曾祥素，歐陽(yáng)波

蒲地藍(lán)消炎口服液由蒲公英、黃芩、板藍(lán)根、苦地丁4味中藥組成，具有清熱解毒、抗炎消腫的功能，臨床應(yīng)用廣泛，全國(guó)一二三級(jí)醫(yī)院覆蓋率達(dá)71%[1]。其主要用于癤腫、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎、手足口病等，早期單用可替代抗生素，中期聯(lián)合抗生素增強(qiáng)療效，長(zhǎng)期使用降低抗生素耐藥性[2]。目前蒲地藍(lán)消炎口服液已經(jīng)鑒定出79種化學(xué)成分并進(jìn)行了藥味歸屬，蒲公英中綠原酸、咖啡酸、菊苣酸等酚酸類成分，苦地丁中紫堇靈等生物堿類成分，板藍(lán)根中表告依春等生物堿類成分和腺苷等核苷類成分，以及黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素、千層紙素A等黃酮類成分為其主要的活性成分[3-4]。2020版《中華人民共和國(guó)藥典》[5]只對(duì)黃芩苷和菊苣酸2種成分進(jìn)行了質(zhì)量控制。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床療效，近年來(lái)研究者對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液的含量測(cè)定方法進(jìn)行了廣泛深入的研究。本文對(duì)近年來(lái)蒲地藍(lán)消炎口服液含量測(cè)定方法進(jìn)行了匯總分析，旨在為全面控制其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供借鑒參考。蒲地藍(lán)消炎口服液含量測(cè)定方法如下：

1 測(cè)定1種化學(xué)成分

吳文華等[6]建立了高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定蒲地藍(lán)消炎口服液中菊苣酸的含量。樣品70%乙醇直接稀釋。色譜柱：Agilent ZORBAX EclipseXDB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈：0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相，流速：1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為326 nm，菊苣酸的線性范圍為0.0338～0.3376 μg(r=0.9999)，平均加樣回收率為98.91%，RSD為1.7%。

阮治綱等[7]使用HPLC法測(cè)定蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸的含量。樣品以5%甲酸的甲醇溶液超聲30 min。色譜柱為 ZORBAX Extend-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇—磷酸氫二鈉緩沖液(23∶77取磷酸氫二鈉1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0)，流速為1.0 ml/min，柱溫40 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為323 nm，進(jìn)樣量10 μl。咖啡酸線性范圍在0.0336～0.6720 μg呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)；平均回收率為99.49%，RSD為0.35%。蔣磊等[8]用HPLC法分析測(cè)定蒲地藍(lán)消炎口服液咖啡酸的含量。樣品5%甲酸的甲醇溶液直接稀釋。色譜柱為Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm，2.5 μm)，流動(dòng)相為甲醇—磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.56 g，加水使溶解成1 000 ml，再加1%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.8～4.0)，流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為323 nm，進(jìn)樣量10 μl，柱溫40 ℃。咖啡酸在線性范圍為8.95～53.7 μg/ml，平均加樣回收率為99.99%，RSD為0.35%。上述研究者的方法對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸含量研究進(jìn)行了有益的探索，但流動(dòng)相使用磷酸鹽相對(duì)容易對(duì)色譜柱、單向閥、柱塞泵造成損壞。

代磊[9]采用HPLC法測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中咖啡酸的含量。樣品5%甲酸50%甲醇溶液超聲處理40 min。色譜柱：Eclipse ODS-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：甲醇—乙腈—0.05%磷酸溶液(8∶7∶85)，流速：1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：323 nm，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果咖啡酸在0.0348～0.348 μg(r=0.9999)內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為97.6%，RSD為1.5%。該研究對(duì)蒲公英主要有效成分咖啡酸的含量測(cè)定提供了較為簡(jiǎn)便的分析方法。

曲楠楠[10]應(yīng)用HPLC法對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液中紫堇靈的含量進(jìn)行了測(cè)定。樣品甲醇超聲30 min。采用C18色譜柱，流動(dòng)相：甲醇—磷酸鹽緩沖液(濃度為0.015 mol/L，pH=6.7)(80∶20)，檢測(cè)波長(zhǎng)：289 nm，流速：1.0 ml/min，進(jìn)樣量10 μl，柱溫：30 ℃。在該檢測(cè)條件下，紫堇靈的線性范圍為0.2004～1.002 μg(r=1)，平均加樣回收率為99.50%，RSD為0.1%，樣品10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。該方法可操作性強(qiáng)、樣品處理較簡(jiǎn)便，對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液中苦地丁藥材的質(zhì)量控制提供了借鑒。

2 同時(shí)測(cè)定2種化學(xué)成分

蘇萬(wàn)福等[11]采用HPLC法同時(shí)測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液黃芩中的黃芩苷和蒲公英中的菊苣酸含量。樣品加乙腈—水(20∶80)直接稀釋。色譜柱：Agilent Zorbax SB-Pheny1(75 mm×4.6 mm，3.5 μm)，流動(dòng)相：水—乙腈—甲醇—磷酸(75∶15∶10∶0.2)，流速梯度洗脫，柱溫：40 ℃，波長(zhǎng)326 nm，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果黃芩苷在90.58～1449.3 μg、菊苣酸在5.475～54.75 μg濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，(黃芩苷r=0.9999、菊苣酸r=0.9998)。黃芩苷和菊苣酸平均回收率分別為99.72%、99.38%，RSD分別為0.92%、0.99%?，F(xiàn)行藥典黃芩苷和菊苣酸是分別采用2種分析方法，而且菊苣酸單針進(jìn)樣分析時(shí)間長(zhǎng)達(dá)65 min。而本研究實(shí)現(xiàn)了用一種方法同時(shí)測(cè)定2種成分，全部檢測(cè)時(shí)間23 min，可降低生產(chǎn)分析成本。

陳世雄等[12]通過(guò)UPLC(超高效液相色譜)法同時(shí)分析了蒲地藍(lán)消炎口服液黃芩中的黃芩苷和蒲公英中的菊苣酸含量。樣品加乙腈—水(1∶3)直接稀釋。色譜柱Waters Xbridge C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫30 ℃，波長(zhǎng)326 nm，乙腈—0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，進(jìn)樣量10 μl。結(jié)果表明，黃芩苷在90.59～1449.36 μg濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)，菊苣酸在5.48～54.85 μg濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998)，黃芩苷和菊苣酸平均回收率分別為105.887%、99.033%，RSD分別為1.03%、1.11%。與現(xiàn)行藥典相比，此方法也縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，可提升產(chǎn)品的生產(chǎn)控制力度。

劉德勝等[13]運(yùn)用HPLC法測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中綠原酸和咖啡酸的含量。樣品75%甲醇直接稀釋。色譜柱為Waters SμnfireTMC18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈—0.4%磷酸水溶液(9∶91)，檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm，柱溫為室溫。綠原酸和咖啡酸分別在濃度14.7～3 750.0 ng/ml，68.4～4 376.0 ng/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r2分別為0.9974和0.9984)，平均加樣回收率分別為101.6%，101.1%。RSD都為1.3%。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中君藥蒲公英清熱解毒的成分綠原酸和咖啡酸的含量，對(duì)君藥蒲公英質(zhì)量的進(jìn)一步控制具有參考價(jià)值。

張學(xué)東等[14]建立了同時(shí)測(cè)定蒲地藍(lán)消炎口服液中綠原酸和咖啡酸含量的RP-HPLC法。樣品50%甲醇直接稀釋。色譜柱為Inertsil ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈—0.04%磷酸水溶液(15∶85)，柱溫35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm。實(shí)驗(yàn)表明，綠原酸和咖啡酸在質(zhì)量濃度為4.0～19.0 μg/ml時(shí)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程分別為Y=37434.0X-45435.1(r=0.9996)、Y=111260X-152136(r=0.9998)。平均回收率分別為99.0%(RSD=1.65%)、100.1%(RSD=1.78%)。本法對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液中綠原酸和咖啡酸的含量測(cè)定再次提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3 同時(shí)測(cè)定5種化學(xué)成分

姜夢(mèng)華等[4]通過(guò)體外抗炎活性為基礎(chǔ)結(jié)合多指標(biāo)篩選了黃芩苷、漢黃芩素、腺苷、菊苣酸和紫堇靈5種成分作為蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量標(biāo)志物并進(jìn)行了含量測(cè)定。色譜柱為Agilent SB C18，流動(dòng)相為甲醇—0.1%磷酸水，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μl。實(shí)驗(yàn)表明，各方法學(xué)考察結(jié)果均符合要求，所測(cè)三批樣品5個(gè)質(zhì)量標(biāo)志物的含量都較穩(wěn)定。本研究創(chuàng)新性的提出了囊括蒲地藍(lán)消炎口服液全部4味藥材的質(zhì)量標(biāo)志物，并測(cè)量了標(biāo)志物的含量，更能全面反映蒲地藍(lán)消炎口服液質(zhì)量。

4 同時(shí)測(cè)定6種化學(xué)成分

吳婷等[15]使用UPLC-MS-MS法測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中野黃芩苷、黃芩苷、綠原酸、漢黃芩素、黃芩素和咖啡酸6種成分的含量。樣品50%甲醇直接稀釋。色譜柱為Phenomenex Luna C8(50 mm×2.0 mm，3 μm)，流動(dòng)相為甲醇—0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，體積流量為200 μl/min，進(jìn)樣量2 μl，柱溫35 ℃。質(zhì)譜采用電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行負(fù)離子掃描。各測(cè)定成分分別在0.205～2.054、0.414～4.140、0.134～1.335、0.109～1.088、0.541～5.410、0.339～3.390 μg/ml的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r≥0.9994。平均加樣回收率96.25%～101.79%，RSD均<3.5%。此方法整個(gè)進(jìn)樣過(guò)程僅需6 min，大大縮短了進(jìn)樣時(shí)間，做到了快速高效、靈敏準(zhǔn)確，為更好地質(zhì)控蒲地藍(lán)消炎口服液提供了依據(jù)。

5 同時(shí)測(cè)定7種化學(xué)成分

董自波等[16]采用HPLC法測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液黃芩中的黃芩苷、漢黃芩素、腺苷、咖啡酸、綠原酸、菊苣酸和紫堇靈7種成分含量。樣品50%甲醇直接稀釋。采用Phenomenex Luna C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇—0.1%三氟乙酸水溶液梯度洗脫，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣量10 μl，50%甲醇直接稀釋。各成分分別在161.3～1613、0.726～7.260、4.092～40.92、2.212～22.12、2.324～23.24、38.56～385.6、1.816～18.16 mg/L的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。r≥0.9996。平均加樣回收率98.73%～102.1%，RSD均<2.6%。該研究首次覆蓋了蒲地藍(lán)消炎口服液全部4味組方藥材成分的含量測(cè)定、對(duì)全面控制蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有參考價(jià)值，但整個(gè)進(jìn)樣時(shí)間100 min，分析時(shí)間較長(zhǎng)。

6 同時(shí)測(cè)定8種化學(xué)成分

朱粉霞等[17]建立UPLC法同時(shí)測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中腺苷、表告依春、咖啡酸、黃芩苷、千層紙素A苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素8種成分的含量。樣品50%甲醇超聲30 min。色譜柱為Acqμity BEH C18(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動(dòng)相為甲醇—0.1%甲酸梯度洗脫，流速0.3 ml/min，柱溫30 ℃，波長(zhǎng)為275 nm。結(jié)果各被測(cè)成分分別在1.22～122.40、0.41～41.20、0.45～45.40、12.03～1203、0.82～81.80、1.01～100.60、0.99～39.40、0.61～60.60 μg/ml的線性濃度范圍呈良好的線性關(guān)系，r≥0.9971。此法快速、準(zhǔn)確，這對(duì)化學(xué)成分復(fù)雜的中成藥的分離分析上具有明顯優(yōu)勢(shì)，這對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了方向與依據(jù)。

7 同時(shí)測(cè)定12種化學(xué)成分

高文雅等[18]應(yīng)用UHPLC-QqQ-MS法14 min內(nèi)同時(shí)測(cè)定了蒲地藍(lán)消炎口服液中漢黃芩苷、黃芩苷、漢黃芩素、白楊素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇靈、紫堇靈、原阿片堿、水楊酸、尿嘧啶、腺苷12種成分的含量。樣品加入純水溶液稀釋然后離心取上清液。色譜柱為Agilent Extend C18(150 mm×3.0 mm，3.5 μm)；流動(dòng)相為甲醇—0.1%甲酸水溶液梯度洗脫；柱溫40 ℃，流速0.3 ml/min，進(jìn)樣量2 μl。質(zhì)譜為電噴霧離子化源，動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，正、負(fù)離子交替模式檢測(cè)。上述檢測(cè)成分分別在0.06224～16.24、33.95～530.4、0.01364～3.558、0.001157～0.3024、0.001199～0.3130、0.01464～3.821、0.0007395～0.03859、0.06083～3.174、0.002443～0.6374、0.02180～1.138、0.02299～6.000、0.006046～1.578 mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r2≥0.980平均加樣回收率94.6%～106.9%。研究人員使用UHPLC-QqQ-MS法所測(cè)成分覆蓋了蒲地藍(lán)消炎口服液全部4種組方中藥，樣品處理簡(jiǎn)便，靈敏度高，檢測(cè)快速全面，對(duì)全面控制蒲地藍(lán)消炎口服液的質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。

綜上所述，對(duì)蒲地藍(lán)消炎口服液含量的測(cè)定主要集中在各單味藥的特征性成分，其中咖啡酸、綠原酸、黃芩苷、漢黃芩苷、腺苷、紫菫靈是研究蒲地藍(lán)消炎口服液質(zhì)控的主要成分。為保證蒲地藍(lán)消炎口服液療效均一穩(wěn)定，研究能同時(shí)覆蓋全部4味組方藥材的指標(biāo)活性成分的含量測(cè)定至關(guān)重要，而不只是同時(shí)檢測(cè)多個(gè)化學(xué)成分表象的提升其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。因此篩選真正能反映蒲地藍(lán)消炎口服液內(nèi)在品質(zhì)的藥效基礎(chǔ)物質(zhì)并積極應(yīng)用新的檢測(cè)技術(shù)和方法進(jìn)行質(zhì)控，才能更加有效控制蒲地藍(lán)消炎口服液質(zhì)量。