吳維宇 汪 力 張雪蓮 黎 軍

原發(fā)性胃癌是中國(guó)消化道常見腫瘤，由于人口老齡化等原因，原發(fā)性胃癌的發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)，對(duì)符合適應(yīng)證的患者及時(shí)行手術(shù)治療是延長(zhǎng)生存時(shí)間的有效方式[1-2]。隨著原發(fā)性胃癌患者手術(shù)治療的增加，有研究發(fā)現(xiàn)病情相似患者的遠(yuǎn)期生存結(jié)局存在較大差異[3-4]，推測(cè)存在某些影響預(yù)后的重要因素。Han等[5]的研究顯示miR-515-3p可能是參與胃癌發(fā)生的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。本研究探討了血清miR-515-3p與原發(fā)性胃癌患者病情及手術(shù)后生存結(jié)局的內(nèi)在聯(lián)系，旨在為原發(fā)性胃癌患者的預(yù)后預(yù)測(cè)、治療方案?jìng)€(gè)體化等提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年1月至2015年1月在成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院接受胃癌手術(shù)治療的130例原發(fā)性胃癌患者作為原發(fā)性胃癌組，其中男性67例、女性63例，年齡41～78歲，平均年齡為(56.84±9.17)歲，術(shù)前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)20～26 kg/m2，平均BMI為(23.03±2.87)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性胃癌，為首次確診并接受手術(shù)治療；(2)術(shù)前未曾接受新輔助化學(xué)治療；(3)能遵照醫(yī)囑接受系統(tǒng)治療、臨床資料完整；(4)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他原發(fā)性惡性腫瘤；(2)妊娠或哺乳期女性；(3)合并嚴(yán)重傳染性疾病、乙醇和藥物濫用、精神病史等可能影響治療過程及治療結(jié)局的其他疾病。病例脫落標(biāo)準(zhǔn)：(1)未按照預(yù)定方案完成治療；(2)拒絕隨訪或隨訪期間失聯(lián)；(3)隨訪期間因其他原因?qū)е滤劳觥?30例患者均完成隨訪。另選擇同期在本院進(jìn)行體檢的100名健康志愿者作為正常對(duì)照組，其中男性51例，女性49例，年齡39～77歲，平均年齡為(56.17±10.85)歲，BMI 21～26，平均BMI為(23.18±2.39)kg/m2。原發(fā)性胃癌組與正常對(duì)照組的性別、年齡、BMI等基礎(chǔ)資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 血清miR-515-3p水平測(cè)定

原發(fā)性胃癌組和正常對(duì)照組均于入組時(shí)即抽取空腹外周靜脈血5 mL，2 000 r/min離心10 min，留取上層血清標(biāo)本，凍存于-80 ℃冰箱中備用。miR-515-3p水平的具體測(cè)定步驟是：加入TRIzol提取總RNA，采用Bio-Rad680型酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司)測(cè)定其濃度和純度，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TOYOBO公司)將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以U6作為內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化定量，引物序列見表1。使用定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)試劑盒進(jìn)行基因擴(kuò)增，反應(yīng)條件是95 ℃ 10 min、95 ℃ 20 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，共42個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，以2-△△Ct計(jì)算miR-515-3p基因的相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

1.3 臨床病理特征評(píng)價(jià)

納入性別、年齡、腫瘤最大直徑、Lauren′s分型、TNM分期、分化程度、局部浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移這8項(xiàng)臨床病理特征進(jìn)行比較。

1.4 隨訪及終點(diǎn)事件明確

對(duì)于原發(fā)性胃癌組患者，術(shù)后采用電話、門診復(fù)診等形式進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，以2020年1月1日或該時(shí)間點(diǎn)前患者死亡作為隨訪終點(diǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料的兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的兩組間比較采用卡方檢驗(yàn)，不同血清miR-515-3p水平胃癌患者的預(yù)后比較采用Kaplan-Meier生存曲線，血清miR-515-3p水平對(duì)胃癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值分析采用受試者工作特征(ROC)曲線，原發(fā)性胃癌患者預(yù)后的影響因素采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的血清miR-515-3p水平比較

原發(fā)性胃癌組和正常對(duì)照組的血清miR-515-3p水平分別為0.66±0.11、0.46±0.09，前者顯著高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 原發(fā)性胃癌患者血清miR-515-3p水平與臨床病理特征的關(guān)系

不同性別、年齡、腫瘤最大直徑、Lauren′s分型的原發(fā)性胃癌患者的血清miR-515-3p水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。不同TNM分期、分化程度、局部浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)性胃癌患者的血清miR-515-3p水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 原發(fā)性胃癌患者血清miR-515-3p水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清miR-515-3p水平預(yù)測(cè)原發(fā)性胃癌患者預(yù)后的ROC曲線

截至隨訪終點(diǎn)，130例原發(fā)性胃癌患者共有56例(43.08%)死亡。經(jīng)ROC曲線發(fā)現(xiàn)，血清miR-515-3p水平預(yù)測(cè)原發(fā)性胃癌患者隨訪期內(nèi)死亡的最佳截?cái)嘀禐?.67，ROC曲線下面積(AUC)為0.790(95%CI：0.714～0.865)，對(duì)應(yīng)的敏感度、特異度分別為71.62%、64.29%。見圖1。

圖1 血清miR-515-3p水平預(yù)測(cè)原發(fā)性胃癌患者預(yù)后的ROC曲線

2.4 不同血清miR-515-3p水平的原發(fā)性胃癌患者的預(yù)后比較

以根據(jù)ROC曲線約登指數(shù)計(jì)算出的血清miR-515-3p水平(0.67)為界，將130例原發(fā)性胃癌患者分為高表達(dá)組(79例)和低表達(dá)組(51例)。Kaplan-Meier生存曲線顯示，miR-515-3p低表達(dá)組的預(yù)后優(yōu)于miR-515-3p高表達(dá)組(P<0.05)。見圖2。

圖2 不同血清miR-515-3p水平原發(fā)性胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲線

2.5 原發(fā)性胃癌患者預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析

以血清miR-515-3p水平、TNM分期、分化程度、局部浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移作為自變量進(jìn)行原發(fā)性胃癌預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，結(jié)果顯示血清miR-515-3p水平較高、TNM分期較高、分化程度較低、局部浸潤(rùn)深度較大、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是原發(fā)性胃癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表3 原發(fā)性胃癌患者生存預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析

3 討論

原發(fā)性胃癌的治療方案主要根據(jù)患者的臨床病理特征確定，早期實(shí)施手術(shù)治療對(duì)患者預(yù)后改善具有決定性作用。然而，接受相同治療方案的患者的預(yù)后存在差異，若能早期篩查患者的治療后死亡風(fēng)險(xiǎn)，并對(duì)治療方案進(jìn)行個(gè)體性優(yōu)化、可能有助于治療后胃癌患者的生存時(shí)間延長(zhǎng)、病死率降低等。越來越多的證據(jù)表明微RNA(miRNA)異常表達(dá)在包括胃癌在內(nèi)的惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。李偉等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miR-181高表達(dá)、miR-133a低表達(dá)，兩者均可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展，且影響了患者的預(yù)后。何春華等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的血清miR-93-5p水平升高，且與臨床分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，在胃癌診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)中具有重要價(jià)值。miR-515-3p于2019年首次被發(fā)現(xiàn)在原發(fā)性胃癌患者的癌細(xì)胞及血漿中異常高表達(dá)，初步提示其可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展，但其對(duì)患者預(yù)后的影響尚不明確[5]。國(guó)內(nèi)尚未見miR-515-3p相關(guān)的臨床研究報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比，原發(fā)性胃癌組的血清miR-515-3p水平明顯升高，與既往研究結(jié)論吻合。進(jìn)一步分析血清miR-515-3p水平與原發(fā)性胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TNM分期較高、分化程度較低、局部浸潤(rùn)深度較大、合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的血清miR-515-3p水平較高。TNM分期、分化程度、局部浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是判斷大多數(shù)腫瘤惡性程度的重要指標(biāo)[8-10]，上述結(jié)果再次佐證了血清miR-515-3p高表達(dá)對(duì)原發(fā)性胃癌患者病情的促進(jìn)作用，其具體作用機(jī)制不明，有待后續(xù)深入研究。

目前原發(fā)性胃癌患者的手術(shù)治療預(yù)后并不十分理想，部分患者在術(shù)后短時(shí)間內(nèi)死亡[11-12]，多數(shù)研究認(rèn)為這是一個(gè)多因素作用的結(jié)果，但尚缺乏有效手段將高死亡風(fēng)險(xiǎn)患者在術(shù)前篩查出來。鑒于血清miR-515-3p水平與原發(fā)性胃癌患者病情進(jìn)展的緊密聯(lián)系，推測(cè)其可能在患者死亡風(fēng)險(xiǎn)篩查中具有一定的價(jià)值。本研究采用ROC曲線進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)血清miR-515-3p水平預(yù)測(cè)原發(fā)性胃癌患者隨訪期內(nèi)死亡的最佳截?cái)嘀禐?.67，AUC為0.790(95%CI：0.714～0.865)，對(duì)應(yīng)的敏感度、特異度分別為71.62%、64.29%。上述結(jié)果提示血清miR-515-3p水平在術(shù)前預(yù)測(cè)原發(fā)性胃癌患者術(shù)后遠(yuǎn)期死亡風(fēng)險(xiǎn)方面具有一定價(jià)值，有可能成為TNM分期相同患者的病情進(jìn)一步分級(jí)、治療方案?jìng)€(gè)體化的重要參考指標(biāo)。

本研究對(duì)原發(fā)性胃癌患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪并分析死亡結(jié)局，發(fā)現(xiàn)miR-515-3p低表達(dá)組原發(fā)性胃癌患者的預(yù)后更優(yōu)。進(jìn)一步經(jīng)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析證實(shí)，血清miR-515-3p高表達(dá)是原發(fā)性胃癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。上述結(jié)果證實(shí)血清miR-515-3p表達(dá)變化對(duì)原發(fā)性胃癌患者手術(shù)后預(yù)后不良存在直接影響，其可能成為胃癌治療的新靶點(diǎn)，這有待更多基礎(chǔ)研究及臨床實(shí)踐明確。

綜上所述，原發(fā)性胃癌患者血清miR-515-3p水平異常升高，且與臨床病理特征存在緊密聯(lián)系，是患者術(shù)后遠(yuǎn)期死亡的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，且術(shù)前血清miR-515-3p表達(dá)水平對(duì)患者遠(yuǎn)期死亡風(fēng)險(xiǎn)具有早期預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究明確了血清miR-515-3p水平在原發(fā)性胃癌患者病情及預(yù)后方面扮演的重要角色，但也存在不足之處：(1)納入病例數(shù)有限，可能使結(jié)果發(fā)生偏倚；(2)未涉及靶向干預(yù)miR-515-3p對(duì)原發(fā)性胃癌病情的影響等。后續(xù)將完善不足之處，進(jìn)行深入研究。