT（上海碧云天生物科技有限公司）;PCR引物合成（生工生物工程上海股份有限公司）;RIPA蛋白裂解液、苯甲基磺酰氟（北京索萊寶科技有限公司）;一抗稀釋液（上海碧云天生物科技有限公司）;Trizol（美國Ambion公司）;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國QIAGEN公司）;脫脂奶粉（北京索萊寶科技有限公司）;PVDF膜（美國Cell Signaling Technology公司）;鼠抗人β-actin單克隆抗體（成都ZenBioScience公司）;兔抗人LC3單克隆抗體、兔抗人P62單克隆抗體（美國Cell Signaling Technology公司）;辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗、辣根過氧化物酶標(biāo)記的鼠抗（成都ZenBioScience公司）;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（美國Thermo Fisher公司）;FITC標(biāo)記的兔抗、TRITC標(biāo)記的兔抗（成都ZenBioScience公司）;Annexin V / FITC凋亡檢測(cè)試劑盒（南京凱基生物科技有限公司）。

2 方 法

2.1 原代細(xì)胞培養(yǎng) RA與OA患者的滑膜組織取出后，立即放入無菌磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中帶入超凈工作臺(tái)，用無菌剪剪成1 mm3體積的小塊，加入3倍體積4 mg·mL-1的Ⅱ型膠原酶，放入37 ℃孵箱中消化4 h，過200目無菌篩網(wǎng)，轉(zhuǎn)移到25 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。取第3～7代較純的RA-FLS與OA-FLS用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞RA-FLS與OA-FLS，消化離心后用完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞懸液密度至2×104個(gè)·mL-1，每孔接種100 μL

于96孔板，時(shí)間梯度為1，2，3，4，5，6，7 d。另設(shè)空白對(duì)照組（無細(xì)胞組）扣除背景影響，每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，四周用PBS補(bǔ)充，防止加樣孔液體揮發(fā)過快導(dǎo)致差異;過夜待細(xì)胞貼壁成形后棄去原培養(yǎng)基，按時(shí)間梯度分別檢測(cè)細(xì)胞的增殖活力，未檢測(cè)孔每隔3 d換液1次;每孔加入5 mg·mL-1的MTT溶液20 μL，置孵箱中繼續(xù)孵育4 h;棄液，每孔加入DMSO溶液150 μL，避光溶解10 min;用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在570 nm波長(zhǎng)處的吸光度（OD值）。細(xì)胞增殖活力（%）=[（給藥組細(xì)胞OD值-空白組OD值）/（對(duì)照組細(xì)胞OD值-空白組OD值）]×100%。

2.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞RA-FLS與OA-FLS，消化離心后用完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞懸液密度至1×105個(gè)·mL-1，接種于6孔板中，每孔2 mL。過夜待細(xì)胞貼壁，用PBS洗滌后收集細(xì)胞，加入標(biāo)記熒光素AnnexinV-FITC 5 μL混勻后，加入PI染色試劑5 μL，混勻后室溫避光反應(yīng)5 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)LC3、P62 mRNA的表達(dá)水平 細(xì)胞接種同2.3，用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。根據(jù)RNA濃度檢測(cè)的結(jié)果，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，根據(jù)試劑說明進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)。PCR擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃反應(yīng)5 s，60 ℃反應(yīng)30 s，72 ℃反應(yīng)20 s，40個(gè)循環(huán)?！鳌鰿T=△CT[CT（對(duì)照組目的基因）-CT（對(duì)照組內(nèi)參基因）]-△CT[CT（實(shí)驗(yàn)組目的基因）-CT（實(shí)驗(yàn)組內(nèi)參基因）]。內(nèi)參β-actin和目的基因序列見表1。

2.5 Western Blot檢測(cè)LC3、P62蛋白的表達(dá)水平 細(xì)胞接種及處理同2.3、2.4，用蛋白裂解液充分裂解細(xì)胞中的蛋白至少30 min，BSA法測(cè)定蛋白濃度，金屬浴95 ℃變性蛋白10 min，然后進(jìn)行SDS-PAGE蛋白凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉，孵育一抗，孵育二抗，顯影成像，結(jié)果用IMage J分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism 6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 MTT檢測(cè)結(jié)果 倒置顯微鏡下分別觀察

RA-FLS與OA-FLS的細(xì)胞形態(tài)，原代滑膜細(xì)胞簇集生長(zhǎng)，傳至第3代后細(xì)胞較純，分散式生長(zhǎng)，均為長(zhǎng)梭形，可見RA-FLS比OA-FLS更為細(xì)長(zhǎng)。見圖1。MTT結(jié)果顯示，RA-FLS在1～3 d時(shí)生長(zhǎng)速度最快，5～7 d基本達(dá)到增殖平衡，OA-FLS細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯低于RA-FLS。見圖2。

3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，RA-FLS組凋亡率為（6.4700±1.8474）%，OA-FLS組為（11.7500±1.3452）%，2組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

3.3 RT-qPCR結(jié)果 RA-FLS與OA-FLS均存在LC3 mRNA、P62 mRNA的表達(dá)，RT-qPCR結(jié)果顯示，RA-FLS組LC3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于OA-FLS組（P < 0.05）;RA-FLS組P62 mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯低于OA-FLS組（P < 0.05）。見表2。

3.4 Western Blot結(jié)果 RA-FLS與OA-FLS均存在LC3蛋白、P62蛋白的表達(dá)，Western Blot結(jié)果顯示，RA-FLS組LC3-Ⅱ蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯低于OA-FLS組（P < 0.05）;RA-FLS組P62蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著高于OA-FLS組（P < 0.05）。見表3。

3.5 激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果 激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果顯示，DAPI藍(lán)色熒光代表細(xì)胞核，F(xiàn)ITC綠色熒光代表LC3蛋白，TRITC紅色熒光代表P62蛋白。與OA-FLS比較，RA-FLS中LC3綠色熒光斑點(diǎn)明顯增多，P62紅色熒光斑點(diǎn)減少，表明自噬途徑被激活。見圖3。

4 討 論

位于滑膜內(nèi)膜層的RA-FLS通過產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-6和IL-8等細(xì)胞因子和有助于軟骨破壞的蛋白酶在RA中起關(guān)鍵作用[8]。此外，RA-FLS參與了骨侵蝕性血管翳的形成和關(guān)節(jié)的血管新生，這些均與RA-FLS的快速增殖、凋亡減少密切相關(guān)[8]。不同RA患者的病情不同，經(jīng)處理后的細(xì)胞株不足以說明RA患者體內(nèi)的實(shí)際病理情況，以原代分離培養(yǎng)的

RA-FLS作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象更具有代表性，本研究通過Ⅱ型膠原酶消化法成功從患者滑膜組織中培養(yǎng)原代滑膜細(xì)胞[9]。筆者首先通過MTT檢測(cè)到RA-FLS的細(xì)胞增殖活力顯著強(qiáng)于OA-FLS，這與SUN等[10-11]的研究結(jié)果一致，提示直接靶向RA-FLS是改善RA疾病進(jìn)程的一種可靠思路。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，與OA-FLS相比，RA-FLS出現(xiàn)凋亡抵抗。

接著，本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，LC3、P62 mRNA的表達(dá)在RA-FLS中顯著增加。LC3常被作為巨自噬的標(biāo)志性因子，P62中LIR結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)識(shí)別并與自噬受體蛋白LC3結(jié)合，保證了巨自噬的正常進(jìn)行。巨自噬是溶酶體吞噬和降解胞漿內(nèi)含物的過程[12]。巨自噬的啟動(dòng)受Unc51樣激酶1復(fù)合物的調(diào)控[13]，其中最關(guān)鍵的步驟是通過微管LC3與磷脂酰乙醇胺的綴合形成自噬體[14]。LC3被半胱氨酸蛋白酶Atg4裂解以產(chǎn)生胞質(zhì)形式的LC3-Ⅰ，在被Atg7激活后，被轉(zhuǎn)移到Atg3，以便與藻紅蛋白的綴合物形式被改變，稱為L(zhǎng)C3-Ⅱ，LC3-Ⅱ是測(cè)試自噬活性的最常用標(biāo)記[15]。進(jìn)一步通過SDS-PAGE和免疫印跡分析后發(fā)現(xiàn)，在RA-FLS與OA-FLS中均檢測(cè)到LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白，LC3-Ⅱ的數(shù)量與自噬小體的數(shù)量密切相關(guān)，可作為自噬小體形成的良好指標(biāo)[16-17]，在RA-FLS中LC3-Ⅱ蛋白的相對(duì)表達(dá)明顯多于OA-FLS，預(yù)示RA-FLS中自噬小體形成增多。自噬體形成后，通過將P62結(jié)合的泛素化底物摻入自噬體中，然后降解為自溶體，P62水平被自噬選擇性降解，并作為自噬通量的讀數(shù)[18]。因此，LC3-Ⅱ水平的增加、P62水平的降低反映了自噬的激活[19]。先前的報(bào)道還顯示，RA或關(guān)節(jié)炎患者的FLS自噬增加，F(xiàn)LS自噬途徑持續(xù)活化[20-22]。本研究顯示，RA-FLS中P62 mRNA及蛋白相對(duì)表達(dá)水平均低于OA-FLS，自噬體形成增加和P62水平降低的組合提示RA中自噬激活;激光共聚焦結(jié)果同樣表明，RA-FLS中LC3蛋白明顯增多，P62蛋白明顯減少，表明RA-FLS中自噬的激活可能是引起其凋亡減少、活性增強(qiáng)的重要因素之一。YANG等[23]也同樣證明了RA-FLS中LC3-Ⅱ的表達(dá)上調(diào)以及P62表達(dá)的降低，表明RA中巨自噬的激活。

綜上所述，RA-FLS中LC3 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平明顯增高，P62 mRNA及蛋白的相對(duì)表達(dá)水平顯著降低，提示RA中巨自噬水平活化，這可能是導(dǎo)致RA-FLS出現(xiàn)凋亡抵抗，增殖活性明顯高于OA-FLS的潛在原因，從自噬著手治療RA，控制滑膜組織異常增生可能是有效的方案。

參考文獻(xiàn)

[1] ORMSETH SR，DRAPER TL，IRWIN MR，et al.Multidimensional model of disability and role functioning in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Care Res （Hoboken），2015，67（12）：1686-1692.

[2] URMAN A，TAKLALSINGH N，SORRENTO C，et al.Inflammation beyond the joints：rheumatoid arthritis and cardiovascular disease[J].Scifed J Cardiol，2018，2（3）：1000019.

[3] ZHU L，WANG HZH，WU Y，et al.The autophagy level is increased in the synovial tissues of patients with active rheumatoid arthritis and is correlated with disease severity[J].Mediators Inflamm，2017（1）：7623145.

[4] GANESAN R，RASOOL M.Fibroblast-like synoviocytes-dependent effector molecules as a critical mediator ?for rheumatoid arthritis：Current status and future directions[J].Int Rev Immunol，2017，36（1）：20-30.

[5] YIN Z，PASCUAL C，KLIONSKY DJ.Autophagy：machinery and regulation[J].Microb Cell，2016，3（12）：588-596.

[6] FAN T，ZHANG C，ZONG M，et al.Hypoxia-induced autophagy is inhibited by PADI4 knockdown，which promotes apoptosis of fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis[J].Mol Med Rep，2018，17（4）：5116-5124.

[7] FU YF，LIU X，GAO M，et al.Endoplasmic reticulum stress induces autophagy and apoptosis while inhibiting proliferation and drug resistance in multiple myeloma through the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway[J].Oncotarget，2017，8（37）：61093-61106.

[8] BARTOK B，F(xiàn)IRESTEIN GS.Fibroblast-like synoviocytes：key effector cells in rheumatoid arthritis[J].Immunol Rev，2010，233（1）：233-255.

[9] 洪永桃.自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對(duì)自噬的影響[D].南充：川北醫(yī)學(xué)院，2015.

[10] SUN Y，SUN XH，LIU ZX，et al.MiR-338-5p suppresses rheumatoid arthritis synovial fibroblast proliferation and invasion by targeting ADAMTS-9[J].Clin Exp Rheumatol，2018，36（2）：195-202.

[11] GUO JL，DU J，F(xiàn)EI D，et al.miR152 inhibits rheumatoid arthritis synovial fibroblast proliferation and induces apoptosis by targeting ADAM10[J].Int J Mol Med，2018，42（1）：643-650.

[12] MIZUSHIMA N.Autophagy：process and function[J].Genes Dev，2007，21（22）：2861-2873.

[13] CAO Y，KLIONSKY DJ.Physiological functions of Atg6/Beclin 1：a unique autophagy-related protein[J].Cell Res，2007，17（10）：839-849.

[14] MIZUSHIMA N，KOMATSU M.Autophagy：renovation of cells and tissues[J].Cell，2011，147（4）：728-741.

[15] VOMERO M，BARBATI C，COLASANTI T，et al.Autophagy and rheumatoid arthritis：current knowledges and future perspectives[J].Front Immunol，2018，18（9）：1577.

[16] KABEYA Y，MIZUSHIMA N，UENO T，et al.LC3，a mammalian homologue of yeast Apg8p，is localized in autophagosome membranes after processing[J].EMBO J，2000，19（21）：5720-5728.

[17] MIZUSHIMA N，YOSHIMORI T.How to interpret LC3 immunoblotting[J].Autophagy，2007，3（6）：542-545.

[18] ICHIMURA Y，KOMINAMI E，TANAKA K，et al.Selective turnover of p62/A170/SQSTM1 by autophagy[J].Autophagy，2008，4（8）：1063-1066.

[19] KOMATSU M，WAGURI S，KOIKE M，et al.Homeostatic levels of p62 control cytoplasmic inclusion body formation in autophagy-deficient mice[J].Cell，2007，131（6）：1149-1163.

[20] YANG R，ZHANG Y，WANG L，et al.Increased autophagy in fibroblast-like synoviocytes leads to immune enhancement potential in rheumatoid arthritis[J].Oncotarget，2017，8（9）：15420-15430.

[21] XU K，XU P，YAO JF，et al.Reduced apoptosis correlates with enhanced autophagy in synovial tissues of rheuma-toid arthritis[J].Inflamm Res，2013，62（2）：229-237.

[22] SHIN YJ，HAN SH，KIM DS，et al.Autophagy induction and CHOP under-expression promotes survival of fibroblasts from rheumatoid arthritis patients under endoplasmic reticulum stress[J].Arthritis Res Ther，2010，12（1）：R19.

[23] YANG R，ZHANG Y，WANG L，et al.Increased autophagy in fibroblast-like synoviocytes leads to immune enhancement potential in rheumatoid arthritis[J].Oncotarget，2017，8（9）：15420-15430.

收稿日期：2020-09-14;修回日期：2020-10-30

基金項(xiàng)目：四川省衛(wèi)計(jì)委項(xiàng)目基金（18ZD009）

作者單位：1.樂山市人民醫(yī)院，四川 樂山 614000;2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，四川 南充 637000

通信作者：劉福 四川省南充市順慶區(qū)文化路63號(hào)，nslf91@163.com，13890760097